熏硫对白芷提取物急性毒性的影响

郑光雅，马逾英, 卢晓琳，翟萌，郭沛琳

白芷为伞形科植物白芷Angelica dahurica (Fisch.ex Hoffm.) Benth.et Hook.f.或杭白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.) Benth.et Hook.f. var. formosana(Boiss.) Shan et Yuan的干燥根[1]。具有散风除湿、通窍止痛、消肿排脓等功效。以白芷为原料制备的提取物可代替白芷投料，除药用以外，还广泛应用于食品、保健品、护肤品等。但白芷药材产地加工干燥时均要熏硫，以达到防腐、防霉、增白、便于干燥的目的，而大量研究表明，很多中药材熏硫后化学成分及其含量、药理作用等都有明显的变化，以此为原料制备的提取物，其质量自然受到影响。关于熏硫对白芷香豆素类成分及药理作用的影响，已有研究报道[2~3]，本文通过小鼠急性毒性实验，探讨以熏硫与未熏硫白芷为原料制备的提取物的急性毒性，为其质量评价及应用提供参考依据。

1 实验部分

1.1 实验材料

动物：健康昆明种小白鼠，雌雄各半，雌者无孕，体重18~22 g。由成都达硕生物科技有限公司提供（生产许可证号：SCXK[川]2008-24）。

药品：白芷提取物未熏硫样品，批号为091006；白芷提取物熏硫样品，批号为091011，由国家“十一五”支撑计划课题组提供。每克白芷提取物粉末约相当于3.25~3.57 g白芷药材。

1.2 实验方法

1.2.1 白芷提取物未熏硫样品急性毒性实验（半数致死量实验） 根据预实验结果，取健康昆明种小鼠50只，体重18~22 g，雌雄各半，随机分成5个剂量组，禁食（不禁水）12 h后，一次灌胃给予白芷提取物未熏硫样品供试液，给药剂量分别85.6、68.5、54.9、44.0、35.1 g生药/kg （即组间距为1：0.8），给药容量均为0.4 mL/10g。给药后按常规饲养，观察给药后4小时内动物的反应，连续观察7天，记录动物的体重、外观、皮毛、行为活动、呼吸变化、排泄物、死亡情况等。若动物出现不良反应症状或死亡情况，详细记录不良反应症状的起始时间、严重程度、持续时间、是否恢复等；若有动物死亡，及时进行尸检，任何器官出现体积、颜色、纹理等改变时作组织病理学检查。当实验观察至第7天，存活动物完全恢复正常，死亡率已无变化时，用Bliss统计法计算出LD50及95%可信限，并用RM6240多道生理信号系统分析数据。

1.2.2 白芷提取物熏硫样品急性毒性实验（半数致死量实验） 根据预实验结果，将1.2.1中的5个剂量组的给药剂量分别调整为136.1、108.8、87.0、69.6、55.6 g生药/kg外，其余操作方法同1.2.1。

1.3 实验结果

1.3.1 白芷提取物未熏硫样品急性毒性实验结果及LD50计算 给药后部分小鼠心跳加速，呼吸困难，全身颤抖；其中部分小鼠3~5 min内晕倒，小便失禁，而部分在30~60 min内恢复正常；继续观察7天，健存动物活动正常，体征无异常，大小便、皮毛、呼吸正常，未见其它异常症状，无死亡，体重正常增长；摄食量正常。观察期满处死动物，肉眼观察各组织，均未见异常。另外部分小鼠在1~2天内死亡，各组死亡情况见表1，死亡动物进行尸检，肉眼观察未见变化；用RM6240多道生理信号采集系统中Bliss法计算LD50的值并分析数据，见图1。

表1 白芷提取物未熏硫样品急性毒性实验结果

通过对数据分析得知：LD50(半数致死量)为55.5169；X50 (半数致死对数剂量)为1.7444；SX50 (标准误)为0.0259；LD50的95%可信限(L95)为49.3894～62.4046；回归方程:Y(几率单位)：Y＝-12.2407＋9.8833×log(D)。

1.3.2 白芷提取物熏硫样品急性毒性实验结果及LD50计算 给药后部分小鼠急性毒性反应的症状与1.3.1中基本相似，但出现症状的时间相对较晚，小鼠出现心跳加速，呼吸困难，甚至出现晕倒、小便失禁的时间约为给药后10~20 min。各组死亡情况见表2，死亡动物进行尸检，肉眼观察未见变化；用Bliss法计算LD50的值，并用RM6240多道生理信号采集系统分析数据，见图2。

表2 白芷提取物熏硫样品急性毒性实验结果

通过数据分析得知：LD50(半数致死量)为89.4420；X50 (半数致死对数剂量)为1.9515；SX50 (标准误)为0.0272；LD50的95%可信限(L95)为79.1242～101.1052；回归方程:Y(几率单位)：Y＝-13.5509＋9.5058×log(D)。

1.4 实验结论

单次灌胃给药白芷提取物未熏硫样品LD50为55.5169 g生药/kg，约相当于临床用量的370倍；而白芷提取物熏硫样品LD50为89.4420 g生药/kg，约相当于临床用量的596倍。两者对小鼠急性毒性均属于无毒级，但熏硫后白芷提取物的LD50及95%明显升高，毒性明显降低。

2 讨论

白芷在临床上以治疗各种疼痛见长，其主要活性成分为香豆素类，课题组前期研究表明白芷熏硫后药材中香豆素类成分含量可降低40%~60%，且未显示出明显的镇痛作用[3]。本实验研究发现以熏硫白芷制备的提取物的急性毒性反而较未熏硫白芷制备的提取物低，是否白芷中有效成分亦是毒性成分，熏硫后有效成分及镇痛作用降低的同时，毒性也随着降低，或是其成分发生变化等，有待进一步研究。

[1] 中华人民共和国国家药典委员会. 中华人民共和国药典（一部）[S].北京: 中国医药科技出版社,2010:97.

[2] 王梦月,贾敏如,马逾英,等.不同入药部分及不同加工方法对白芷香豆素类成分含量的影响[J].中药材, 2004,27(11):826.

[3] 马逾英,高颖,邹文莉,等.熏硫川白芷药材对小鼠镇痛作用的影响[J].华西药学杂志,2006,21(6):616.