高效液相色谱法测定丹参益坤口服液中芍药苷含量

张 颖，王伟丽，朱明伟

(河南省商丘市食品药品检验所，河南 商丘 476000)

丹参益坤口服液为医院中药制剂[1]，由赤芍、当归、香附、丹参、乳香、没药等16味药组方，具有消炎止痛、活血化瘀的功效。经过多年的临床应用证明，其治疗慢性盆腔炎、输卵管阻塞等症功效显著。现行质量标准中只有薄层色谱鉴别，未收载含量测定项目，不能有效地控制药品质量。赤芍为方中主要药味之一，芍药苷是其有效成分之一。为进一步提高标准，保证制剂的稳定可靠，笔者采用高效液相色谱法对制剂中的芍药苷进行了含量测定，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent1260型高效液相色谱仪;AUW220D型电子天平。芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110736－201035);丹参益坤口服液(商丘市柘城县人民医院提供，批号为110222，110320，110416);乙腈为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[2]

色谱柱:Agilent－C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈－0.1%磷酸溶液(14∶86);检测波长:230 nm;柱温:25℃;流速:1.0 mL/min;进样量:10 μL。

2.2 溶液制备[3]

精密称取芍药苷对照品15.41 mg，置50 mL量瓶中，加稀乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取供试品混匀，精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，加稀乙醇35 mL，振摇提取，加稀乙醇至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。除赤芍外，其他各药按供试品处方量投料按丹参益坤口服液的制备工艺制成阴性对照品，按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验:取上述阴性对照品溶液、对照品溶液、供试品溶液适量，注入高效液相色谱仪，记录色谱图(图1)。结果芍药苷保留时间为6.88 min，理论板数5 000，阴性对照在芍药苷峰处未见明显峰，表明对含量测定无干扰。

线性关系考察:分别吸取对照品溶液(308.2 μg/mL)1.0，5.0，7.5，10.0，15.0，20.0 μL 各进样两次，记录峰面积积分值，以芍药苷峰面积积分值对进样量进行回归，得回归方程为 Y=94.803 X+2.865，r=0.999 9(n=6)。结果表明，芍药苷进样量在3.082 0～61.640 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液10 μL，重复进样6次，按上述色谱条件测定峰面积。结果的 RSD=0.43%(n=6)，表明仪器精密度良好。

重复性试验:精密称取同一批(批号为110320)样品6份，依法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样，测定。结果平均含量为2.237 mg/mL，RSD=1.26%(n=6)，表明方法重复性良好。

稳定性试验:取供试品(批号为 110320)溶液，分别于 0，1，2，4，8，12 h 时各精密吸取 10 μL，按上述色谱条件测定峰面积积分值。结果RSD=1.02%(n=6)，表明供试品溶液在12 h内稳定。

加样回收试验:取已知含量的样品(批号为 110320)，精密量取1 mL，共6份，置100 mL量瓶中，分别精密加入同一质量浓度(0.113 g/L)的芍药苷对照品溶液，依法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样10μL，测定，计算回收率。结果见表1。

图1 高效液相色谱图

2.4 样品含量测定

按上述含量测定方法测定样品中芍药苷含量。结果批号为110222，110320，110416 的样品中芍药苷含量为 2.257 1，2.236 6，2.218 7 g/L，平均 2.24 g/L。

3 讨论

在供试品溶液制备的过程中，也曾考虑到其他样品对赤芍提取以及含量测定的影响，试验设计了甲醇和稀乙醇提取、振摇、超声和回流[3－5]的试验。结果发现用纯甲醇提取效果不理想，样品呈混悬状，吸附严重，提取效果较差，芍药苷仅为1.045 g/L;以稀乙醇回流和超声提取对提取结果影响不大，与振摇提取结果接近。因为本制剂为口服液，提取比较容易，综合考虑以上因素，本试验采用稀乙醇振摇提取的方法。

表1 加样回收试验结果(n=6)

丹参益坤口服液是医院制剂，临床疗效显著，但质量标准一直仅有薄层鉴别，没有定量检测指标，当归是丹参益坤口服液的主药之一，本试验建立了丹参益坤口服液中芍药苷含量的高效液相色谱法，对3批样品进行测定。试验表明，该方法稳定可靠，操作简便，专属性较强，可以作为丹参益坤口服液制剂的质量控制的参考。

[1]豫药制字Z04140014，河南省医疗机构制剂标准[S].

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:96.

[3]凌 明，马安宇.HPLC测定胃肠合剂中芍药苷和黄芩苷的含量[J].中成药，2008，30(9):1 311 －1 113.

[4]陈晓燕，李顺祥.HPLC法测定阿归养血糖浆中芍药苷含量[J].中医药导报，2009，15(3):81－83.

[5]张建业，冯向东.HPLC法同时测定八珍益母丸中芍药苷和甘草酸铵的含量[J].中国药师，2011，14(7):992.