子痫前期胎盘组织中STOX1的表达及意义

姬立芹 陈文萍 范文勇 李大志

[摘要] 目的 探讨STOX1在子痫前期发病中的作用及临床意义。 方法 免疫组化检测正常妊娠及子痫前期胎盘组织中STOX1蛋白的表达情况；Western blot检测胎盘组织中STOX1蛋白的表达水平。 结果 STOX1蛋白主要表达于绒毛的合体滋养细胞和细胞滋养细胞，与正常妊娠组相比，子痫前期胎盘组织中STOX1蛋白的表达水平明显升高（P＜0.05），重度子痫前期组胎盘组织中STOX1蛋白的表达明显高于轻度子痫前期组（P＜0.05），轻度子痫前期组胎盘组织中STOX1蛋白的表达明显高于正常妊娠组（P＜0.05）。 结论 STOX1与子痫前期的发病密切相关，在子痫前期的发生、发展中可能起到重要作用。

[关键词] STOX1；子痫前期；胎盘

[中图分类号] R714.56???[文献标识码] A???[文章编号] 2095-0616（2012）15-31-03

Expression and significance of STOX1 in placenta of preeclampsia

JI?Liqin??CHEN?Wenping??FAN?Wenyong??LI?Dazhi

Department of Obstetrics and Gynecology,People's Hospital of Bao'an District in Shenzhen,Shenzhen 518101, China

[Abstract] Objective To investigate the expression of STOX1 protein in placenta of preeclampsia. MethodsImmunohistochemistry staining assay and western-blot was used to observe the expression of STOX1 protein in placental tissue from 67 cases of preeclampsia and35 cases of nomal pregnancy. Results STOX1 protein were mostly found in syncytiotrophoblast and cytotrophoblast.The expression level of STOX1 protein in preeclampsia placenta was significantly higher compared with the normal pregnancy group(P＜0.05).The expression level of STOX1 protein in group of sever preeclampsia was significantly higher compared with the mild pre-eclampsia group(P＜0.05),the expression level of STOX1 protein in group of mild preeclampsia was significantly higher than that in the group of normal pregnany(P＜0.05). Conclusion STOX1 may have a positive relationship with the degree of hypertensive disorder complicating pregnancy and play an important role in the pathogenesis and development of this disease.

[Key words] STOX1;Preeclampsia;Placenta

子痫前期是妊娠期高血压疾病的常见类型，严重影响母婴健康，病因及发病机制迄今不明，为研究的重点。子宫-胎盘缺血被认为是发病的重要原因之一，也是重要的病理改变。目前认为子宫-胎盘循环的有效建立与滋养细胞能否正常浸润胎盘床有关。STOX1是新发现的与子痫前期密切相关的母系印迹基因。研究表明，其在胎盘的生长发育中扮演着重要角色[1]。本研究通过免疫组化和Western blot技术检测子痫前期及正常妊娠组织中STOX1蛋白的表达情况，为进一步阐明子痫前期的发病机制提供理论基础。

1?资料与方法

1.1?一般资料

选取2010年10月～2011年10月笔者所在医院住院分娩的67例子痫前期患者作为观察组，同期住院分娩患者3 200例中随机抽取35例血压正常且蛋白尿阴性的患者作为对照组。子痫前期的诊断、分类标准均按照全国统编教材《妇产科学》第7版的标准，其中轻度子痫前期患者34例，重度子痫前期患者33例，正常妊娠分娩患者35例，各组患者均无高血压家族史及慢性肾炎史，年龄和孕周比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2?材料

兔抗人STOX1多抗为Sigma公司产品，辣根过氧化物酶标记山羊抗兔二抗购自加拿大Santa Cruz公司，免疫组化SP试剂盒、DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。BCA蛋白定量试剂盒购自美国Pierce公司。

1.3?方法

1.3.1?免疫组化检测胎盘组织中STOX1蛋白的表达?（1）标本采集：胎盘标本经10%的中性福尔马林液固定后，低温石蜡包埋，制成4μm厚连续切片；（2）采用免疫组织化学二步法检测STOX1在胎盘中的表达，严格按照试剂说明书进行操作。同时以磷酸盐缓冲液（PBS，pH=7.4）替代一抗作阴性对照。（3）结果判定：阳性细胞表现为镜下组织结构清晰，细胞浆着色呈淡黄色，强阳性的地方呈棕黄色，复染后细胞呈蓝色。每张切片随机选5个高倍视野（×400），采用IPP图像分析软件测定阳性产物的平均光密度（OD）值，以此反映STOX1蛋白在胎盘组织中的相对表达量。

1.3.2?Western-blot检测胎盘组织中STOX1蛋白的表达?按蛋白裂解液说明书提取胎盘组织中的总蛋白，样本蛋白按5∶1加入上样缓冲液煮沸变性后待用。取等量蛋白样本加入SDS-PAGE凝胶槽中进行电泳（浓缩胶60 V，20 min，分离胶120 V，60 min）。转至PVDF膜，经5%脱脂奶粉室温封闭4 h，加入1∶5000稀释的抗STOX1一抗，室温孵育3 h，TBST洗3次，加入辣根过氧化酶标记的二抗（1∶1 000），室温孵育1 h，TBST洗3次。加ECL化学发光剂，X线片暗室曝光，常规显影、定影。洗片后用激光扫描仪进行定量分析。以β-actin为内参照物，STOX1与β-actin的条带灰度值的比值表示STOX1蛋白表达水平。

