HPLC法测定复方三七丸中有效成分的含量

梁盛

复方三七丸为我院自制的一种水蜜丸中药制剂，是由中药三七、元胡等组成，在临床上具有活血化瘀、消肿止痛、舒络通经、强身健体的功效。主要用于治疗跌打损伤，各种痛症、血症，溃疡以及心血管等疾病。三七是复方三七丸中主要的药物，复方三七丸中的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1为该药制的主要有效成分。本文通过使用高效液相色谱对本院自制的复方三七丸中有效成分的含量进行测量，为更好的控制该药的质量制定了很好的方法，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 仪器与试药 美国进口高效液相色谱仪, 上海产电子分析天平，上海产超声波清洗器，上海产索氏提取器[1]。

本院自制的复方三七丸样品，三七皂苷R1的对照品，人参皂苷Rg1的对照品，人参皂苷Rb1的对照品，乙腈是色谱纯，超纯水，其它的试剂均为分析纯。

1.2 方法

1.2.1 对照品溶液的制备方法[2]各取经过进行过减压干燥的对照品：三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1适量，全部放置在量瓶中，加入甲醇溶液定容，配制成含量为每1毫升中含有三七皂苷R1为0.6毫克，人参皂苷Rg1为2.1毫克，人参皂苷Rb1为1.2毫克的混合溶液，摇晃均匀，制成了对照品溶液。

1.2.2 供试品溶液的制备方法 取复方三七丸，进行研磨，制成细粉，过80目筛，精密称取1 克复方三七丸的细粉,放置到索氏提取器中，加入适量的乙醚，放置水浴上进行回流提取两个小时，过滤除去乙醚液，将滤纸筒取出后挥发尽乙醚，将药渣转移到有塞的锥形瓶中，再精密量取并加入甲醇溶液100毫升，进行称定其重量，再进行超声处理30分钟，取出放冷后，再进行称重，使用甲醇溶液补足挥发减失的重量，进行过滤，取出续滤液制成为供试品的溶液。

1.2.3 系统适应性的试验[3]为使试验顺利进行先进性系统适应性试验，首先分别的精密吸取对照品溶液以及供试品的溶液各10 l，注入到液相色谱仪中，对照品溶液和供试品溶液出现了三个峰，是三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1，保留时间分别是7.21 分钟、8.64 分钟、15.93分钟。

1.2.4 线性关系的考察 分别精密吸取使用对照品溶液的制备方法制备的对照品混和溶液分别取0.5毫升、1毫升、2毫升、4毫升、6毫升、8毫升，分别将其放置于10 ml的量瓶中，加入甲醇溶液稀释至量瓶刻度线，再每瓶精密吸取10μl，依次进样后，记录色谱图。以色谱峰的面积做为纵坐标(Y)，以溶液中的对照品质量做为横坐标(X)，进行回归性运算。

1.2.5 精密度的试验 进行精密吸取对照品溶液10μl，连续进样五次，记录色谱图[4]，得出三七皂苷R1，人参皂苷Rg1，人参皂苷Rb1的峰面积的相对标准偏差。

1.2.6 稳定性的试验 分别精密吸取对照品的溶液10μL,分别配置好后在0小时、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、12 小时进样进行测定，记录测量的色谱图。

1.2.7 重复性试验 分别精密称取同一批次制作的复方三七丸的样品五份，按照同样的方法制备五份供试品的溶液并按色谱条件和系统适应性的试验项下色谱条件进行分别测定。

2 结果

2.1 线性关系考察结果 测定出三七皂苷的R1、人参皂苷的Rg1、人参皂苷Rb1的回归方程分别是：Y＝278.45X+7.987(r＝0.999 9)、 Y＝289.78X+20.156(r＝0.999 6)、 Y＝241.031 X＋13.341 (r＝0.999 8)，可得出三七皂苷的R1、人参皂苷的Rg1、人参皂苷Rb1的质量分别在0.305g～6.156g、1.108g～21.382g、0.6135g～12.473g有良好的线性关系。

2.2 精密度试验结果 三七皂苷R1，人参皂苷Rg1，人参皂苷Rb1的峰面积的相对标准偏差—RSD分别是0.72%，0.81%，0.62%，试验结果表明此试验的精密度良好。

2.3 稳定性试验结果 对照品中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1以及人参皂苷Rb1的峰面积相对标准偏差—RSD分别是1.86%，1.58%，1.35%。试验结果表明此试验对三七丸中有效成分的测定，在对照品在进行制备后十二小时内进行测定，实验结果均稳定。

2.4 重复性试验结果 试验结果表明复方三七丸中的三七皂苷R1，人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的峰面积的相对标准偏差—RSD分别是3.85%，2.56%和3.21%。试验结果表明此试验具有非常好的重复性。

3 讨论

用高效液相色谱法对复方三七丸中有效成分的含量测定具有操作简便、方便、准确、重复性好的特点,可用于复方三七丸中有效成分的含量检测，并经考察同样适用于三七中药材的质量检测。

[1]唐云,倪玮烨,束志凌.HPLC法测定散结镇痛胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1的含量[J].药学进展,2009,33(7):328-329.

[2]张玲,李涛,李秀娟,等.HPLC法测定元胡及配伍药对中元胡索乙素的含量[J].兰州大学学报,2007,33(2):48-51.

[3]李延雪,苏玉娟,宋宝鹏.HPLC法测定元胡止痛片中延胡索乙素的含量[J].中国药事,2006,20(9):544-545.

[4]陈玉霞,曾伟杰,杨丽雅.HPLC法快速测定三七提取物中皂苷的含量[J].现代食品科技,2010,26(7):753-755.