液体维生素在异育银鲫饲料中应用效果研究

吴东峰 宋 霖 王永玲 孔 丽 蔡春芳

（苏州大学医学部基础医学与生物科学学院，江苏苏州 215123）

为了保障养殖动物正常生长和健康，需要向饲料中添加足量的维生素。但维生素是一种对其物理和化学环境相当敏感的生物学活性物质，其稳定性受饲料加工和储存过程中许多因子的影响，包括温度、压力、湿度、摩擦、氧化还原、光照等[1]。制粒过程中温度和压力越高，干燥时间越长，则损失的维生素越多。制粒或膨化后喷涂技术，能够避免或减少这些不利影响。后喷涂用的液体维生素在畜禽饲料中已有应用[2-3]，但在水产饲料中应用效果的研究报道还较少，为此，本文以异育银鲫为对象对此进行初步研究。

1 材料和方法

1.1 饲料

试验饲料以进口鱼粉、豆粕、菜粕、棉粕为蛋白源，以鱼油和豆油为脂肪源，以面粉为糖源配制而成，配方见表1。其中，对照组饲料添加1‰固体维生素预混料，试验组分别添加0.8‰和0.5‰的纳米级液体维生素预混料（纳维素）。固体维生素和液体维生素配方相同，均由上海三智生物技术有限公司提供。对照组向饲料中添加多维后再制粒，并用95℃蒸汽熟化5 min。试验组制粒后用95℃蒸汽熟化5 min，再喷涂纳维素。

1.2 试验鱼

异育银鲫购自苏州市吴江养殖场，为当年池塘养殖鱼种。经一周驯养适应环境后，选取300尾大小均匀、体格健壮的鱼种随机分配到15个100 cm×50 cm×50 cm的PVC水族箱中，每箱20尾。鲫鱼平均初重为(24.3±1.0)g。各试验组按完全随机化配置法分布以避免地理位置的差异造成的试验误差。

表1 试验饲料配方及纳维素在饲料中的添加量(%)

1.3 饲养管理

每种饲料投喂5箱鲫鱼，视鱼的摄食情况调整投喂量，投喂时间分别为8:30、12:30、17:00。所有水族箱在同一半开放式循环养殖系统中，自然光周期，以充分曝气的自来水为水源，每天换水量为总水量的1/3。养殖水经过滤、沉淀后流回蓄水池，经过增氧、控温后由水泵抽回各水族箱。养殖期间水质条件为：水温(25±2)℃，DO＞4.5 mg/l,pH 值 7.5±0.2,NH4+-N(0.25±0.05)mg/l,NO2-N(0.04±0.01)mg/l，硫化物＜0.05 mg/l，各项指标均符合养殖水体要求。共饲养60 d。

1.4 采样与分析方法

1.4.1 样品采集与制备

养殖试验结束后，停止喂食24 h，收集试验鱼，使用MS-222将鱼麻醉，称重。

血清制备：尾静脉抽血，自然凝固后，以3 000 r/min冷冻离心20 min除去血细胞，取上清液即为血清。

黏液制备：用滤纸将鱼体表面的水分吸干，用解剖刀从鱼体背部一侧刮取黏液，称重，加5倍体积0.02 mol/l、pH值7.4的磷酸缓冲液，于玻璃匀浆器中匀浆，以10 000 r/min冷冻离心20 min，弃沉淀，取上清液即为粗酶液。

肝组织酶液制备：迅速取肝胰脏，称重，液氮冷冻后-20℃保存。分析前加5倍体积生理盐水，用FSH-2型可调高速匀浆器在冰浴中匀浆，随后在4℃下以10 000 r/min离心20 min,弃沉淀,取上清液即为粗酶液。

1.4.2 血清生化指标测定

使用全自动血清生化分析仪(CHEMIX-800 Sysmex TRANSASIA)测定丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(CHO)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)以及血糖(Glu)等指标。

1.4.3 SOD活力测定

参照谢卫华（1988）的方法稍作改进，将4.5 ml 50 mmol/l、pH值8.2的Tris-HCl缓冲液(50 ml 0.1 mol/l Tris溶液与22.9 ml、0.1 mol/l盐酸混匀后，加水稀释至100 ml)于25℃保温20 min，然后加入预热的45 mmol/l邻苯三酚10 μl（对照管用10 mmol/l HCl代替），迅速摇匀，倒入光径1 cm的比色杯中，325 nm下，每隔30 s测A值一次。要求自氧化率控制在0.070/min左右。

