幽门螺杆菌相关性胃癌患者局部Th1/Th2细胞免疫应答变化*

江 泳 杨清峰 张 旭 周 磊 张 爽 张群超 张 毅

安徽省蚌埠市第三人民医院消化内科(233000)

大量流行病学和病因学研究证明，幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)感染与胃癌具有部分因果关系。目前认为Hp感染后宿主的免疫病理反应是胃癌的主要致病机制之一，研究宿主免疫反应与胃癌之间的关系，对探明胃癌的发生机制具有重要意义［1］。本研究通过检测Hp相关性胃癌患者黏膜局部干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)表达情况，旨在探讨Hp感染时宿主Th1/Th2细胞免疫应答变化及其在胃癌发生中的作用。

对象与方法

一、研究对象

连续收集2011年1～6月因上腹部不适症状而接受胃镜检查的胃癌患者，诊断符合病理学检查。剔除标准:过去2周内服用过抑酸剂、铋剂、抗生素、非甾体消炎药和肾上腺皮质激素者;有支气管哮喘、炎症性肠病、自身免疫病者。同时选取同期胃镜下表现为非特异性黏膜充血水肿者作为对照。

胃癌患者于病灶边缘或明显隆起部位取4～5块组织，对照组于距幽门3 cm的胃窦大弯侧取2块组织，保存待测。

二、研究方法

1.Hp的检测:入选者均接受14C-尿素呼气试验、Hp抗体检测，其中1项结果阳性者视为Hp阳性，2项均阴性者视为 Hp 阴性［2］。

2.免疫组化法检测IFN-γ和IL-4表达:IFN-γ和 IL-4单克隆抗体试剂盒购自北京四正柏生物科技有限公司，具体步骤严格按照试剂盒说明书操作。

结果判断:细胞质呈明显棕黄或棕褐色着色者为阳性细胞。随机选取5个视野，高倍镜(×400)下观察细胞染色情况，共计数200个细胞。根据阳性细胞数判断表达情况:-，无细胞染色;+，阳性细胞数1% ～25%;++，26% ～50%;+++ ，51% ～100%［3］。

三、统计学分析

结 果

一、一般情况

共入选55例患者，其中对照组28例，胃癌组27例，两组一般情况见表1。Hp总体感染率为61.8%，两组性别构成比、平均年龄、Hp阳性率相比差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

表1 两组患者一般情况

二、IFN-γ和IL-4表达情况

1.Hp阳性患者:胃癌组IFN-γ表达以+、++为主，而对照组IFN-γ表达以+++为主(见图1)，达61.1%;胃癌组IL-4表达以+++为主(见图2)，达43.8%，而对照组IL-4表达以-、+为主。两组IFN-γ、IL-4表达相比差异均有统计学意义(P ＜0.05)(见表2)。

2.Hp阴性患者:胃癌组和对照组IFN-γ表达均以+或++为主;而IL-4表达均以-或+为主，++、+++少见。两组IFN-γ和IL-4表达相比均无明显差异(P＞0.05)(见表3)。

图1 Hp阳性对照者IFN-γ表达(免疫组化染色，×400)

图2 Hp阳性胃癌患者IL-4表达(免疫组化染色，×400)

3.胃癌患者:Hp阳性胃癌患者IFN-γ表达与阴性者无明显差异(P＞0.05)，而IL-4表达差异有统计学意义(P＜0.05)(见表 2、表 3)。

4.对照组:Hp阳性者IFN-γ表达与Hp阴性者相比差异有统计学意义(P＜0.05)，而IL-4表达无明显差异(P＞0.05)(见表 2、表 3)。

表2 Hp阳性者中IFN-γ、IL-4表达情况n(%)

表3 Hp阴性者中IFN-γ、IL-4表达情况n(%)