1.4?统计学处理

采用SPSS12.0统计软件进行数据统计学分析，结果以（）表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2?结果

2.1?免疫组化检测胎盘组织中STOX1蛋白的定位及表达

STOX1主要表达于绒毛的合体滋养细胞和细胞滋养细胞，其中子痫前期的染色更强。用IPP图像分析系统测定各组STOX1阳性产物的平均光密度值，重度子痫前期组明显高于轻度子痫前期组，轻度子痫前期组明显高于正常妊娠组，两两比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。见图1、表1。

2.2?Western blot 检测胎盘组织中STOX1蛋白的表达量

与正常妊娠组相比，子痫前期胎盘组织中STOX1蛋白表达量明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。重度子痫前期组患者胎盘组织中STOX1相对蛋白含量（0.67±0.15）与轻度子痫前期组（0.49±0.11）比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。轻度子痫前期组患者STOX1相对蛋白含量明显高于正常妊娠组（0.32±0.15），差异有统计学意义（P＜0.05）。见图2、表2。

3?讨论

子痫前期是以高血压和蛋白尿为主要特征的妊娠期特有的疾病，可以导致严重的并发症，是孕产妇和围生儿死亡的主要原因之一，严重威胁母婴健康。其病因和发病机制复杂，迄今不明。国内外大部分研究集中在其病因和发病机制，目前认为可能与免疫机制、遗传因素、胎盘缺血等因素有关。妊娠期高血压疾病的基本病理变化是全身小动脉痉挛，研究发现子痫前期胎盘血流量较正常妊娠明显减少[2]，表明该疾病的发生与胎盘血流量减少密切相关。近年来随着细胞分子生物学技术的发展，子宫缺血学说得到了新的进展。正常妊娠时胎盘滋养细胞侵入子宫蜕膜有两个过程，第一时期为受精卵种植过程，第二时期为妊娠早中期合体滋养细胞侵入子宫螺旋动脉，逐渐取代血管内皮，使管腔扩大，阻力下降，血流量增加，此生理现象称为血管重铸，以满足胎儿生长发育的需要[3]。若滋养细胞侵入和螺旋动脉重铸不足，则管腔狭窄，导致胎盘缺血缺氧，胎盘发育受阻，此现象称为“胎盘浅着床”，也称为“滋养细胞浅浸润”，目前认为子宫-胎盘缺血原因可能是子宫螺旋动脉生理性重铸过程障碍，导致“胎盘浅着床”和胎盘病理生理改变，进而导致全身血管内皮细胞损伤引起一系列临床症状。STOX1又称为10号染色体上的开放阅读框24，是新近发现的与子痫前期密切相关的母系印迹基因。Van Dijk等[4]研究提出STOX1能控制绒毛外滋养细胞的多倍体化过程，使滋养细胞植入障碍，是子痫前期的一个新的母系印迹基因。Rigourd等[5]发现STOX1与子痫前期诱导的胎盘基因转录修饰具有很高的相关性，表明STOX1可能参与子痫前期的发生发展。STOX1目前已成为子痫前期病因发病机制方面的一个研究热点[6]。

笔者的研究初步发现子痫前期胎盘组织中STOX1蛋白的表达明显高于正常妊娠者，且重度子痫前期组明显高于轻度子痫前期组，表明STOX1蛋白表达增加与滋养细胞浸润能力下降密切相关，可能是胎盘浅着床的原因之一，可能在子痫前期的发病发展中发挥着重要作用[7-8]。其中的信号转导机制，需要进一步研究。

[参考文献]

[1] Van Dijk M，Van Bezu J，Van Abel D，et al.The STOX1 genotype associated with preeclampsia leads to a reduction of trophoblast invasion by alpha-T-catenin upregulation [J].Hum Mol Genet，2010，19（13）：2658-2667.

[2] Sankaralingam S，Arenas I A，Lalu M M，et al.Pre-eclampsia:current understanding of the molecular basis of vascular dysfunction[J].Expert Rev Mol Med，2006，8（3）：1-20.

[3] Kyu-Rae K，Sun-Young J，Ji-Young K，et al.Implantation site intermediate trophoblasts in placenta cretas [J].Modern Pathol，2004，17（4）：1483-1490.

[4] Van Dijk M，Mulders J，Poutsma A，et al.Maternal segregation of the Dutch preeclampsia locus at 10q22 with a new member of the winged helix gene family[J].Nat Genet，2005，37（5）：514-519.

[5] Rigourd V，Chauvet C，Chelbi ST，et al.STOX1 overexpression in choriocarcinoma cells mimics transcriptional alterations observed in preeclamptic placentas[J].Plos One，2008，3（11）：e3905.

[6] 凌少云，程彦君，吴雪琴.早发型重度子痫前期的临床特点及围生结局[J].中国医药导报，2012，9（4）：34.

[7] 辛芳，蔡春霞.以高压氧为主的综合治疗对早发型重度子痫前期患者的效果分析[J].临床合理用药杂志，2012，5（3）：108.

[8] 张秋月，周芸芸.早发型重度子痫前期期待治疗43例临床分析[J].中外医学研究，2011，9（18）：54.

（收稿日期：2012-06-12）