尿肺炎链球菌抗原检测儿童肺炎链球菌性肺炎的研究

王 青 李文杰

1 山东省青岛市市立医院检验科 266011； 2 青岛妇女儿童医院新筛室

肺炎链球菌是社区获得性肺炎的主因，并且可能是不明原因社区获得性肺炎的重要致病原［1，2］。肺炎球菌性肺炎的病死率高达30%，这取决于菌血症、年龄和潜在性疾病［1］，常见于5岁以下儿童。由于做血培养时肺炎链球菌是苛养菌，营养要求高，所需时间长，阳性率低。但肺炎链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）是一种薄膜免疫层析试验，用于检测人类尿液中肺炎球菌的可溶性抗原，为肺炎链球菌性肺炎提供了一种简便快速的诊断方法，旨在探讨它对血培养阳性的肺炎链球菌的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 研究对象 2011年5月－2012年5月我院儿科5岁以下呼吸道感染的276例患儿中，男152例，女124例。

1.2 标本采集与处理 将所有患儿尿液分别收集在标准容器中。收集后，24h内测定，室温保存（15～30℃）。此外，将尿液在2～8℃保存或冷冻保存，可存放14d。硼酸可用作防腐剂。对所有患儿分别静脉采血2～5ml置于血培养瓶中，然后放入自动血液培养仪内，按照仪器要求进行培养鉴定。

1.3 仪器与试剂 尿肺炎链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法），试剂由Binax NOW公司（英维利斯医疗器械北京有限公司），BD血培养瓶，全自动血液培养仪（美国BD公司）。

1.4 实验原理 肺炎链球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）是一种薄膜免疫层析试验，用于检测人类尿液中肺炎球菌的可溶性抗原。兔抗肺炎链球菌抗体被吸附到硝酸纤维素膜上作为样本线，对照抗体作为另一条线吸附到同一膜上。结合有可视粒子的兔抗肺炎链球菌抗体和抗种抗体干燥结合到惰性纤维支持物上，形成的结合物垫和带条纹的膜结合到一起组成检测条。检测条和放拭子标本的孔位于一个书形铰链状检测卡的两侧。

1.5 检测方法 将患儿尿液和液体对照品放至室温（15～30℃），轻轻混匀。测试前从包装袋中取出检测卡平放。将1根Binax样本拭子浸入尿液中，完全浸没拭子头。取出时拭子不能滴水，将拭子插入检测卡底部的孔中。向底部的孔中加A试剂3滴，立即揭去黏附衬封闭检测卡，15min后在窗口判断结果。阳性结果（取决于标本中存在的抗原浓度）在15min读数时，会检测出样本线和对照线。阴性结果，15min读数时只出现对照线，表示标本中未检测到肺炎链球菌抗原。如果对照线未出现，不管标本线出现与否，都视为无效结果。

1.6 统计学方法 采用SPSS13.0软件进行数据处理，率的比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

尿肺炎链球菌抗原与血培养的检测结果：尿肺炎链球菌抗原的阳性率为16.3%（45／276），血培养的阳性率9.4%（26／276），两者有明显差异（P＜0.05）。以血培养经过分离鉴定实验作为诊断儿童肺炎链球菌性肺炎的临床标准［3］，测得尿肺炎链球菌抗原的敏感性、特异性和准确度分别为88.5%（23／26），91.2%（228／250）和90.9%［（23＋228）／276］。结果见表1。

表1 尿肺炎链球菌抗原与血培养的检测结果

3 讨论

肺炎链球菌性疾病（PDs）已成为全球一个重要的公共卫生问题。肺炎链球菌始终是导致婴幼儿脑膜炎、菌血症、肺炎等严重疾病的首要病原菌，也是引起鼻窦炎和急性中耳炎的最常见原因［4］。根据WHO 2005年的估计，全球每年约有160万人死于PDs，5岁以下儿童有70～100万人，其中多数生活在发展中国家［5］，在亚太地区，每小时约有49名儿童死于肺炎球菌性肺炎［6］。肺炎链球菌为链球菌属细菌，是一种常见的菌血症的病原体，由于它可产生自溶酶及对营养的要求高，导致它的分离率不高［7］。通过全自动血液培养仪来培养肺炎链球菌，虽然能提高检测的阳性率，但它要经过分离、培养、鉴定需要2～3d，很难及时满足临床的要求。胶体金法是以尿液为检测对象，特异性、灵敏度较好［8］。对276例患儿检测敏感性为88.5%，特异性为91.2%和准确度分别为90.9%，说明此法的真实性良好，稳定性较强。肺炎链球菌阳性组尿肺炎链球菌阳性率88.5%明显高于阴性组8.8%，而且胶体金法测定尿肺炎链球菌抗原所用的检测样本为尿液，尿液的收集、储存和运输都非常方便，试验简便、灵敏、快速，15min出结果，大大节省时间，为临床诊断儿童肺炎球菌性肺炎提供了一定的参考价值，同时争取了更多宝贵的治疗时间。

［1］Plouffe JF，Moore SK，Davis R.Serotypes of Streptococcus pneumoniae blood culture isolates from adults in Franklin County〔J〕.Ohio J Clin Microbiology，1994，32：1606－1607.

［2］RuizGonzalez A，Falguera M，Nogues A，et al.Is Streptococcus pneumoniae the leading cause of pneumonia of unknown etiology？A microbiologic study of lung aspirates in consecutive patients with community－acquired pneumonia〔J〕.Am J of Med，1999，106：385－390.

［3］陆权，余宏杰，王辉.儿童肺炎链球菌性疾病防治技术指南（2009年版）〔J〕.中华儿科杂志，2010，48（2）：104－109.

［4］Yao KH，Yang YH.Streptococcus pneumoniae diseases in Chinese children：past，present and future〔J〕.Vaccine，2008，26：4425.

［5］WHO.Pneumococcal conjugate vaccine for childhood immunization－WHO position paper〔J〕.Weekly Epidemiol Rec，2007，82：93－104.

［6］UNICEF／WHO.Pneumonia：The forgotten killer of children〔J〕.Weekly Epidemiol Rec，2008，83：1－16.

［7］Petti CA，Woods CW，Reller LB.Streptococcus pneumoniae antigen testusing positive blood culture bottles as an altemative method to diagnose pneumococcal bacteremia〔J〕.J Clin Microbiol，2005，43（5）：2510－2512.

［8］张颖华，王传清，郭奕芳，等.尿肺炎链球菌抗原诊断肺炎链球菌感染的研究〔J〕.中国预防医学杂志，2002，3（1）：49－50.