肝细胞癌中T淋巴瘤侵袭转移诱导基因1对肝细胞癌患者血管生成的作用

洪水翔 赖日勇 钟玮平 廖光宏 (赣州市立医院消化内科，江西 赣州 34000)

肝细胞癌生物学行为与患者预后相关，且新近研究表明肝细胞癌生长过程常依赖血管生成。T淋巴瘤侵袭转移诱导基因(Tiam)1是一个细胞骨架调节因子，具有多种功能，其与血管生成有关〔1，2〕。本研究关注肝细胞癌中 Tiam1、血管内皮生长因子(VEGF)及CD105表达关系，探讨Tiam1对肝细胞癌血管生成的作用。

1 材料与方法

1.1 临床资料 2004年1月至2007年12月我院行肝癌手术切除后留取的蜡块组织89例为观察组，均符合WHO消化系统肿瘤病理学与遗传学诊断标准，年龄42～76(平均54.5)岁，其中男49例，女40例。手术前均未行放化疗。选取同期行肝癌手术后取距肿物＞5 cm的切缘正常肝组织的蜡块50例为对照组，其中男女各25例，年龄40～75(平均53.7)岁。均经伦理委员会批准，签署知情同意书。两组一般临床特征无明显差别，有可比性。

1.2 Tiam1、VEGF及 CD105蛋白检测 Tiam1、VEGF及CD105均购自武汉博士德生物技术有限公司，应用免疫组织化学技术SP法检测蛋白的表达，严格按说明书操作，严格质控。

1.3 结果判定标准 Tiam1、VEGF阳性表达为细胞质出现棕黄色颗粒，每张切片观察10个具有代表性的视野，根据细胞质染色强度和染色细胞百分率进行评分:基本不着色为0分，着色淡1分，着色深2分;着色细胞占计数细胞百分率＜5%为0分，5% ～25%1分，26% ～50%2分，＞50%3分。将每张切片着色强度得分和着色细胞百分率得分相乘，为其最后得分。0～1分为阴性(-)，2～3分阳性(+)，4分及以上强阳性(⧺)。平均血管密度(MVD)判断方法:确定CD105染色胞丛为一个血管，先在低倍镜下全面观察切片以确定肿瘤内血管密度最高处。再在高倍镜下，以与周围肿瘤细胞和结缔组织成分明显区别的任何一个棕色染色内皮细胞或细胞丛为一个血管，只要结构不相连，其分支结构也作为一个血管计数。记录5个视野内的微血管数，取其平均数为MVD。

1.4 统计学方法 应用SAS 6.12统计软件进行χ2检验、t检验及相关分析。

2 结果

2.1 两组Tiam1、VEGF和MVD表达比较 观察组Tiam1〔64例(71.91%)vs 19例(38.00%)，P ＜0.000 1〕、VEGF表达阳性率〔60例(67.42%)vs 17例(34.00%)，P=0.000 1〕和 CD105标记的MVD(36.08±5.69 vs 17.86±6.53，P＜0.000 1)较对照组明显增高。

2.2 Tiam1、VEGF阳性表达和MVD与肝细胞癌不同临床病理指标的关系 观察组Tiam1、VEGF表达阳性率及MVD在不同肿瘤直径、有无转移及不同Ki67表达组中差异显著(P＜0.05)，见表1。

2.3 肝细胞癌中Tiam1、VEGF和MVD表达的关系 经相关分析，Tiam1和 VEGF表达(r=0.46，P=0.019 5)、Tiam1表达和 MVD(r=0.42，P=0.013 6)、VEGF 表达和 MVD(r=0.44，P=0.024 1)均呈正相关。

