ACEI类药物对糖尿病大鼠脂质过氧化、内皮素-1及血脂的影响

庄 志，端礼荣，朱灿宏

(1镇江市第一人民医院，江苏镇江212001;2江苏大学基础医学与医学技术学院)

研究发现，血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)除降血压外还具有抗动脉粥样硬化作用，并可减少糖尿病患者尿蛋白的排泄，故对糖尿病患者的肾脏损害有明显的保护作用［1］。机体的抗氧化系统包含酶促体系和非酶促体系两部分，超氧化物歧化酶(SOD)是酶促体系中最主要的抗氧化酶之一，丙二醛(MDA)是脂质过氧化物之一。2011年3～10月，本研究利用四氧嘧啶诱导糖尿病动物模型，观察ACEI类药物治疗后对糖尿病模型血脂、脂质过氧化、NO和内皮素-1(ET-1)的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康雄性Wistar大鼠50只(江苏大学动物实验中心提供)，体质量160～180 g。四氧嘧啶(上海艾研生物科技有限公司，纯度99.8%);洛汀新(北京诺华制药有限公司);依那普利(上海现代制药股份);卡托普利(北京同正生物技术公司);血糖仪(美国强生稳豪血糖仪);7150自动生化分析仪(日本日立生化仪器公司);TC、TG试剂盒(北京莱帮生物技术有限公司);MDA及SOD活力测试盒由南京建成生物工程研究所提供;ET-1放免测定试剂盒(北京东亚放免研究所)。

1.2 动物模型建立 大鼠被随机分为正常对照组、糖尿病模型组、洛汀新组、依那普利组和卡托普利治疗组，每组10只。后4组大鼠腹腔注射四氧嘧啶(60 mg/kg)，72 h后用血糖仪测定大鼠血糖在16.8 mmol/L以上者，即为模型制备成功。(洛汀新、依那普利和卡托普利)治疗组于造模成功后，第1天起即分别给予洛汀新、依那普利和卡托普利腹腔注射(5 mg/kg，1次/d，10周);正常对照组大鼠腹腔注射生理盐水0.6 mL，10周;糖尿病模型组于造模成功后第1天起每日腹腔注射生理盐水0.5 mL，10周。10周末抽取各组动物腹主动脉血测定TC、TG、NO、ET-1水平。

1.3 MDA和SOD含量的测定 大鼠处死后，立即取肝脏，生理盐水清洗后，在冰浴中制成不同浓度的组织匀浆，BCA法测肝组织匀浆中蛋白的含量。用硫代巴比妥酸法测定肝组织MDA含量;比色法测定肝组织匀浆中SOD的水平。严格按试剂盒说明操作。

1.4 测定指标及方法 ①采用7150自动生化分析仪利用TC试剂盒和TG试剂盒测定血浆TC和TG水平。②用NO试剂盒(北京晶美试剂公司)根据还原酶比色法测定NO。③用放免测定试剂盒测定ET-1。

1.5 统计学方法数据以¯x±s表示，采用SPSS 16.0软件进行单因素方差分析，以P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 糖尿病大鼠体质量的变化 给药10周后糖尿病模型组大鼠体质量［(269.84±9.15)g］低于正常对照组(P ＜0.01)，而洛汀新组［(319.48 ±5.71)g］、依那普利组［(322.03 ±5.79)g］和卡托普利组［(324.48±7.76)g］大鼠的体质量低于正常对照组，但差异无统计学意义(P＞0.05)。与糖尿病模型组比较，洛汀新组、依那普利组和卡托普利组体质量差异有统计学意义(P＜0.01)。

2.2 糖尿病大鼠血浆中的TG、TC水平变化 见表1。

表1 各组大鼠血浆中的TG、TC水平变化(mg/L，¯x±s)

2.3 各组大鼠NO、ET-1水平变化 见表2。

表2 各组大鼠NO、ET-1水平变化(¯x±s)

2.4 糖尿病大鼠肝组织匀浆MDA和SOD含量变化 见表3。

表3 各组大鼠肝组织匀浆MDA和SOD的水平变化(¯x±s)

3 讨论

近年来研究表明，ACEI类药物对糖尿病肾病患者肾脏有保护作用，但其机制尚不十分明确。除了改善糖尿病肾小球血流动力学，降低肾小球内高压外，还存在非血流动力学机制。近来一些基础研究提示，ACEI可通过抑制肾组织局部血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的形成或阻断AngⅡ的作用，从而降低AngⅡ诱导多种细胞因子如TGF-β1、内皮生长因子和内皮素等的表达、合成和释放等。我们采用四氧嘧啶建立糖尿病大鼠模型［2］，四氧嘧啶对动物的胰腺B细胞具有直接的毒性作用，可使B细胞数量减少和胰岛素释放功能减弱或消失，结果大鼠血糖明显升高并出现糖尿病症状。同时伴有血管粥样硬化及肾脏损害等并发症，这与脂质代谢紊乱有一定关系［3，4］。TG、TC、ET-1 及 NO 水平变化能引起血管内皮细胞功能的改变［5，6］。糖尿病患者体内的SOD降低是因为机体清除氧自由基而消耗，过氧化脂质明显升高是由于体内脂质过氧化作用发生不饱和脂酸、肪酸共价键上的一系列自由基反应所致［7］。肝脏脂质的过度氧化产生的氧自由基可破坏细胞器、激发信号转导通路导致微细胞结构损伤，并且机体存在氧化和抗氧化的失衡，自由基在体内蓄积，损害机体，促使生理周期老化。本研究应用ACEI类药物对糖尿病大鼠进行治疗，结果表明ACEI类药物具有降血脂、恢复血浆NO的作用，还发现ACEI类药物能调节糖尿病大鼠体内脂质过氧化物的动态平衡。提示ACEI类药物对血管内皮功能具有一定的保护作用，其机制可能是降低血浆中的TG、TC，调节ET-1和NO的平衡，提高机体自由基清除能力。因此ACEI可在临床上作为糖尿病患者治疗的辅助协同用药，但是否具有协同作用尚需进一步观察。

［1］Fujisawa T，Ikegami H，Ono M，et al.Combination of half doses of angiotensin type 1 receptor antagonist and angiotensin-converting enzyme inhibitor in diabetic nephropathy ［J］.Am J Hypertens，2005，18(1):13-17.

［2］王柳萍，杨斌，周丽.四氧嘧啶制备小鼠糖尿病模型的影响因素探讨［J］.广西医科大学学报，2004，21(1):33-35.

［3］Straczkowski M，Kowalska I，Nikolajuk A，et al.Relationship between insulin sensitivity and sphingomyelin signaling pathway in human skeletal muscle［J］.Diabetes，2004，53(5):1215-1221.

［4］Cugnet-Anceau C，Bauduceau B.Glycaemic control and cardiovascular morbi-mortality:the contribution of the 2008 studies［J］.Ann Endocrinol(Paris)，2009，70(1):48-54.

［5］谢毅强，谢春光，张红敏.参芪复方对自发性糖尿病大鼠血管内皮保护的作用机制［J］.中华中医药杂志，2008，23(3):253-256.

［6］Boulbou MS，Koukoulis GN，Makri ED，et al.Circulating adhesion molecules levels in type 2 diabetes mellitus and hypertension ［J］.Int J Cardiol，2005，98(1):39-44.

［7］姚刚，马兴钢.糖尿病患者超氧化物歧化酶和过氧化脂质的测定及临床意义［J］.中国实验诊断学，2011，15(5):921.