早搏灵胶囊对快速性心律失常家兔模型心肌Ca2+－ATPase活性的影响

陈波，郝景永，林红

(1.黑龙江中医药大学附属第一医院，黑龙江 哈尔滨 150040;2.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

心血管疾病是目前危害人类生命健康的主要疾病之一。其中，心律失常发生率相应增多。中医学对本病的病因、病机、辨证施治积累了丰富的临床经验。本研究初步探讨早搏灵胶囊防治快速性心律失常的作用机理，为中医药防治快速性心率失常的研究提供了客观依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康新西兰家兔24只，雌雄各半，体质量(2.0±0.5)kg，购自黑龙江中医药大学动物实验中心。饲养温度17～24℃，通风良好，温度适宜，固体饲料，自由饮水。

1.2 实验药品与试剂 早搏灵胶囊(黑龙江中医药大学附属第一医院制剂室制备，批号20100205);盐酸维拉帕米片(江苏连云港制药厂，批号100123);水合氯醛(青岛宇龙海藻有限公司，批号20091216);注射用生理盐水(黑龙江哈尔滨三联药业有限公司提供，批号201002);乌头碱(中国药品生物制品检定所，批号110720－200910);ATP酶检测试剂盒、考马斯亮兰蛋白测定试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号201003)。

1.3 实验仪器与设备 电子分析天平(梅特勒－托利多仪器(上海)有限公司);心电机(655I型，上海KOHDEN电子有限公司);高速冷冻离心机(HITACHI himac CR21型，美国 Eppendorf公司);BECKMANDU640紫外分光光度仪(美国Pharmacia Biotech公司);电热恒温水温箱(HH.W21.CU600，温度范围:37～65℃，上海医疗器械厂);低温冰箱(MDF－U50V日本三洋公司);液氮罐(YDS.10型，成都金风液容器有限公司)。

1.4 实验方法

1.4.1 动物分组及给药 新西兰家兔随机分为4组，每组各6只，各组在相同的条件下饲养。生理盐水组:灌服生理盐水5ml/kg;模型组:灌服生理盐水5ml/kg;早搏灵组:灌服49.5mg/ml早搏灵溶液5ml/kg;维拉帕米组:灌服2.64mg/ml维拉帕米溶液5ml/kg。

1.4.2 心律失常持续时间测定 心律失常家兔模型的制备各组均在同等条件下饲养，均每日1次，连续2周给药，末次给药24h后，用10%水合氯醛(30mg/kg)腹腔注射麻醉后，背位固定。用针型电极刺入四肢，记录心电图(记录标准肢导Ⅱ导联，纸速50mm/s);股静脉缓慢注射 6μg/ml的乌头碱 100μg/kg，1min内注完，描记此时的心电图，心律失常消失恢复窦性心律300s以上或者出现濒死性心律失常后停止记录。

1.4.3 Ca2+－ATPase测定 心电记录完毕后，立即开胸，取出心脏，用冷0.9%氯化钠溶液冲洗血液，放入用DEPC水处理过的EP管中，用液氮速冻，以－70℃低温冰箱保存。实验采用定磷法，通过测酶促反应过程中无机磷的释放量来测定心肌组织ATPase的活力，ATP酶可分解成ADP及无机磷，测定无机磷的量可判断ATP酶的活力。考马斯亮兰蛋白含量测定原理:蛋白质分子具有－NH3+基团，当棕红色的CBBG250显色剂加入蛋白标准液或样品时，考马斯亮兰染料上的阴离子与蛋白－NH3+结合，使溶液变为蓝色，通过计算吸光度可计算出蛋白含量。

1.5 统计学处理 所有数据采用SPSS 17.0软件进行统计学分析，计量资料以(s)表示，采用单因素方差分析LSD－t检验，置信区间95%。

2 结果

2.1 各组家兔心律失常持续的时间 见表1。

表1 各组心律失常持续时间(s)

表1 各组心律失常持续时间(s)

注:与模型组比较，*P＜0.05;与维拉帕米组比较，▲P＞0.05。

组别 n 心律失常持续的时间(s)生理盐水组6－模型组 6 53.65 ±4.45早搏灵组 6 24.43 ±3.05＊▲维拉帕米组 6 24.85 ±3.44*

经统计学分析后显示:早搏灵组、维拉帕米组与模型组经检验具有正态性，方差齐。三组快速性心律失常持续时间经单因素方差分析，具有显著性差异(P＜0.05)。在此之后行LSD－t检验，其中维拉帕米组与模型组、早搏灵组与模型组比较，快速性心律失常持续时间均缩短，均有极显著差异(P＜0.01);早搏灵组与维拉帕米组比较，差异不具有统计学意义(P＞0.05)，不能说明两者对心律失常持续时间的影响有差异。

2.2 各组家兔心肌组织 Ca2+－ATPase的活性 见表2。

表2 各组家兔心肌组织Ca2+－ATPase活性(s)

