瓜蒌薤白颗粒中多糖的含量测定

鄢海燕，邹纯才

(皖南医学院 1．药剂学与生药学教研室;2．药物分析与药物化学教研室，安徽 芜湖 241002)

瓜蒌薤白颗粒是采用瓜蒌、薤白两味药经提取有效成分制成的冲剂。瓜蒌开胸涤痰，可扩张冠状动脉，提高抗缺氧能力，还可抑制血小板聚集;薤白通阳宣痹，有舒张冠状动脉作用［1］。多糖是瓜蒌和薤白中的活性成分之一［2－3］，其含量在一定程度上反映了瓜蒌薤白颗粒的质量，为此采用硫酸-苯酚显色法［4－7］建立瓜蒌薤白颗粒中多糖的含量测定方法。

1 材料与方法

1．1 材料

1．1．1 仪器 紫外-可见分光光度计(UV-2550，日本岛津公司)，台式高速冷冻离心机(3K30，德国sigma公司)，电子分析天平(AUW120D，日本岛津公司)。

1．1．2 试药葡萄糖对照品(天津一方科技有限公司，含量 ＞99%)，瓜蒌薤白颗粒(自制，批号:20111001，20111002，20111003，20111004，20111 005)，6%苯酚溶液，其他所用试剂均为分析纯。

1．2 方法

1．2．1 溶液的制备

1．2．1．1 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥48 h的葡萄糖对照品10 mg，置100 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0．1 mg/ml对照品溶液。

1．2．1．2 供试品溶液的制备取瓜蒌薤白颗粒1．5 g，精密称定，乙醚超声2次，每次5 min，滤过，残渣加适量水溶解，离心，取上清液于250 ml容量瓶中，加水至刻度。精密量取4 ml，用Sevag法 (三氯甲烷∶正丁醇=4∶1)脱蛋白，样品液与三氯甲烷-正丁醇的体积比为4∶1，分取上清液，精密量取1．0 ml，加 95% 乙醇 3 ml，冷藏，5 000 r/min 离心 30 min，倾去上清液，沉淀依次加乙醚、无水乙醇洗涤3次，挥干，沉淀加水溶解，定容至100 ml，即得。

1．2．2 检测波长的确定 分别吸取一定量的葡萄糖对照品溶液和已处理好的供试品溶液，显色后在305～600 nm波长范围内扫描。结果表明，葡萄糖对照品和供试品的最大吸收峰位一致，均位于490 nm波长处，故本试验选用490 nm作为检测波长。吸收光谱见图1。

1．2．3 标准曲线的制备 精密量取葡萄糖对照品溶液 2、4、6、8、10 ml，分别置 10 ml容量瓶中，加水至刻度。精密吸取1 ml，加6%苯酚水溶液1．0 ml，浓硫酸6 ml，静止10 min，旋涡混合5 min，室温放置20 min，照分光光度法，于波长490 nm处测定吸收度，以蒸馏水按同样显色操作为空白，以测得的吸收度与其对应的浓度计算回归方程为:A=7．16C－0．0124，r=0．9998。结果表明:葡萄糖溶液 0．02 ～0．1 mg/ml

图1 瓜蒌薤白颗粒中多糖与葡萄糖显色后的紫外-可见光谱图1．葡萄糖对照品;2．瓜蒌薤白颗粒中多糖Fig 1 UV-VIS of polysaccharides in Gualou-Xiebai granulesand glucose after color development1． Reference substance of glucose; 2． Polysaccharides in Gualou-Xiebai granules

1．2．4 换算因子的测定 精密称取60℃干燥至恒重的瓜蒌薤白颗粒多糖29．1mg，置100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。精密吸取2ml置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，取1ml，按测定标准曲线同样的方法测得吸收度A为0．255，从回归方程中求出多糖稀释液中葡萄糖浓度为0．0378mg/ml，按下式计算换算因子f，测得f=1．54。

f=w/(C×D)

式中w为多糖的质量(mg);C为多糖稀释液中葡萄糖浓度(mg/ml);D为多糖的稀释倍数。多糖含量测定:按下试计算多糖含量:

多糖含量(%)=CDf/w×100%式中:C为样品溶液的中葡萄糖含量(mg)，D为样品溶液的稀释倍数，f为换算因子，w为样品的重量(mg)。

1．2．5 测定法 精密吸取供试品2．0ml，照标准曲线制备项下自“加6%苯酚水溶液1．0ml起”依法操作，由回归方程计算样品溶液中葡萄糖含量，按多糖含量计算公式计算多糖含量。