表1 观察组Tiam1、VEGF和MVD在不同临床病理特征中表达

3 讨论

肝癌生长和转移依赖于肿瘤内新生血管形成，而VEGF的发现推动了肿瘤血管生成的研究。肝癌是富于血管的肿瘤，且肝组织在形成肿瘤过程中，可产生更多的VEGF。VEGF有强大的基质血管生成促进作用，并可作为蛋白或基因的桥联作用，并成为其作用的关键因子。VEGF是由2条相对分子量为23 000单链组成的蛋白质，能直接作用于血管内皮细胞，引起内皮细胞增殖〔3〕。在研究血管新生的实验中，血管新生的标记物是研究肿瘤血管生成重要依据，CD105又名Endoglin，是转化生长因子-β受体复合物成分一，是与增生有关的内皮细胞膜抗原，CD105是现今被人们认为标记血管生成的最好标记物，在血管新生方面明显优于 CD34、Ⅷ因子等血管标记物〔4，5〕。Tiam1是从鼠的T淋巴瘤中分离出来的一种肿瘤转移诱导基因，Tiam1是一种亲水性胞液蛋白质，富含脯氨酸、谷氨酸、丝氨酸及苏氨酸，有多个潜在的磷酸化位点〔6〕。Tiam1通过激活Rac1进而调节细胞骨架结构重组，影响细胞的形体极化过程，促进细胞运动和迁移，诱导肿瘤细胞侵袭转移和血管生成〔7，8〕。钟大平等〔9〕认为Tiam1参与了 VEGF家族表达的调节作用，并认为Tiam1可能具有促脉管生成作用。

本研究提示Tiam1、VEGF在肝癌发生发展中可能起明显促进作用，CD105作为特异性血管标记物，其在肝细胞癌中表达阳性数量明显高于正常肝组织，提示肝癌中新生血管数量增多，有利于肿瘤生长。Tiam1产物可特异激活与Rac相关的C3肉毒底物，通过Tiam1-Rac信号途径改变肿瘤细胞形态和功能，调节并诱导肿瘤进展，促进血管生成〔10，11〕。本实验结果显示Tiam1、VEGF和MVD均与肿瘤直径、有无转移及不同Ki67表达有关，由于转移及Ki67是与预后相关的重要因素，提示联合检测Tiam1、VEGF表达和MVD可能有助于判断预后。提示Tiam1、VEGF和MVD具有正向协同作用，即Tiam1可能通过诱导VEGF高表达而促进CD105阳性血管生成。此过程中，血管新生使肿瘤能获得足够营养物质，促进肿瘤进展。肝细胞癌中Tiam1、VEGF高表达，共同促进 MVD形成，联合检测 Tiam1、VEGF及CD105可能对判断肝细胞癌预后有重要意义。

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3 刘爱东.流式细胞术检测胃癌中血管内皮生长因子的表达及意义〔J〕.中国中医药咨讯，2011;3(5):219.

4 刘爱东，庞久玲，刘士生.胃癌中基质金属蛋白酶-9和CD105表达关系的研究〔J〕.中国老年学杂志，2009;29(7):886-7.

5 王 玥，刘爱东，庞久玲，等.CD(105)在结直肠腺癌组织中的表达及意义〔J〕.山东医药，2007;47(20):27.

6 刘 莉，许岸高，王 蔚，等.大肠肿瘤中Tiam1的表达及临床意义〔J〕.临床与实验病理学杂志，2006;22(2):137-9.

7 钟大平，彭秋平，边志衡，等.结肠癌组织中Tiam1的表达与淋巴管生成之间的关系〔J〕.中华肿瘤防治杂志，2007;14(8):604-6.

8 Hsueh C，Lin JD，Yang CF，et al.Prognostic significance of Tiam1 expression in papillary thyroid carcinoma〔J〕.Virchows Arch，2011;459(6):587-93.

9 钟大平，李 焱，周进明，等.Tiam1基因沉默降低结肠癌细胞VEGFC-D的表达〔J〕.第三军医大学学报，2008;30(17):1607-9.

10 Liu H，Shi G，Liu X，et al.Overexpression of Tiam1 predicts poor prognosis in patients with esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.Oncol Rep，2011;25(3):841-8.

11 Yang W，Lv S，Liu X，et al.Up-regulation of Tiam1 and Rac1 correlates with poor prognosis in hepatocellular carcinoma〔J〕.Jpn J Clin Oncol，2010;40(11):1053-9.