不同培养基对乙酰螺旋霉素片含量测定的影响

广东省韶关市食品药品检验所（512028）朱兴保 严晓明 王莉蓓

乙酰螺旋霉素为大环内酯类抗生素，《中国药典》2010年版（二部）规定其含量测定方法为抗生素微生物检定法，其中管碟法是目前较常用的方法之一。由于管碟法测定抗生素效价的影响因素较多，除检验者操作技术、抑菌圈的测量、供试品与标准品溶液的配制等人为因素外，培养基的质量也是重要的影响因素之一[1][2]。我国生产培养基已有相当长的历史，但生产出的培养基却参差不齐，为探讨培养基对抗生素微生物检定结果的影响情况，本文对常用的培养基进行了检测分析比对。

附表 采用不同生产厂家及同一生产厂家不同批号培养基的测定乙酰螺旋霉素含量结果

1 仪器与试药

ZY-300Ⅳ多功能微生物自动测量分析仪（北京先驱威锋技术开发公司）；梅特勒托利多XS-105电子天平；隔水式电热恒温培养箱。乙酰螺旋霉素标准品（中国药品生物制品检定所，规格：200mg，批号：130347-200403）；抗生素检定培养基Ⅱ号（7.8～8.0）（北京某厂，批号分别：100616，110201，110910；广东某厂，批号：20110524；青岛某厂，批号：20110111）；枯草芽孢杆菌[ CMCC（B）63 501 ]（中国药品生物制品检定所）；磷酸氢二钠、磷酸二氢钠均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液制备 精密称取乙酰螺旋霉素标准品18.55mg，用10ml乙醇溶解后，加灭菌水制成每1ml中含1000单位的溶液，另取乙酰螺旋霉素片适量，同法制成每1ml中含1000单位的溶液，精密量取上述两种溶液适量，临用前用灭菌磷酸盐缓冲液（pH=7.8）稀释至每1ml中含5单位和10单位的溶液，作为标准品溶液和供试品溶液。

2.2 培养基配制 称取抗生素检定培养基Ⅱ号（7.8～8.0）干粉适量，按说明书配制，用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值使灭菌后为8.0～8.2。

2.3 检验方法 按照《中国药典》2010年版（二部）抗生素微生物检定法（附录XI A）管碟法的二剂量法[3]，以枯草芽孢杆菌为试验菌，以抗生素检定培养基Ⅱ号（7.8～8.0）为检定培养基，在35～37℃中培养16小时后，用ZY-300Ⅳ多功能微生物自动测量分析仪测量抑菌圈直径，按照生物检定统计法中的（2.2）方法进行可靠性测验及效价计算，按乙酰螺旋霉素计算出标示量的百分含量。

2.4 检验结果 分别采用不同厂家及同一厂家不同批号的抗生素检定培养基Ⅱ号（7.8～8.0），检测乙酰螺旋霉素片的含量，比较不同批号间的结果差异，结果见附表。经t检验，乙酰螺旋霉素片含量测定结果，与青岛某厂批号20110111比较P＜0.05，与北京某厂批号100616比较P＜0.05，均有显著差异。

两人采用同一批号培养基，在相同条件下检测乙酰螺旋霉素的含量，各进行六次，比较不同人员测定结果的重现性，结果分别为90.1%，90.6%，90.4%，91.2%，91.5%，90.9%和90.4%，92.0%，91.4%，90.2%，90.3%，91.3%，平均值分别为90.8%和90.9%，经F检验，P＞0.05，结果无显著差异。

3 讨论

结果显示，不同生产厂家与同一生产厂家生产的不同批号的培养基检测结果均有差异，北京某厂批号100616与青岛某厂批号20110111的产品之间平均含量相差为5.4%；北京某厂生产的不同批号培养基测出的结果也有明显差异，其中批号100616与110201产品之间的平均含量相差4.4%。为排除人员实验操作因素，选择不同实验者采用同厂家同批号培养基，在相同条件下检测同一批的供试品，结果表明差异不明显，重现性较好。

目前，培养基除用于药品检验外，还广泛用于医院临床检验、预防医学、动植物检验、微生物学等各领域，但培养基生产厂家较多，以致生产出来的培养基的质量参差不齐，即使同一厂家不同批次的产品也会有明显差别，直接影响到用于含量测定的微生物检定法的准确性，尤其对药检所仲裁或判断边缘产品是否符合规定时加大了难度。因此，建议制定培养基质量控制的国家标准，严格从生产商的产品供应到实验室制备、产品使用、产品销毁和最终产品的质量控制等各方面和各环节作出详细规定，用于保证微生物培养基的质量。