QuEChERS-HPLC法测定植物性食品中氟吗啉的残留量

邵 华，黄玉婷，金茂俊，金 芬，王 静，李 颖

（农业部农产品质量安全重点实验室，中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，北京100081）

QuEChERS-HPLC法测定植物性食品中氟吗啉的残留量

邵 华，黄玉婷，金茂俊，金 芬，王 静，李 颖

（农业部农产品质量安全重点实验室，中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，北京100081）

以苹果、梨、葡萄、橘子、白菜、西兰花、菠菜、胡萝卜、番茄和黄瓜共10种植物性食品为研究对象，建立了植物性食品中氟吗啉残留量的QuEChERS-HPLC检测方法。样品经0.1%冰醋酸乙腈提取，醋酸钠和无水硫酸镁盐析后，取上清液，加入伯仲胺粉分散固相萃取净化，用配有二极管阵列检测器的高效液相色谱测定，外标法定量。氟吗啉在0.1～2mg/L的范围内具有较好的线性关系，氟吗啉在0.1、0.2、0.5mg/kg三个添加水平平均回收率81%～116%，RSD 2.3%～12.1%，定量限为0.05mg/kg。本方法前处理简单、快速，适用于多种植物性食品中氟吗啉残留量测定。

QuEChERS，分散固相萃取，植物性食品，氟吗啉

Abstract：A method for determination of flumorph residues in 10 kinds of vegetable foods was established by QuEChERS and HPLC.The proposed method was successfully applied on apple，pear，grape，orange，cabbage，broccoli，spinach，carrot，tomato and cucumber.Flumorph residues were extracted from samples with acetonitrile containing 0.1%acetic acid and simultaneous liquid-liquid partitioning formed by adding anhydrous magnesium sulfate plus sodium acetate following by a simple cleanup step known by dispersive solid-phase extraction.Mixed powders of primary secondary amine （PSA）were simply mixed with acetonitrile extract.The aliquot was determined by HPLC using external standard method.The average recovery of this method was in the range from 81%to 116%at the spiked level of 0.1，0.2，0.5mg/kg into samples，and the RSDs were in the range from 2.3%to 12.1%.The linearity of method was good from 0.1 to 2mg/L，and LOQ≤0.05mg/kg.This method was simple，rapid，and it was applicable for rapid analysis of flumorph residues in lots of vegetable foods.

Key words：QuEChERS；dispersive solid phase extraction（dispersive SPE）；vegetable foods；Flumorph

氟吗啉是拥有我国自主产权的新型高效杀菌剂，其检测方法主要有液相色谱法[1-6]和液相色谱串联质谱法[7]，前处理方法主要为固相萃取法[1，2，7]。Hu等[1]建立了固相萃取法-液相色谱测定蔬菜、土壤和水中氟吗啉的残留量的方法，闫小军等[2]建立50%氟吗啉可湿性粉剂在烟草及土壤中的残留分析方法，Wang[3]等建立了固相萃取-液相色谱串联质谱测定蔬菜和水果中氟吗啉残留量的方法。但目前尚无任何氟吗啉检测方法标准，因而难以实施对其有效监管，急需一种简单、通用型检测方法，以加速氟吗啉残留检测方法标准化。QuEChERS法是以分散固相萃取法为基础研发的前处理方法[8]，近年在食品安全领域得到广泛应用[9-10]。QuEChERS法不像固相萃取法需要流速控制、活化、淋洗等繁琐步骤，QuEChERS法操作简单、省时、省力、廉价、减少溶剂、减少对环境的污染。工作拟采用QuEChERS法开发一种简单、快速、环境友好、适用于多种植物性食品中氟吗啉残留的检测方法，为植物性食品中氟吗啉残留监管提供技术支持。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

甲醇 美国Fisher公司，色谱纯；伯仲胺（PSA）美国Varian公司；Envi-Carb石墨化碳黑粉（GCB） 美国Supelco公司；佛罗里硅土、无水硫酸镁、醋酸钠、冰醋酸、乙腈 北京化学试剂公司，分析纯；无水硫酸镁 用前在马弗炉650℃灼烧4h，冷却后贮于干燥器中备用；氟吗啉标准品（CAS：211867-47-9） 德国Dr公司，100ng/μL（1mL），纯度97.0%。

Alliance 2695高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器 美国Waters公司；Milli-Q超纯水器 美国Millipore公司；Biofuge Stratos高速离心机 美国Thermo公司；K600食品加工机 匈牙利博朗公司。