1．2．6 精密度试验 精密吸取葡萄糖对照品溶液6ml，置10ml容量瓶中，加水至刻度。精密吸取1ml，加 6% 苯酚水溶液 1．0ml，浓硫酸 6ml，静止10min，旋涡混合5min，室温放置20min，照分光光度法，于波长490nm处测定吸收度。平行5份，以1ml蒸馏水按同样显色操作为空白，计算其RSD为1．21%，表明仪器的精密度良好。

1．2．7 稳定性试验 取样品(批号:20111001)新制得的供试品溶液 2．0ml，照“1．2．5”项下方法，在0、2、4、8、16、24h 时测定吸光度。计算其 RSD 为1．93%，表明供试品溶液在24h内稳定。

1．2．8 重复性试验 取同一批号的样品(批号:20111001)5 份，每份各2．5g，精密称定，按“1．2．1．2”项下方法制备溶液，照“1．2．5”项下方法测定其吸收度。计算RSD为1．90%，表明重复性良好。

1．2．9 回收率试验 精密吸取1ml已知含量的供试品溶液 6 份，每 2 份分别精密加入 0．2、0．4、0．6 ml的葡萄糖对照品溶液(0．1mg/ml)，照“1．2．5”项下方法测定其吸收度，并计算含量，结果见表1。

表1 加样回收率测定结果Tab1 Resultsoftheaveragerecovery

2 结果

取5批样品，按“1．2．1．2”项下方法制备供试品溶液，照“1．2．5”项下方法测定吸收度，并计算其多糖含量，结果见表2。

表2 含量测定结果Tab2 Resultsofthecontentdetermination

3 讨论

3．1 在多糖的精制过程中采用了Sevag法脱蛋白，再用乙醚、无水乙醇洗涤以除去脂溶性成分。由于有效去除了多种杂质的干扰，使结果更加准确、可靠。葡萄糖对照品和瓜蒌薤白颗粒中多糖的IR图，如图2。

3．2 影响比色法的因素较多，因此在操作过程中要保证一致性，如混合速度、显色温度和显色时间等，以保证实验数据的准确、可靠。

3．3 本实验曾尝试使用硫酸-蒽酮法［8］对瓜蒌薤白颗粒中的多糖进行含量测定，结果也较为理想，但蒽酮试剂不够稳定，在较多样品的测定或稳定性考察的过程中，需要临用前配制，应用较为不便。为此，本实验最终采用硫酸-苯酚法。在用硫酸-苯酚法进行瓜蒌薤白颗粒中多糖的含量测定中，为避免苯酚的氧化，需对其进行蒸馏纯化处理，否则测定结果将会收到影响，在使用的过程中应避光保存。

3．4 本方法所需设备简单、试剂易得，在测定的过程中，避免了单糖、低聚糖及其他还原性物质对多糖含量测定的干扰。加样平均回收率为98．04%，RSD=2．80%，方法较为可靠，可用于瓜蒌薤白颗粒中多糖的含量测定。

图2 FT-IR光谱图Fig 2 FT-IR spectrum

［1］ 孙志强，郑冀，代龙．瓜蒌薤白药理作用研究进展［J］．江西中医药，2010，41(11):76 －78．

［2］ 夏新奎，杨海霞，李纯，等．薤白多糖的分离纯化及组成分析［J］．食品工业科技，2010(1):244 －247．

［3］ 夏新奎，张建新．薤白多糖抗氧化活性研究［J］．信阳农业高等专科学校学报，2007，17(4):138 －139．

［4］ 屠婕红，黄佳．瓜蒌皮中水溶性多糖的提取及含量测定［J］．时珍国医国药，2009，20(2):281 －282．

［5］ 于昕雯，张文杰，王岩，等．天仙子多糖含量测定［J］．辽宁中医药大学学报，2011，13(10):246 －248．

［6］ 徐丽媛，李志猛，杨蕾，等．菟丝子多糖含量测定方法的研究［J］．北京中医药大学学报，2011，34(8):548 －551．

［7］ 庄筱葳，刘秀芳，毛贵元，等．西藏红雪茶多糖含量测定［J］．中国实验方剂学杂志，2012，18(4):103 －106．

［8］ 吕方军，叶国华，许一平，等．北沙参茎叶多糖的含量测定［J］．中药新药与临床药理，2012，23(1):84－86．