裸花紫珠制剂中毛蕊花糖苷含量测定

莫迎

(南宁食品药品检验所，530001)

裸花紫珠为马鞭草科植物裸花紫珠(CallicarpanudifloraHook.et Arn.)的干燥叶，被《中华人民共和国药典》1977年版收载，以后历版《中华人民共和国药典》均未收载。目前裸花紫珠单味制剂在临床上主要用于抗炎、止血，应用较广的剂型有薄膜衣片、分散片、胶囊、栓剂等，国内研究该药多集中在总黄酮类[2]、木犀草素[3-5]、熊果酸[6-7]、齐墩果酸[8]等方面，而测定该药中毛蕊花糖苷含量的研究笔者尚未见报道。笔者在本研究以高效液相色谱法测定裸花紫珠分散片、裸花紫珠片、裸花紫珠胶囊中毛蕊花糖苷的含量，以期为科学评价裸花紫珠制剂质量提供新的参考依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器LC-2010AHT高效液相色谱仪(日本岛津)，紫外检测器，LCsolution色谱工作站。

1.2 试药毛蕊花糖苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号:111530-200505，含量测定用)，乙腈(色谱纯)，磷酸(色谱纯)，水(超纯水)，其余试剂均为分析纯。裸花紫珠分散片(成都华宇制药有限公司，批号:091008，091201，规格:每片0.5 g，含干浸膏0.25 g)、裸花紫珠片(海南九芝堂有限公司，批号:100700，800490，规格:每片含干浸膏0.5 g)、裸花紫珠胶囊(江西杏林白马药业有限公司，批号:20100101，20110202，规格:每粒0.3 g，含干浸膏0.2 g)均为南宁食品药品检验所抽验及市售药品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱:Shimadzu vp-ods(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相:乙腈-0.5%磷酸溶液(18∶82);流速:1.0 mL·min－1;检测波长:332 nm;柱温:35℃;进样量10 μL;理论板数按毛蕊花糖苷计不低于5 000。

2.2 对照品溶液的制备精密称取毛蕊花糖苷对照品9.98 mg，置10 mL量瓶，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液贮备液。精密量取贮备液1 mL至20 mL量瓶，摇匀，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备取裸花紫珠分散片20片，裸花紫珠片20片(除去包衣)，裸花紫珠胶囊(10粒)内容物，精密称定，研细，分别取0.5，0.1，0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50%甲醇溶液50 mL，称定质量，超声处理30 min，放冷，用50%甲醇补足质量，摇匀，过孔径0.45 μm滤膜，作为供试品溶液。色谱图见图1。

图1 4种溶液HPLC图

2.4 线性关系考察分别取9.98，29.94，49.90，69.86，89.92 μg·mL-1对照品溶液进样10 μL，测定峰面积，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，进行回归，回归方程Y=1.202 1×106X－9 486，r=0.999 8。表明毛蕊花糖苷在0.1～0.9 μg范围内线性关系良好。

2.5 精密度实验取裸花紫珠片(批号:100700)供试品溶液1份，重复进样6次，以峰面积计算得RSD为0.96%。

2.6 重复性实验取裸花紫珠分散片、裸花紫珠片、裸花紫珠胶囊样品，分别按供试品溶液制备方法各平行制备6份溶液，测定毛蕊花糖苷含量，结果其含量RSD分别为1.81%，1.05%和1.29%。

2.7 稳定性实验取重复性实验项下供试品溶液，分别于0，5，10，16，24 h测定含量，结果RSD分别为0.95%，0.77%，0.71%，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

2.8 加样回收率实验精密称取裸花紫珠分散片(批号:091201)、裸花紫珠片(批号:100700)、裸花紫珠胶囊(批号:20100101)样品各6份，分别精密加入1.002 8 mg·mL－1对照品溶液适量，挥干溶剂，按供试品溶液制备方法各制备供试品溶液6份，进行测定，结果见表1～3。裸花紫珠分散片中毛蕊花糖苷平均加样回收率98.68%，RSD=1.97%;裸花紫珠片中毛蕊花糖苷平均加样回收率99.43%，RSD=1.95%;裸花紫珠胶囊毛蕊花糖苷平均加样回收率100.09%，RSD=1.60%。

表1 裸花紫珠分散片中毛蕊花糖苷加样回收率实验结果

表2 裸花紫珠片中毛蕊花糖苷加样回收率实验结果

表3 裸花紫珠胶囊中毛蕊花糖苷加样回收率实验结果

2.9 样品测定取裸花紫珠分散片、裸花紫珠片、裸花紫珠胶囊各2批，按供试品溶液的制备方法依法操作，分别测定3种制剂中毛蕊花糖苷的含量，按上述色谱条件进样10 μL，以外标法计算毛蕊花糖苷含量，结果见表4。

3 讨论

毛蕊花糖苷为极性化合物，笔者曾选用甲醇、50%甲醇、乙醇、70%乙醇进行实验，结果不同浓度的乙醇提取效果不佳且杂质干扰多，而50%甲醇提取效果较佳。通过比较加热回流、超声处理样品两种方式，结果提取效果无明显差异，从节约能源角度出发，采用超声处理。

表4 样品测定结果

紫珠制剂为临床各科的常用止血药物[9]，目前裸花紫珠制剂标准大部分都是采用分光光度法测定总黄酮类含量，专属性差。从不同生产企业生产的裸花紫珠剂型中毛蕊花糖苷含量测定结果来看，明显存在较大差异，薄膜衣片含量较高，分散片含量较低，相差十多倍，提示药材质量及生产工艺都有可能影响制剂质量。笔者在本实验建立的含量测定方法专属性强，为裸花紫珠药材及其制剂的活性成分研究提供了新的理论依据。

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