川芎嗪对顺铂所致大鼠肾氧化损伤的保护作用

薛英，黎七雄，李爽

(1.武汉大学中南医院耳鼻喉科，430071;2武汉大学基础医学院药理学系，430071;3.武汉市儿童医院泌尿科，430016)

顺铂(cisplatin，DDP)是一种广谱抗癌药，由于其抗癌作用强，与其他抗肿瘤药物无交叉耐药性，在睾丸癌、卵巢癌、头颈部肿瘤及小细胞肺癌等恶性肿瘤的治疗中取得了显著疗效[1]。但DDP有严重的肾毒性，而肾毒性是其临床应用剂量受限制的主要因素[2]。因此，研究对DDP肾毒性有较好防治作用的药物，对提高DDP抗肿瘤疗效，发挥DDP应有的作用，具有重要的临床价值。川芎嗪(ligustrazine)又名四甲基吡嗪(tetramethypyrazine，TMP)，是川芎中的一种生物碱单体，临床主要用于治疗心脑血管疾病，在治疗肾小球及肾小管疾病方面也有较好的疗效[3]。笔者之前的研究表明，TMP对大鼠加速型抗肾小球基底膜抗体肾炎具有较好的保护作用，其机制与抗氧化损伤有关[4]。TMP可能通过降低凋亡相关蛋白Bax和增强Bcl-2表达，并降低Bax/Bcl-2比值而抑制DDP引起的肾细胞凋亡，使肾脏免受损伤[5]。笔者在本实验观察TMP对DDP肾氧化损伤的影响。

1 材料与方法

1.1 动物雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，体质量200～250 g，SPF级，由武汉大学医学院实验动物中心提供。

1.2 试药DDP(山东省德州制药厂生产，批号:030604，临用前用0.9%氯化钠溶液配制)，盐酸川芎嗪注射液(购于北京市永康药业有限公司，批号:03020601)。血清尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)、肌酐(serum creatinine，SCr)及丙二醛(malondialdehyde，MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、一氧化氮(nitric oxide，NO)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)试剂盒均购于南京建成生物制品研究所。

1.3 实验方法取SD大鼠，实验前代谢笼收集24 h尿液，测尿蛋白含量。将符合要求大鼠随机分为4组，每组8只:对照组、DDP组、DDP+TMP 50 mg·kg－1·d－1组、DDP+TMP 100 mg·kg－1·d－1组。TMP给药组分别腹腔注射TMP 50和100 mg·kg－1·d－1，给药体积为5 mL·kg－1，连续给药5 d;对照组和DDP组给予0.9%氯化钠溶液，5 mL·kg－1。给药第3天，除对照组外，其他3组腹腔注射DDP 1次，8 mg·kg－1，给药第5天收集代谢笼中24 h尿，测尿蛋白含量;大鼠称质量后处死，取血测BUN、SCr;取肾脏，制备肾皮质匀浆，测MDA、还原型谷胱甘肽(glutathione，GSH)含量及SOD、谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferase，GST)、NO、NOS活性。

1.4 观察指标与测定方法磺基水杨酸比浊法测定尿蛋白定量，二乙酰一肟法测定BUN含量，碱性苦味酸法测定SCr含量，硫代巴比妥酸反应法测定MDA含量，活性邻苯三酚自氧化法测定SOD，二硫代双硝基苯甲酸比色法测定GSH，1-氯-2，4-二硝基苯比色法测定GST，硝酸还原酶法测定肾组织NO含量，吸光度比色法测定NOS活力。

1.5 统计学方法采用SPSS11.0软件包，所有数据用均数±标准差(±s)表示，组间比较采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠BUN、SCr及24 h尿蛋白含量结果见表1。与对照组比较，DDP组大鼠BUN、SCr和24 h尿蛋白含量显著升高，分别是对照组的2.68，2.84和10.94倍;与DDP组比较，DDP+TMP50 mg·kg－1·d－1组和DDP+TMP100 mg·kg－1·d－1组大鼠24 h尿蛋白分别下降41.45%，65.33%;BUN分别下降18.12%，57.51%;SCr含量分别下降14.39%，48.89%。

2.2 大鼠肾皮质MDA与SOD测定与对照组比较，DDP组大鼠肾皮质匀浆MDA含量增高(是对照组的1.58倍)，SOD活性下降(较对照组下降32.34%);与DDP组比较，DDP+TMP100 mg·kg－1·d－1组MDA含量降低36.73%，SOD活性升高(为DDP组的1.66倍)，见表1。

2.3 大鼠肾皮质GSH与GST测定见表1。与对照组比较，DDP组大鼠肾皮质GSH含量和GST活性均明显下降(分别下降27.25%和37.50%);与DDP组比较，DDP+TMP100 mg·kg－1·d－1组GSH和GST均升高(分别为DDP组的1.33和1.57倍)。

2.4 大鼠肾皮质NO与NOS测定见表1。DDP组肾皮质NO含量和NOS活力分别为对照组的2.66和1.28倍;与DDP组比较，DDP+TMP 100 mg·kg－1·d－1组肾皮质NO含量和NOS活力明显降低，分别降低45.39%和22.86%。

