S100B蛋白在高间接胆红素血症新生儿中的水平及意义

李红新1，徐美玉，屠文娟1，吴尤佳

(1南通大学附属常州市儿童医院，江苏常州 213003;2南通大学第一附属医院)

S100B蛋白是一种酸性钙结合蛋白，主要分布于中枢神经系统的胶质细胞、周围神经系统的雪旺细胞以及某些神经元细胞、黑色素细胞、脂肪细胞中。当神经细胞受到损伤时，大量的S100蛋白释放入体液，因而成为脑损伤后的主要神经化学标志物之一［1］。临床研究发现，胆红素(TB)可引起中枢神经系统损伤，导致神经元细胞线粒体肿胀和苍白，还可明显破坏星形胶质细胞功能。近年研究发现，TB的神经毒性不仅与血清TB水平有关，还与患儿血脑屏障成熟度、游离TB梯度密切相关;而溶血、感染、酸中毒、小日龄等因素均为高间接胆红素血症的危险因素［2］，无上述高危因素的高间接胆红素血症患儿尽管血清TB水平很高，但脑脊液中TB的水平并不一定高，其神经系统损伤并不一定严重。2008年6月～2011年6月，我们观察了86例高间接胆红素血症新生儿血清S100B蛋白的水平，并探讨其与胆红素性脑损伤高危因素的关系。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择常州市儿童医院收治的重度高间接胆红素血症新生儿86例，均符合沈晓明主编的《临床儿科学》中关于新生儿黄疸干预推荐标准，将达到换血加光疗的血清TB水平定义为新生儿重度高间接胆红素血症［3］。其中42例重度高间接胆红素血症新生儿，同时又伴有高危因素包括溶血(溶血三项试验阳性16例)、感染(血清C反应蛋白或血培养异常但无中枢感染6例)、酸中毒(pH≤7.25 2例)、小日龄(≤3 d 11 例)、低蛋白(白蛋白≤30 g/L 7例)，符合其中一项或多项者为高危因素组(不包含早产儿、围生期窒息缺氧以及有HIE、颅内出血、中枢感染等其他脑损伤的新生儿)。另有44例重度高间接胆红素血症新生儿，但不伴有高危因素者为无高危因素组，其中母乳性黄疸29例、头皮血肿导致的黄疸15例。高危因素组中，男22例、女20 例，胎龄(37.7 ±3.56)周，月龄(3.26 ±2.20)d，体质量(2.78±0.93)kg;无高危因素组男 24 例、女 20例，胎龄(38.04±2.47)周，月龄(8.29±2.80)d，体质量(3.37 ±0.65)kg。另选择 2008 年 6月～2010年6月在我院住院的无黄疸新生儿30例(不包含早产儿、围生期窒息缺氧以及有HIE、颅内出血、中枢感染等其他脑损伤的新生儿)作为对照组，男17 例、女13 例，胎龄(38.09 ±2.97)周，月龄(9.29 ±2.70)d，体质量(3.33 ±0.55)kg，先天性梅毒(需行腰穿以排除是否合并有神经梅毒，结果正常者)12例、新生儿脐炎(需行腰穿以排除细菌性脑膜炎，结果正常者)18例。三组性别、年龄等具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 TB、S100B蛋白水平检测 患儿入院后在家属同意的情况下，于治疗开始前，按照腰椎穿刺常规操作方法采集脑脊液0.5 mL，并于30 min内送检，应用日本产OLYMPUS AU400型全自动生化仪测定脑脊液TB水平，试剂为日本大阪和光纯药株氏会社产品;同时抽取股静脉血2 mL，3 600 r/min离心15 min，取血清0.5 mL，放入－40℃冰箱保存待测，采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测血清中S100B蛋白水平，试剂盒由上海天呈生物医学有限公司提供，操作按说明书进行。

1.2.2 听力筛查及新生儿行为神经测定(NBNA评分) 采用GSI AUDIOscreener听力筛查仪，由专人进行瞬态诱发耳声发射测试，以4个频带中3个频带信噪比≥3 dB为正常。新生儿NBNA测定及评分方法按照鲍秀兰教授制定的方法［4］进行，测定均在患儿吃奶后1 h，从睡眠状态开始进行，室温控制在22～27℃，室内保持半暗、安静。检查工具有手电筒、长方形红色塑料盒和小红球各一个，检查者参加过NBNA学习班并考核合格。20项满分为40分，≤35分为异常。治疗方案参照中华医学会儿科学分会2010年制定的新生儿黄疸诊疗原则［5］。所有患儿采用该治疗原则，故对结果影响较小。

1.2.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件，计量资料以±s表示，结果比较采用单因素方差分析、q检验;计数资料比较采用χ2检验;相关性分析采用直线相关分析。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组TB、S100B、NBNA评分、听力筛查结果比较 见表1。

2.2 TB与血清S100B、NBNA评分的相关分析高危因素组血清与脑脊液TB水平呈正相关(r=0.63，P ＜0.05)，无高危因素组血清与脑脊液 TB 水平无相关性(r=0.13，P ＞0.05)。高危因素组脑脊液TB水平与血清S100B、NBNA评分均呈负相关(r分别为 －0.55、－0.58，P 均 ＜0.05)，无高危因素组脑脊液TB水平与血清S100B、NBNA评分无相关性(r分别为0.05、0.08，P 均 ＞0.05)。

