HPLC 法测定前列安通胶囊中盐酸小檗碱的含量

王 媛，崔 彦

前列安通胶囊由黄柏、赤芍等八味中药组成，具有清热利湿，活血化瘀的功效，用于湿热瘀阻证，症见:尿频、尿急、排尿不畅，小腹胀痛等症，临床疗效确切。处方中黄柏为君药，盐酸小檗碱为活性成分。目前文献报道测定方法有薄层扫描法[3]和HPLC法[2]。由于薄层扫描法存在准确性低、重现性差等缺点，因此，本实验采用HPLC 法测定黄柏中的盐酸小檗碱，为有效地控制复方制剂的质量标准提供依据。

1 仪器与试药

仪器:Agilent 1100高效液相色谱仪;MWD紫外检测器;Sartorius BP211D型电子天平;HENGAO-HU10260B型超声仪。试药:盐酸小檗碱对照品购自中国药品生物制品检定所(批号:110713–200208);乙腈(色谱纯);水(超纯水);其余试剂匀为分析纯。前列安通胶囊由连云港市第一人民医院药房提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:X– Terra C18(250×4.6 mm，5 μm)，WATERS公司;流动相:乙腈 －0.5‰磷酸水溶液(27∶73);检测波长265 nm;柱温30℃。

2.2 系统适应性试验 在上述条件下，测定样品中盐酸小檗碱的含量，以盐酸小檗碱峰计算理论塔板数大于6 000，分离度大于2，已达到基线分离。为确保定量分析的准确，在系统实验中盐酸小檗碱的理论塔板数不得低于4 000。

2.3 对照品溶液的制备 取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1 ml含35 μg的溶液，即得。液相图谱见图1。

2.4 供试品溶液的制备 取本品内容物，研细，取约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，密塞，精密加入50%甲醇50 ml，称定重量，超声(功率250 W，频率40 KHz)处理30 min，放冷，称定重量，加50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。液相图谱见图2。

2.5 阴性供试品溶液的制备 按处方比例，除去黄柏药材，相同制备方法制得阴性供试品溶液。进样，记录，结果其他药材对盐酸小檗碱含量测定无干扰。液相图谱见图3。

2.6 标准曲线的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品8.94 mg，置50 ml量瓶中，加50%甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。得浓度为0.1788 mg/ml的标准品储备液，分别精密吸取上述溶液1 ml，2 ml，4 ml，6 ml，10 ml，置100 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。分别取10 μl注入液相色谱仪，记录相应的峰面积。以进样浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，得回归方程 Y=35.949X －15.135，r=0.9998。结果表明，盐酸小檗碱在 17.88 ～178.8 μg/ml范围内呈良好线性关系。

2.7 精密度试验 精密吸取对照品溶液(35.76 μg/ml)10 μl，重复进样6次，测得峰面积，计算 RSD为0.22%(n=6)。

2.8 稳定性试验 取本品(批号:090615)内容物0.1 g，精密称定，按正文含量测定项下黄柏的供试品溶液制备方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液 10 μl，分别第 0、1、2、3、6、12 h进样1次，共进样6次，测定峰面积，计算RSD为1.66%(n=6)。结果表明盐酸小檗碱峰面积在12 h内基本稳定。

2.9 重复性试验 取本品(批号:090615)内容物0.1 g，精密称定5份，按正文含量测定项下黄柏的供试品溶液制备方法制备供试品溶液，测定，结果盐酸小檗碱平均含量为17.01 mg/g，RSD 为 0.31%(n=5)。

2.10 加样回收率试验 取已知含量的本品内容物(批号:090615;含量:17.01 mg/g)0.05 g，精密称定 5 份，分别精密加入盐酸小檗碱对照品溶液(36.8 μg/ml，50%甲醇溶解)25 ml及50%甲醇25 ml，超声处理30 min，放冷，称重，50%甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液，进样，测定。结果盐酸小檗碱平均加样回收率为99.74%，RSD为0.96%。结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

2.11 样品含量测定 取5批前列安通胶囊，按正文含量测定项下黄柏的供试品溶液制备方法制备供试品溶液。分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算含量，结果见表2。

表2 样品中盐酸小檗碱的含量测定结果(n=5)

3 讨论

3.1 提取方法的选择 分别采用甲醇、50%甲醇、乙醇、50%乙醇、水，超声、回流的不同方法对样品进行提取考察，以选择合适的提取方法，结果几种提取方法中以50%甲醇超声提取效果最佳，方法简便可靠。

3.2 流动相的选择 参考中国药典标准[3]对乙腈-磷酸的不同比例进行考察，结果表明乙腈–0.5‰磷酸水溶液(27:73)对样品的分离效果最佳，保留时间适宜。

3.3 结果评价 试验结果表明，本实验所采用测定方法测定盐酸小檗碱，重现性良好，回收率较高，且在该色谱条件下，盐酸小檗碱进样精密度良好，故该法结论可靠，可作为前列安通胶囊的质量控制标准。

[1]甄丽萍，张 波.薄层扫描法测定胃消渴胶囊中盐酸小檗碱的含量[J].黑龙江医药，2004，17(5):321-322.

[2]陈晓军，曹新荣，郭五保，等.HPLC测定胃舒泰胶囊中盐酸小檗碱的含量[J].西北药学杂志，2005，20(6):251-252.

[3]中国药典二部[S].北京:中国医药科技出版社，2010:640.