表2 各组家兔心肌组织Ca2+－ATPase活性(s)

注:与生理盐水组比较，▲P＜0.05;与模型组比较，◆P＜0.05;与维拉帕米组比较，●P＞0.05。

组别 n Ca2+－ATPase活性(μmolPi/mgprot/h)生理盐水组1.820 ±0.042模型组 6 0.569 ±0.016▲早搏灵组 6 0.995 ±0.068▲◆●维拉帕米组 6 1.073 ±0.118 6▲◆

经统计学分析后结果显示，模型组与生理盐水组比较，Ca2+－ATPase活性降低，经独立样本t检验，差异具有统计学意义(P＜0.01)，提示造模成功。早搏灵组、维拉帕米组与模型组Ca2+－ATPase活性比较经单因素方差分析，差异有统计学意义(P＜0.01);之后行LSD－t检验，早搏灵组与维拉帕米组较模型组Ca2+－ATPase活性高，差异具有统计学意义(P＜0.05);早搏灵组Ca2+－ATPase活性低于维拉帕米组，无显著性差异(P＞0.05)。早搏灵组，维拉帕米组分别与生理盐水组Ca2+－ATPase活性比较，活性降低，经独立样本t检验均有极显著差异(P＜0.01)。

以上说明，早搏灵胶囊与维拉帕米均可提高心律失常家兔Ca2+－ATPase活性，但不能使之恢复至正常水平，且两药在提高家兔心律失常心肌Ca2+－ATPase活性方面无显著差异。

3 讨论

早搏灵胶囊方中以红参为君药，其性偏温，更长于大补元气又能生津、安神，为益肺补脾、安神益智之要药。臣药:黄芪为补气之要药。大补脾胃之元气，与红参相伍，补一身之气令气旺血行，瘀去络通。麦门冬具有养阴生津、清心除烦之效。当归力能补血，又补中有行，为血中之气药。山楂即可消食化积，又能行气散瘀。丹参善行血脉，祛瘀止痛，又有凉血安神，养心定志之功。三臣药活血而无耗血之虑，补血而无留瘀之弊。佐药:青皮辛散温通，苦泄下行而奏疏肝理气，散结止痛之效。与活血、养血药同用，即行血分瘀滞，又解气分郁结，且行气而无伤阴之弊。黄芩力能清热燥湿，泻火解毒。苦参具有清热燥湿，杀虫利尿的功效。黄芩、苦参相伍既能清热养心，又能防药物过于滋腻，起到制约的作用。全方标本兼治，共奏益气养阴、理气活血之功。现代药理学研究表明，早搏灵胶囊中红参［1－3］、黄芪［4］、当归［5］等多种药物均具有减少心肌细胞膜Ca2+内流，调节细胞内Ca2+浓度，减轻细胞内钙超载现象，对抗各种原因引起的快速性心律失常［6］。

乌头碱诱发家兔出现的心律失常具有多样性和复杂性的特点，并且死亡率高，以室性心律失常如室性早搏、室性心动过速、室颤等多见，对于临床常见的室上性心律失常却较为少见。故本实验主要观察记录了实验性心律失常家兔室早、室速发生的时间，证明早搏灵胶囊对室性心律失常具有有效的防治作用。

早搏灵组与模型组心肌组织Ca2+－ATPase活性比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，表明早搏灵胶囊能够提高快速性心律失常家兔心肌组织Ca2+－ATPase活性。维拉帕米组与早搏灵组相比，差异无统计学意义，提示早搏灵胶囊疗效和维拉帕米疗效相似。本实验证实，家兔造模成功后，服药组与模型组均可出现不同程度心律失常，并伴有Ca2+－ATPase活性不同程度地下降。早搏灵组较模型组心律失常持续时间明显缩短，Ca2+－ATPase活性也得到保护，且与维拉帕米组无显著性差异。提示早搏灵胶囊可能通过保护心律失常后Ca2+－ATPase活性，改善心肌能量代谢，从而减轻细胞内钙超载，稳定心肌细胞膜结构，保护心肌，从而改善心肌组织传导性，这可能是其治疗快速性心律失常的机制之一。

［1］俞东英.浅析心悸的辨证施治［J］.现代中西医结合杂志，2007，16(28):2714.

［2］张爱先.中医药治疗快速心律失常的研究概况［J］.中国中西医结合急救杂志，2002，9(1):56 －57.

［3］张克清，赵浩.中医药治疗冠心病心律失常研究进展［J］.河南中医，2006，26(5):84 －86.

［4］高毅.心律失常的辨治体会［J］.山东中医药大学学报，2003，27(1):37－38.

［5］施华胜，赵红霞.宁心宝治疗心律失常17例临床观察［J］.浙江中医杂志，2003，38(5):197 －198.

［6］李杨，吴斌，杨颖.益心定悸方对快速性心律失常家兔模型心肌L型钙离子通道的影响［J］.中医药学报，2011，39(3):25 －27.