柠檬总提取物对正常大鼠及SHR血压、血脂影响的实验研究

李军晖，刘晓帅，王果，刘孝林，曾南

柠檬（Citrus limon）又名柠果、洋柠檬、益母果，属芸香科(Rutaceae)柑橘属常绿小乔木。我国栽培的柠檬主要分布在长江以南，以四川栽培最多。四川省资阳市安岳县是柠檬之乡，也是全国唯一的柠檬商品生产基地县。柠檬含有丰富的柠檬酸、Vc 、VB 、VE 、黄酮类、挥发油、橙皮苷、多种矿物质及微量元素等，是一种营养和药用价值都极高的水果，具有杀菌、美容、稳定情绪、提神、润喉、降低胆固醇、预防坏血病、防止肾结石和心血管动脉硬化等功效[1]。本研究以安岳柠檬为研究对象，就其总提取物对正常大鼠及自发性高血压大鼠（SHR）的血压、血脂水平的影响进行了试验研究，以期为安岳柠檬的进一步加工利用提供实验依据。

1 材料

1.1 药物

新鲜柠檬，由资阳市安岳县农业局柠檬办提供。柠檬总提取物，棕色液体分层，浓度50%，批号20100727，由成都中医药大学药学院化学实验室夏厚林教授提供。试验时，采用0.5 %吐温80溶液配制各剂量组药液，浓度分别为0.3 g mL-1、0.18 g mL-1、0.108 g mL-1（即高、中、低剂量组），置4℃冰箱中保存备用。硝苯地平片，规格10 mg，100片/瓶，批号100402，重庆青阳药业有限公司生产。

1.2 试剂

葡萄糖（GLU）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）试剂盒，四川省迈克科技有限责任公司产品，批号分别为0310101、0610131、0610101。

1.3 动物

SD大鼠，SPF级，雌雄各半，体重180～220 g,由四川省医学科学院实验动物中心提供，合格证号：SCXK-川-2008-24。自发性高血压大鼠（SHR），雄性，体重190～250 g；同源WKY大鼠10只，雄性，体重190～250 g，许可证号SCXK（沪）2007-0005，合格证号2007000514882，上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。

1.4 仪器

BL-420F生物机能信号系统，成都泰盟科技有限公司产品；无创血压测定系统，成都泰盟科技有限公司产品；ST-360酶标仪、ST-360洗板机，上海科华实验系统有限公司。

2 方法

2.1 对正常大鼠血压的影响（颈动脉插管法）

取健康SD大鼠，体重180～220g，雌雄各半，按体重分层随机分为5组：溶媒对照、硝苯地平、柠檬提取液高、中、低剂量组，连续灌胃给药21 d。实验当日，动物称重麻醉，分离左侧颈总动脉，行主动脉插管，银针插入四肢皮下，行肢体导联（标准II导联）连接BL-420F生物信号系统，待波形稳定后，记录给药前及末次给药（十二指肠给药）30 min后动物的心率、收缩压、舒张压、平均动脉压，计算变化率，腹主动脉取血，分离血清测定GLU、TC、TG含量。

变化率（降压率）=[（给药前-给药后）÷ 给药前]×100%

2.2 对自发性高血压大鼠（SHR）血压的影响（无创法）

取健康SHR，雄性，实验前大鼠每日固定时间段于固定网套中测定尾动脉血压1次，待大鼠血压稳定后，按体重和血压值（记录给药前血压、心率）随机分组：SHR自身正常对照（同源WKY）、SHR对照、SHR+硝苯地平、SHR+柠檬提取液高、中、低剂量。然后开始每日灌胃给药1次，连续灌胃给药28d。并分别于给药7、14、21、28 d时测定给药后2小时大鼠的血压（一般重复测定3次，每次间隔1min，取其平均值作为测定值）和心率。给药28 d后，测定完血压与心率后，处死动物，取血，分离血清，按试剂盒说明测定血清GLU、TC、TG含量。