样品酶活性测定方法与测定邻苯三酚自氧化速率相同，在加入邻苯三酚前加入待测SOD样液。按下列公式计算酶活性：

1.4.4 样品体积肝组织总抗氧化活力（T-AOC）测定

采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒进行测定。

1.5 数据处理

试验结果采用“平均值±标准差”表示，所有统计分析采用SPSS17.0软件，用Duncan's多重比较法分析试验结果的差异显著性，显著水平为0.05。

2 结果

2.1 不同来源维生素对异育银鲫生长性能的影响（见图1）

在60 d的饲养期内，异育银鲫生长和摄食正常。对照组增重率为94.5%，饲料系数为1.82，0.8‰和0.5‰纳维素组增重率有所提高。增重率和饲料系数，各组之间差异不显著。

2.2 不同来源维生素对异育银鲫血清生化指标的影响（见表2）

表2 固体维生素和纳维素对异育银鲫血清生化指标的影响

血清生化指标显示 ALT、AST、CHO、HDL-C 以及Glu差异不显著(P＞0.05)，但TG存在差异，0.8‰纳维素组显著低于对照组（P＜0.05），0.5‰纳维素组与对照组相比差异不显著(P＞0.05)。

2.3 不同来源维生素对异育银鲫抗氧化性能指标的影响（见表 3）

表3 固体维生素和纳维素对异育银鲫血清、黏液和肝SOD活力以及肝T-AOC的影响

血清和肝组织中SOD活力均是0.8‰纳维素组显著高于对照组(P＜0.05)，黏液SOD活力各组间差异不显著。肝组织中T-AOC活力0.8‰纳维素组显著高于对照组(P＜0.05)。0.5‰纳维素组与对照组相比差异不显著(P＞0.05)。

3 讨论

本研究发现，使用0.8‰的纳维素可以显著提高血液和肝胰脏中抗氧化酶活性，降低血清TG水平。而使用0.5‰的纳维素组异育银鲫的生长、抗氧化活力、血清指标都与对照组相比差异不显著。

水产饲料加工过程中，为了改善饲料适口性和糖类可利用性，越来越倾向于采用挤压工艺。但这也导致一些敏感性养分，如维生素[4]受制粒机、膨化机、膨胀器等热加工设备的大量破坏，反而增加了这些成分的补偿添加量，从而增加饲料成本。因此，液体维生素的后喷涂技术得到了大量关注。翟洪玲等[5]报道，后喷涂技术可以显著提高维生素的活性保存率，亦可获得较好的颗粒间均匀性。液体维生素的优点主要表现在可以避免应用过程中的粉尘损失，有利于在饲料中的均匀分布，可以有效避免因高温造成的损失。这可以解释本研究中0.5‰纳维素组与对照组相比差异不显著的现象。

维生素A、C、E等具有抗氧化性质，本试验发现，0.8‰纳维素组抗氧化能力显著高于对照组，应该与这些维生素的存在有关。此外，液体维生素因其颗粒小，比表面积大，扩散迅速，因而更有利于动物的吸收利用。这可能也是0.8‰纳维素组抗氧化力显著高于对照组的一个重要原因。从本试验结果看，0.8‰纳维素组效果优于1‰固体维生素组。

液体维生素后喷涂技术虽然避免了维生素在加工过程的破坏，但由于这些维生素直接喷洒于饲料颗粒表面，直接接触外界环境，因而受光照、湿度等环境因子的影响比较大，其损失速度有待于进一步研究。对于水产动物来说，饲料需投入水中，其溶失也会影响维生素的利用效率。本试验中由于鲫鱼是比较容易驯饲的鱼类，饲料颗粒入水即被食用，因而影响可能较少。但对于抱食的水产动物以及摄食速度比较慢的水产动物，其溶失率也需要研究确认。

[1]葛建东,杨凌.饲料工艺对预混料中维生素的影响[J].饲料研究,1998(1):15-17.

[2]张红岗，韩一超，武守艳，等.纳米级液体型维生素E-硒合剂对羊硒缺乏的营养调控研究[J].中国畜牧兽医文摘,2011,27（2）：139-141.

[3]张雅琴，翟长富.鸡用液体维生素饲喂试验[J].饲料与畜牧：新饲料，1989(4):34-35.

[4]Coelho M.Vitamin Stability in Premixes and Feeds A Practical Approach in Ruminant Diets[J].Proceedings 13th Annual Florida Ruminant Nutrition Symposium,2002:127-145.

[5]翟洪玲,王红英，薛松堂,等.对颗粒饲料真空后喷涂液体维生素的试验研究[J].农业工程学报，2005，21（12）：89-92.