热休克蛋白60对冠心病的诊断价值

马扬 梁丽

热休克蛋白(heat shock protein，HSPs)是一组高度保守且广泛表达的蛋白质分子家族，因其可随多种应激反应如高温、感染等而快速上调，亦被称为应激蛋白(stress protein)。HSP60是其中的一个大家族，近来已成为研究的热点，研究认为HSP60有致动脉粥样硬化作用，并能促进炎症反应释放各种细胞因子从而引起粥样斑块不稳定［1，2］。本文通过测定血清HSP60水平，探讨HSP60水平与冠状动脉病变的发生及严重程度的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2010年12月～20011年5月在我院住院的冠心病患者78例(冠心病组)，所选病例均符合WHO关于缺血性心脏病的诊断标准。其中男45例，女33例;平均年龄(59±6)岁;其中急性心肌梗死(AMI)31例，不稳定型心绞痛(UAP)30例，稳定型心绞痛(SAP)17例，排除：(1)严重或活动性感染性疾病;(2)严重血液性疾病;(3)肝肾功能不全;(4)骨髓移植术;(5)风湿瓣膜性心脏病;(6)严重创伤或肿瘤;(7)近期使用抗氧化、非甾体类消炎镇痛药等;(8)免疫性疾病。选取本院健康体检者70例为对照组，男40例，女30例;平均年龄(51±9)岁。组间年龄、性别比、体重指数、吸烟史、家族史差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法 所有受检者禁食水8 h以上，于清晨抽取空腹静脉血2 ml，4 000 r/min离心15 min分离血清，-80℃保存血清以备集中测定HSP60抗体。实验时吸取上层血清100μl，应用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)测定血清中可溶性HSP60水平，试剂盒由上海西唐生物科技有限公司提供，严格按照试剂盒操作，灵敏度为1.0μg/L。

1.3 统计学分析应用SPSS13.0统计软件，计量资料以±s表示，两组间比较采用t检验，多组样本均数采用单因素方差分析(ANOVA)，组间比较采用dunnett-t检验或q检验，P ＜0.05为差异统计学有意义。

2 结果

2.1 冠心病组患者血清HSP60水平为(3 198±1 215)pg/ml，健康对照者为(396±201)pg/ml，2组差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

2.2 冠心病组各亚型间AMI与UAP组血清HSP60较SAP组明显升高，AMI患者血清HSP60水平亦高于UAP组(P＜0.05)。见表1。

3 讨论

HSP60在进化中高度保守，其主要定位于细胞线粒体内，作为分子伴侣生理状态下，参与新生蛋白质多肽链的正确折叠及装配，并可使未折叠、错折叠失活的多肽链重新折叠产生生物活性，提高细胞对热及其他刺激的耐受性。在应激状态下如冷热、缺血缺氧、糖分损失、组织创伤、游离自由基的作用、微生物感染以及有机毒物、重金属、砷、福等环境因素，都可诱导HSP过度表达或异位表达，作为一种自身抗原被免疫系统识别，激发机体免疫应答或作为一种信号分子在信号转导中起作用。

动脉粥样硬化(AS)被认为是一种免疫炎性疾病，众多研究表明炎症标记物如CRP以及感染肺炎衣原体、巨细胞病毒抗体均AS的发生明确相关，免疫炎性反应是动脉粥样硬化斑块形成的始动因素，同时也是斑块不稳定重要原因之一［3］。研究表明HSP60、LPS、ox2LDL等自身抗原可诱发机体自身免疫反应，其中HSP60是近来最为重视的抗原，由于人类与原核生物HSP60基因序列70%的同源性，应激状态下的血管内皮细胞、平滑肌细胞HSP60表达增多，通过TLR受体信号通路诱导大量的细胞因子如 IL-6、IL-10、TNF-α、E-选择素、ICAM-1、VCAM等，促进炎症反应加速了粥样斑块形成［4］。同时外源HSP60与内源HSP60表位发生交叉反应，机体抗HSP60免疫反应增强，进一步导致血管损伤。

本研究中，冠心病患者较正常对照人群血清HSP60水平明显增高，差异有统计学意义。且不稳定的冠心病患者(AMI，UAP)中，血清HSP60较对照组及SAP者均明显升高。此外，心肌梗死患者血清HSP60亦高于不稳定型心绞痛患者。由此可见，HSP60水平与动脉粥样硬化病变的严重程度成正比，HSP60水平上升可能预测斑块的不稳定性，这与国内外学者研究一致。Zhang等［5］研究发现Hsp60水平升高导致冠心病风险增加，且急性心肌梗塞可导致Hsp60释放。Xiao等［6］的5年随访研究显示高水平的HSP60与早期颈动脉粥样硬化相关，其可能为早期血管炎症的促发因素。因此检测血清HSP60水平将有助于冠心病的诊断，HSP60有望成为CHD的一个新的独立危险因子。

表1 冠心病组与对照组间血清HSP60水平表达情况±s

表1 冠心病组与对照组间血清HSP60水平表达情况±s

注：与对照组比较，*P ＜0.05;与AMI比较，#P ＜0.05;与UAP比较，△P ＜0.05

AMI(n=31) 4 556±925 UAP(n=30) 2 914±492#SAP(n=17) 1 223±396#△

1 Xu Q，Schet G，Perschinka H，et al.serum soluble heat shock protein 60 is elevated in subjcets with atheroscleors is in a genera1 population.Circulation，2000，102：14-20.

2 Hasan A，Sadoh D，Palmer R，et al.The immune responses to human and microbial heat shock proteins in periodontal disease with and without coronary heart disease.Clin Exp Immunol，2005，142：585-594.

3 Wick G，Knoflach M，Xu Q.Autoimmune and inflammatory mechanisms in atherosclerosis.Annu Rev Immunol，2004，22：361-403.

4 Mandal K，Afzal AR，Brecker SJ，et al.Association of serum soluble heat shock protein 60 with toll-like receptor 4 polymorphism and severity of coronary artery disease.Heart，2006，92：683-685.

5 Zhang X，He M，Cheng L，et al.Elevated heat shock protein 60 levels are associated with higher risk of coronary heart disease in Chinese.Circulation，2008，118：2687-2693.

6 Xiao Q，Mandal K，Schett G，et al.Association of serum-soluble heat shock protein 60 with carotid atherosclerosis：clinical significance determined in a follow-up study.Stroke，2005，36：2571-2576.