高效液相色谱法测定芎菊上清丸中栀子苷含量

郜凤香，梁 艳

(河南省医药学校，河南 开封 475000)

芎菊上清丸是由川芎、菊花、黄芩、栀子等16味中药组成的复方制剂，主要疗效是清热解表、散风止痛。处方中栀子所含栀子苷具有镇痛、抗炎、治疗软组织损伤和降低胰淀粉酶等作用。原标准[1]无栀子苷的含量测定。为提高产品质量，笔者采用高效液相色谱法对其进行含量测定，现报道如下。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪岛津LC－10ADvp泵，SPD－10Avp紫外检测器，CS－light色谱工作站;CD－225D型电子天平(Sartorias)。栀子苷(中国药品生物制品检定所，批号为110749－200410);芎菊上清丸为市售品(批号为20110602，110322，110514);试药甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Agela Promosil C18柱(250 mm ×4 mm，5 μm);流动相:乙腈 － 水(17 ∶83)，流速:1.0 mL/min;检测波长:240 nm，柱温:30 ℃ ;进样量:20 μL。

2.2 溶液制备

精密称定栀子苷对照品适量，用甲醇制成质量浓度为0.040 96 g/L的溶液，作为对照品溶液。取本品约1.0 g，剪碎，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇50 mL，称定质量，超声处理(功率400 W，频率40 kHz)60 min，取出，放冷，称定质量，用甲醇补足减失的质量，过滤，精密吸取续滤液10 mL，水浴蒸至近干，加1.0 g氧化铝拌匀，加至中性氧化铝柱(100目，1 g，内径1 cm)中，70%乙醇100 mL洗脱，收集洗脱液置水浴上蒸干，加甲醇溶解并转移至5 mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得供试品溶液。按处方量并以相同工艺制备不含栀子的阴性对照样品，按供试品的制备方法同法操作制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验:取2.2项下3种溶液，按2.1项下色谱条件测定。结果表明阴性样品的其他组分对栀子苷的测定无干扰，高效液相色谱图见图1。

线性关系考察:在拟订的色谱条件下，精密吸取对照品溶液 2，5，10，20，50 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。以对照品峰面积为纵坐标(Y)、对照品的质量浓度为横坐标(X)进行线性回归，得回归方程Y=252 380 X－20 561，r=0.999 8。结果表明栀子苷进样量在 0.081 9 ～2.048 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

精密度试验:精密吸取同一对照溶液 20 μL，连续进样6次。结果峰面积的RSD 为 0.68%(n=6)。

重复性试验:取同一批号(20110602)样品6份，分别按上述方法处理后进行测定。结果栀子苷平均含量为0.051 2%，RSD为1.03%(n=6)。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别在配置后0，2，4，8，12，16，20，24 h 时各进样 1 次。结果峰面积的 RSD 为 0.88%(n=8)，表明栀子苷在供试品溶液中24 h内稳定。

加样回收试验:取已知含量的同批(批号为20110602，含量为0.051 2%)样品 6份，每份约1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，以两份为1组，共3组，每组分别精密加入栀子苷对照品0.409 6，0.819 2，1.228 8 μg，依法制备溶液并测定，计算回收率。结果见表1。

图1 高效液相色谱图

表1 栀子苷加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

精密量取3个批号供试品溶液各2份，依法制备供试品溶液并进行含量测定。结果批号分别为20110602，110322，110514的样品中栀子苷含量分别为 0.051 2%，0.043 9%，0.046 8% 。

3 讨论

取栀子苷对照溶液，在220～260 nm波长范围内扫描，结果在240nm波长处有最大吸收，故选择240 nm为检测波长。曾分别以甲醇、50%甲醇、70%乙醇、95%乙醇为提取溶剂，结果以70%乙醇提取栀子苷含量明显高于其他3种溶剂。对甲醇－水、乙腈－水进行了流动相考察，结果以乙腈－水(17∶83)为流动相时，栀子苷与其他组分能实现完全分离。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:676.