3 讨论

研究表明，TMP能降低肾损伤大鼠尿蛋白、BUN、SCr含量，减轻肾组织病理性损害，表明TMP对DDP所致的肾损害具有一定的保护作用[5]。有文献报道，DDP诱导肾毒性的机制与其肾组织过氧化损伤有关[6]。DDP进入机体后可产生大量羟自由基和活性氧自由基，引起膜脂质过氧化，导致膜通透性和膜脂流动性改变[7-8]。

SOD是体内重要抗氧化酶，可阻断脂质过氧化连锁反应。GST是体内重要的催化结合解毒反应的酶系之一，可通过催化GSH的结合反应或自身与底物的自杀性结合而降低化合物的毒性[9]。NO是一种重要的生物调节剂，由NOS以L-Arg为底物合成。NO并不直接造成组织损害，而是与超氧化物阴离子(O－2)反应生成超氧亚硝基阴离子(ONOO－)后分解产生羟自由基(·OH)而产生毒性[10]。NO可与SOD竞争O－2，与O－2反应生成ONOO－。ONOO－又可通过使蛋白中的酪氨酸硝基化，抑制SOD活性。体外研究表明，外源性NO能抑制SOD和CAT的活性，引起明显的脂质过氧化形成[11]。NOS是NO生物合成的关键酶。SOD等抗氧化酶活性下降对NOS具有抑制作用。本研究结果显示，DDP可增加大鼠肾皮质MDA、NO含量和NOS活力，降低GSH含量和SOD、GST活性，表明DDP肾毒性与氧化损伤密切相关。TMP降低肾组织MDA、NO含量和NOS活力，增加GSH含量和SOD、GST活性。TMP增加肾组织GSH的含量，诱导GST的活性可能与TMP的抗氧化特性和抑制DDP所致巯基消耗有关。TMP还可通过降低大鼠肾脏NO含量和NOS活力而减少NO与自由基相互作用引起的肾脏损伤。

表1 4组大鼠BUN、SCr、24 h尿蛋白含量测定结果Tab.1The content of BUN、SCr and urine protein in 24 hours in 4 groups of rats ±s

表1 4组大鼠BUN、SCr、24 h尿蛋白含量测定结果Tab.1The content of BUN、SCr and urine protein in 24 hours in 4 groups of rats ±s

与DDP组比较，*1P＜0.05，*2P＜0.01;与对照组比较，*3P＜0.01Compared with DDP group，*1P＜0.05，*2P＜0.01;compared with control group，*3P＜0.01

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本研究提示，TMP对肾脏有保护作用，其可能机制是通过抗氧化损伤作用对DDP所致的肾脏损伤产生保护。

[1]ROSENBERG B.Fundamental studies with cisplatin[J].Cancer，1985，55(10):2303－2316.

[2]BADRY O A，ABDEL-MAKSOUD S，AHMED W A，et al.Naringenin attenuates cisplatin nephrotoxicity in rats[J].Life Sci，2005，76(18):2125－2135.

[3]常子军.川芎嗪治疗肾脏疾病的药理及临床研究进展[J].中国中医急症，2002，11(2):131－132.

[4]FU H，LI J，LI Q X，et al.Protective effect of ligustrazine on accelerated anti-glomerular basement membrane antibody nephritis in rats is based on its antioxidant properties[J].Eur J Pharmaco，2007，563(3):197－202.

[5]刘晓华，黎七雄.川芎嗪对顺铂肾损伤大鼠肾细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响[J].中国药理学与毒理学杂志，2005，19(5):352－356.

[6]HANNEMANN J，BAUMANN K.Cisplatin-induced lipid peroxidation and decrease of gluconeogenesis in rat kidney cortex:different effects of antioxidants and radical scavengers[J].Toxicology，1988，51:119－132.

[7]KUNIHIKO S，KAZUTO M，YOSHNORI I，et al.Protection by a radical scavenger edaravone against cisplatin-induced nephrotoxicity in rats[J].Eur J Pharmaco，2002，451(2):203－208.

[8]JARIYAWAT S，KIGPITUCK P，SUKSEN K，et al.Protection against cisplatin-induced nephrotoxicity in mice byCurcuma comosa Roxb.ethanol extract.[J].J Nat Med，2009，63(4):430－436.

[9]BALIGA R，ZHANG Z，BALIGA M，et al.Role of cytochrome P450as a source of catalytic iron in cisplatin-induced nephrotoxicity[J].Kidney Int，1998，54(5):1562－1569.

[10]FUJIHARA C K，SENA C R，MALHEIROS D M，et al.Shortterm nitricoxide inhibition induces progressive nephropathy after regression of initial renal injury[J].Am J Physiol Renal Physiol，2006，290(3):632－640.

[11]PASSAUER J，PISTROSCH F，BUSSEMAKER E.Nitric oxide in chronic renal failure[J].Kidney Int，2005，67(5):1665－1667.