讨 论

1986年Mosmann等［4］根据分泌的细胞因子和生物学功能的不同，将小鼠CD4+Th细胞分为Th1和Th2两个细胞亚型。1991年Romagnani［5］证实，人 Th细胞亦可分为 Th1和Th2两个亚型，产生与小鼠Th细胞相似的细胞因子和生物学功能。Th1细胞主要分泌IFN-γ、IL-2、IL-12等细胞因子，通过促进自然杀伤细胞(NK细胞)、细胞毒性T细胞和巨噬细胞的活化、增殖，介导细胞免疫;Th2细胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10等细胞因子，刺激 B 细胞增殖并产生抗体，介导体液免疫［6］。正常生理情况下，Th1、Th2两类细胞处于相互抑制、相互转化的平衡状态，一旦平衡被打破，机体会处于Th1细胞或Th2细胞优势的漂移状态，从而发生各种病理反应，甚至导致肿瘤［7］。Th1/Th2细胞因子表达间接反映了Th1、Th2细胞的功能，IFN-γ和IL-4分别是Th1、Th2细胞中典型的细胞因子［8］。

研究表明，机体对肿瘤的免疫反应以Th1型免疫应答为主，若机体Th1和Th2应答失衡，形成Th2型免疫应答，造成免疫抑制，使机体的抗肿瘤免疫受到严重削弱，易导致肿瘤的发生、发展［7，9］。本研究采用免疫组化法发现，Hp总体感染率为61.8%。Hp阳性患者中，胃癌组IFN-γ表达明显低于对照组(P＜0.05)，IL-4表达明显高于对照组(P＜0.05);Hp阴性患者中，胃癌组IFN-γ、IL-4表达与对照组均无明显差异(P＞0.05)。Hp阳性胃癌患者IL-4表达明显高于Hp阴性胃癌患者(P＜0.05)，Hp阳性对照组IFN-γ表达明显高于Hp阴性对照组(P＜0.05)。说明Hp阳性对照者以Th1细胞介导的免疫应答为主，Hp阳性胃癌患者以Th2细胞为主，在与Hp感染相关的胃部疾病进展过程中，病变局部存在由Th1细胞介导的免疫应答向Th2细胞介导的免疫应答转化，可能与胃癌的发生密切相关。但因本研究入组病例较少，同时细胞因子网络间的相互作用是一个复杂的过程，某些细胞因子的检测结果尚不能表明整个发病机制，因此，今后尚需扩大样本行进一步研究。

1 蔡英，王晶桐.幽门螺杆菌相关慢性炎症和免疫因子在胃癌中的研究进展［J］.中国综合临床，2009，25(3):331-333.

2 中华医学会消化病学分会幽门螺杆菌学组/幽门螺杆菌科研协作组.第三次全国幽门螺杆菌感染若干问题共识报告(2007年8月 庐山)［J］.胃肠病学，2008，13(1):42-46.

3 Wang SK，Zhu HF，He BS，et al.CagA+H pylori infection is associated with polarization of T helper cell immune responses in gastric carcinogenesis［J］. World J Gastroenterol，2007，13(21):2923-2931.

4 Mosmann TR，Cherwinski H，Bond MW，et al.Two types of murine helper T cell clone.Ⅰ.Definition according to profiles of lymphokine activities and secreted proteins［J］.J Immunol，1986，136(7):2348-2357.

5 Romagnani S.Human TH1 and TH2 subsets:doubt no more［J］.Immunol Today，1991，12(8):256-257.

6 Kidd P.Th1/Th2 balance:the hypothesis，its limitations，and implications for health and disease［J］.Altern Med Rev，2003，8(3):223-246.

7 Aniszewski JP，Valyasevi RW，Bahn RS.Relationship between disease duration and predominant orbital T cell subset in Graves’ophthalmopathy［J］.J Clin Endocrinol Metab，2000，85(2):776-780.

8 Berger A.Th1 and Th2 responses:what are they［J］?BMJ，2000，321(7258):424.

9 Murakami H，Ogawara H，Hiroshi H.Th1/Th2 cells in patients with multiple myeloma［J］.Hematology，2004，9(1):41-45.