3 结果

3.1 柠檬总提取物连续给药21 d对正常大鼠血压、血脂与血糖水平的影响

结果表明，柠檬总提取物连续给药21 d，对麻醉大鼠的血压有降低趋势，其中6.0 g kg-1对平均动脉压有显著降低作用（P<0.05）；各剂量组对大鼠血清TG含量有显著降低作用（P<0.01），血糖与总胆固醇水平影响不明显。见表1、2。

表1 柠檬总提取物给药21 d对正常大鼠血压的影响（x±SD）

表2 柠檬总提取物给药21 d对正常大鼠血清GLU、TC、TG含量的影响（x±SD）

3.2 柠檬总提取物连续给药28 d对SHR血压、血脂与血糖水平的影响

结果表明，柠檬总提取物6.0 g kg-1连续给药21天时，对SHR的收缩压、舒张压及平均动脉血压有降低趋势，其余给药时间点（7、14、28 d），对SHR血压影响不明显。连续给药28 d，6.0 g kg-1、2.16 g kg-1对SHR的血清TG含量有降低作用（P<0.05），对血糖与总胆固醇水平影响不明显。见表3、4。

表3 柠檬总提取物不同给药时间对SHR血压的影响（x±SD）

注：与SHR模型组比较， *P<0.05，** P<0.01

表4 柠檬总提取物连续给药28d对SHR血清GLU、TC、TG含量的影响（x±SD）

4 讨论

有研究报道表明，柠檬果醇提水液有明显增加豚鼠离体心脏冠脉流量、抗小鼠缺氧、降低家兔血压的作用，对犬血压呈现双相反应，先有短暂升压然后降压[2]。为进一步探讨其对血压、血脂的影响，本研究以柠檬之乡安岳的新鲜柠檬为研究对象，采用正常大鼠与SHR，观察其总提取物连续灌胃给予对大鼠血压及血清脂质、血糖水平的影响，以期进一步明确柠檬的降压与降脂保健作用。结果表明，安岳柠檬总提取物连续给药21 d，对麻醉正常大鼠的血压有降低趋势，其中6.0 g kg-1对平均动脉压有显著降低作用（P<0.05），但柠檬总提取物连续给药7、14、21、28 d，无创法观测SHR的血压，发现除6 g kg-1剂量在连续给药21 d时，对SHR的收缩压、舒张压及平均动脉血压有降低趋势外，其余给药时间点对SHR高血压影响均不明显。无论对正常大鼠还是SHR，柠檬总提取物连续给药21 d或28 d，能明显降低大鼠血清甘油三酯含量，但对血糖与总胆固醇水平影响不明显。本实验结果提示，安岳柠檬总提取物具有较明确的降低甘油三酯作用，能改善血脂代谢；其降血压作用则有待进一步考证——对正常麻醉大鼠以十二指肠方式给药能显著降低血压，但对SHR以灌胃方式给药对血压无明显影响，结果的差异推测与给药途径有关，灌胃方式给药可能对其降压成分有所破坏，因此不排除药物可能具有降血压的作用。

近年来，柠檬提取物药理作用的研究主要集中在抗菌、抗病毒方面[3~4]，其次即为其所含化学成分如柠檬苦素、柠檬酸、柠檬烯等的抗肿瘤、抗病原微生物、改善糖代谢的药理研究，然而柠檬的很多保健作用报道其实并非是柠檬总提取物的作用，往往是其单体成分的一些作用，以柠檬总提取物为研究对象的报道较少。安岳柠檬果实及其柠檬油的品质居全国首位，为进一步综合利用开发安岳柠檬，有必要对其降压、降血脂等作用进行实验研究，提供更详实的科学依据。

[1] 高 俊燕,朱春华,李进学,等.柠檬加工综合利用的研究进展[J].亚热带农业研究,2009,5(1):64.

[2] 姚 权瑞,陈柏遐.柠檬果对心血管系统作用的部分研究[J].桂林医学院学报,1990,3(1):12.

[3] 王 玉芝,张向宇,刘剑,等.柠檬提取物抗单纯疱疹病毒实验研究[J].实用口腔医学杂志,2008,24(5):627.

[4] 张 纬,徐建设,孙晓明,等.柠檬提取物对多重耐药金黄色葡萄球菌的抑菌作用[J].天津医科大学学报,2008,14(1):47.