1.2 实验方法

1.2.1 样品前处理 将植物性样品取可食部分，用干净纱布轻轻擦去样本表面的附着物，采用四分法取样或直接放入食品加工机中捣碎成匀浆。匀浆放入聚乙烯瓶中于-20℃条件下保存。称取试样前，常温试样应搅拌均匀；冷冻试样应先解冻再混匀。称取10g试样（精确至0.01g），于50mL离心管中，加入10.0mL 0.1%冰醋酸乙腈，振荡，加入4g无水硫酸镁和1g醋酸钠，充分振荡1min，打开塞子放气后，5000r/min离心2min，取2mL上清液于装有0.3g无水硫酸镁和0.1g伯仲胺的10mL离心管中，充分振荡30s，5000r/min离心2min。取上层清液过0.22μm微孔滤膜，置于样品瓶中待测。

1.2.2 高效液相色谱条件色谱柱 C18不锈钢柱（150mm×4.6mm×5μm）；流动相：甲醇∶水（6∶4，v/v）；流速1mL/min；进样量10μL；柱温25℃；检测波长240nm。

1.2.3 标准溶液配制与标准曲线绘制 用乙腈将氟吗啉农药标准品（100ng/μL）稀释成质量浓度分别为0.1、0.2、0.5、1、2.0mg/L的系列标准溶液，置于棕色样品瓶中，-20℃条件下保存。按照上述液相色谱条件测定，以峰面积为纵坐标Y，以质量浓度为横坐标X进行线性回归，得线性回归方程。

1.2.4 样品分析 在相同的液相色谱条件下，分别将标准溶液和待测液注入高效液相色谱仪中，以保留时间定性，以待测液峰面积与标准溶液峰面积比较定量。

2 结果与分析

2.1 前处理方法的优化

以苹果、菠菜为研究对象，以GCB、PSA、佛罗里硅土为净化材料，采用分散固相萃取法进行0.5mg/kg氟吗啉添加回收实验。在苹果添加回收实验过程中，使用GCB净化时回收率偏低，使用PSA和佛罗里硅土时回收率分别为96.5%、89.1%。在菠菜添加回收实验过程中，使用GCB时回收率稍好，PSA和佛罗里硅土时回收率好。结果表明，GCB对氟吗啉农药吸附较强，但是在色素含量高的环境下，GCB优先吸附色素，使得氟吗啉回收率有所提高。考虑到方法的通用、统一性，最终确定以回收率高的PSA为净化材料。

2.2 色谱条件的优化

按照上述前处理条件，进行苹果、菠菜0.5mg/kg氟吗啉的添加回收率实验，HPLC分析，比较甲醇∶水比例分别为5∶5、6∶4和3∶7的色谱图，以尽可能保证氟吗啉与杂质分离而又缩短氟吗啉出峰时间为原则，最终确定流动相比例为6∶4，氟吗啉标准溶液色谱图如图1所示。

图1 0.5mg/kg氟吗啉标准溶液色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of 0.05mg/kg flumorph standard solution

2.3 方法学考察

2.3.1 线性范围 按照上述液相色谱条件测定氟吗啉标准系列溶液，结果表明，氟吗啉在0.1～2mg/L的范围内峰面积与质量浓度具有较好的线性关系，线性回归方程Y=343000x-106100，R2为0.999738。为了降低基质干扰，首先按照上述样品前处理过程制备苹果、梨、葡萄、橘子、白菜、西兰花、菠菜、胡萝卜、番茄和黄瓜共10种样品基质空白溶液，然后将氟吗啉农药标准品分别用样品基质空白溶液定容，分别配制质量浓度为0.1、0.2、0.5、1、2mg/L的10种基质系列标准溶液，按照上述色谱条件测定，以峰面积为纵坐标Y，以质量浓度为横坐标X进行线性回归，结果氟吗啉在0.1～2mg/L的范围内具有较好的线性关系。基质标准溶液回归方程及R2如表1所示。

表1 线性范围、线性回归方程及R2表Table 1 The linear range，the linear regression equation and the correlation coefficient

2.3.2 回收率实验 在上述条件下，以苹果、梨、葡萄、橘子、白菜、西兰花、菠菜、胡萝卜、番茄和黄瓜10种植物性食品为基质，分别添加氟吗啉标准品，使其含量为0.1、0.2、0.5mg/kg，每个浓度水平进行5次重复添加回收率实验，色谱图见图2，氟吗啉回收率81%～116%，如表2所示。