表1 各组TB、S100B、NBNA评分及听力筛查结果比较(±s)

表1 各组TB、S100B、NBNA评分及听力筛查结果比较(±s)

注:与对照组比较，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;与无高危因素组比较，#P ＜0.05

组别 n TB(μmol/L)血清 脑脊液S100B(μg/L)NBNA评分(分)听力筛查异常［例(%)］高危险因素组 42 305.0 ±35.2＊＊ 10.8 ±3.9*# 1.28 ±0.23*# 35.07 ±1.26*# 10(23.8)*#无高危因素组 44 295.9±47.8＊＊ 6.1±0.8* 0.38±0.04 37.82±1.28 2(4.7)对照组 30 59.2 ± 7.7 3.9 ±0.6 0.33 ±0.05 38.09 ±0.97 1(3.3)F 5.49 4.45 4.74 3.86 10.20 P ＜0.01 ＜0.05 ＜0.01 ＜0.05 ＜0.01

3 讨论

TB是一种极性化合物，在血浆中有三种不同形式存在，即单价阴离子、二价阴离子、TB酸盐。生理情况下，低浓度的间接TB通过一个稳定的血脑屏障后在脑细胞沉积，往往完全可逆且无害。但在某些病理情况下，血脑屏障受损，二价阴离子与白蛋白连接的复合物也可通过血脑屏障，并与神经细胞膜的极性基因结合。当机体处于低pH值、低白蛋白、缺氧、低温等时，可使中枢神经细胞内氧化酶活性下降，TB沉淀率加大，最终引起不可逆性脑损害。近几年，TB对神经元突触传递的研究发现，其毒性作用可分为聚集、结合、沉积三个步骤，在早期可出现亚临床型TB神经中毒症，到后期病变转为不可逆，临床可出现典型神经系统异常症状，即为TB脑病，多留有后遗症。胆红素神经毒性在新生儿期的临床表现有的非常不典型，即使发生胆红素脑病的患儿也有15%没有明显神经系统症状［6］，而TB对神经的毒性既有剂量依赖，又有时间依赖，及时预防和治疗，可以减轻或消除胆红素神经毒性。因此，对胆红素神经毒性的早期监测尤为重要。国内外学者大量研究发现，低血浆白蛋白、小日龄、溶血、脓毒症、酸中毒等都是加重胆红素神经毒性的高危因素［7］，并建议对存在高危因素的黄疸患儿进行密切监测。

当脑组织受损时，一些神经特异性的生化物质可以从损伤的神经细胞中释放并通过血脑屏障进入体循环，观察高胆红素血症患儿血液中神经生化指标的变化，对早期直接而准确地了解脑损伤程度，具有重要的临床意义。S100蛋白是一种酸性钙结合蛋白，是脑损伤后的主要神经化学标志物，在动物实验和临床研究中已得到证实［8］。神经生化指标检测在缺氧缺血性脑病等脑损伤中已有较多应用，而用来评价胆红素神经毒性仍处于初步阶段［9］。本研究显示，高危因素组血清及脑脊液TB、血清S100B均高于无高危因素组、对照组，表明新生儿期重度高间接胆红素血症合并有高危因素的患儿可造成神经系统损伤，而不伴有高危因素的高间接胆红素血症患儿神经系统损伤不明显。相关分析显示，高危因素组血清与脑脊液TB水平正相关，而无高危因素组血清与脑脊液TB水平无相关性。因此，对合并有高危因素的高间接胆红素血症患儿血清S100B蛋白和脑脊液TB水平的检测，不仅可以更好地指导临床治疗和神经系统的早期干预，还可以避免对无高危因素的高间接胆红素血症患儿的过度治疗［10］。

本研究结果显示，高危因素组血清及脑脊液TB、血清S100B、听力筛查异常率均高于无高危因素组、对照组。这表明新生儿期重度高间接胆红素血症会对同期合并有高危因素的患儿神经系统造成损伤，而不伴有高危因素的高胆红素血症患儿神经系统损伤不明显，如果仅靠血清TB水平来干预黄疸的治疗，显然是不合理，如果需要找寻更合理的干预指标，可以结合脑脊液TB水平，但是这需要对患儿进行有创伤的腰穿检查，也难以让家长接受，这时可在入院抽血时，同时检测血清S100B蛋白水平，可以更好地指导临床治疗和神经系统的早期干预［11］。目前判断新生儿神经损伤多用NBNA评分，但是受到时间的限制和主观因素较多，评分难以保证其准确性和客观性。本研究通过培训的专人进行NBNA评分，结果显示，高危因素组NBNA评分低于无高危因素组、对照组，且其脑脊液TB、血清S100B水平与NBNA评分均呈负相关，而无高危因素组无相关性，提示脑脊液TB、血清S100B水平对预测足月新生儿高间接胆红素血症脑损伤有一定的参考价值。另外，对高间接胆红素血症患儿进行听力筛查检测也可发现，有高危因素的高间接胆红素血症患儿听力筛查的异常率明显高于无高危因素组、对照组。研究还发现，高危因素组中有12例血清S100B蛋白水平明显高于其他30例，其中有8例为溶血性黄疸，可能与该病发生日龄较小，且常合并有低蛋白血症有关，但由于例数较少未做进一步分析。

综上所述，有高危因素的高间接胆红素血症新生儿可引起神经系统损伤，应早期干预治疗。

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