2.3.3 精密度实验

2.3.3.1 重复性 按照国家标准[11]对重复性的要求，进行方法的重复性实验，分别进行上述10种基质0.1、0.2、0.5mg/kg三个水平5次平行添加回收率实验，RSD 2.3%～12.1%，符合实验室内的重复性要求。

图2 样品加标色谱图Fig.2 HPLC chromatograms of the spiked sample with flumorph standard

表2 添加回收率实验测定结果表Table 2 Reverage recoveries for experiment

表3 三家实验室验证结果统计表Table 3 Three laboratory test results

2.3.3.2 再现性 按照国家标准[11]对再现性的要求，在另外三家科研单位进行验证实验，验证内容包括：线性范围、回收率实验、精密度实验及定量限。验证结果经过科克伦检验、格拉布斯检验、狄克逊检验后，得到重复性限r和再现性限R如表3所示，符合实验室间再现性要求。

2.3.4 定量限 四家科研单位（含本单位）进行氟吗啉在苹果基质中0.05mg/kg添加回收率实验，回收率84%～109%，且信噪比大于10，重复性限r和再现性限R分别为0.002和0.017。故确定该方法中氟吗啉的定量限为0.05mg/kg。

3 结论

本研究首次采用QuEChERS-HPLC法测定植物性食品中氟吗啉的残留量。以10种植物性食品为研究对象，确定了方法的线性范围、准确度、精密度、检出限。氟吗啉平均回收率为81%～116%，RSD为2.3%～12.1%，定量限为0.05mg/kg。氟吗啉没有最大残留限量，因氟吗啉活性优于同类杀菌剂烯酰吗啉，而本方法定量限又满足烯酰吗啉最大残留限量，所以本方法定量限完全符合植物性食品中氟吗啉残留检测要求，是目前氟吗啉残留量测定中分析植物性样品种类最多、而又简单、快速的方法。

[1]闫小军，龚道新，刘少平，等.50%氟吗啉可湿性粉剂在烟草及土壤中的残留分析[J].农药，2010，49（4）：275-276.

[2]Hu J Y，Zhang Y C，Yan H.Determination of flumorph residues in vegetables，soil，and natural water by solid-phase extraction cleanup and high-performance liquid chromatography with UV detection[J].J AOAC Int，2008，91（6）：1459-1466.

[3]王勇，张文革，李乃洁，等.氟吗啉水分散片剂高效液相色谱分析方法[J].农药，2006，45（3）：182-183.

[4]范志金，陈建宇，王海英，等.氟吗啉有效成分的HPLC分析[J].现代农药，2005，4（6）：12-14.

[5]汪灿明，梁敏.氟吗啉的高效液相色谱分析[J].农药，2000，39（4）：16.

[6]张国生，汪灿明.氟吗啉原药高效液相色谱分析[J].农药，2000，39（5）：21-22.

[7]Wang Y S，Fan S H，Cui X Y，et al.A sensitive and selective method for the determination of flumorph residues in vegetables and fruits by HPLC-ESI-MS/MS[J].Talanta，2011，86：221-226.

[8]Anastassiades M，Lehotay S J，Stajnbaher D，et al.Fast and easy multiresidue method employing acetonitrile extraction/partitioning and “dispensive solid-phase extraction” for the determination of pesticide residues in produce[J].J AOAC Int，2003，86（2）：412-431.

[9]Brondi S H，de Macedo A N，Vicente G H，et al.Evaluation of the QuEChERS method and gas chromatography-mass spectrometry for the analysis pesticide residues in water and sediment[J].Bull Environ Contam Toxicol，2011，86（1）：18-22.

[10]Walorczyk S，Drozdzyński D.Development and validation of a routine multiresidue method for determining 140 pesticides in fruits and vegetables by gas chromatography/tandem quadrupole mass spectrometry[J].J AOAC Int，2011，94（5）：1625-1642.

[11]于振凡，冯士雍，刘文，等.GB/T 6379.2-2004测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法[S].北京：中国标准出版社，2004.

Detection of Flumorph residue in vegetable foods by using the QuEChERS coupled with HPLC

SHAO Hua，HUANG Yu-ting，JIN Mao-jun，JIN Fen，WANG Jing，LI Ying
（Key Laboratory of Agrifood Safety and Quality，Ministry of Agriculture，Institute of Quality Standards&Testing Technology for Agro-product，Chinese Academy of Agriculture Sciences，Beijing 100081，China）

TS207.5+3

A

1002-0306（2012）16-0070-03

2012-01-05

邵华（1977-），女，硕士，助理研究员，研究方向：农产品质量安全。

2011年农业行业标准制定项目（394）。