食管癌发生发展过程中COX－2蛋白表达的研究

李 彬

山东泰安市中医医院外科 泰安 271000

环氧合酶(COX)是PGS(前列腺素类)生物合成的限速酶。近年来发现COX－2在肿瘤发生、发展、分化、转移和预后等方面可能有重要作用，本文就COX－2蛋白在食管癌中的表达及在食管癌发生、发展中的作用进行研究。

1 材料和方法

1.1 标本 取自山东省泰安市中医医院2008－06－2010－06食管癌患者的活检组织和术后标本，正常食管黏膜鳞状上皮6例，单纯增生8例，轻、中、重度不典型增生分别6、4、4例，食管鳞状细胞癌43例。

1.2 试剂 鼠抗人环氧化物酶2单克隆抗体工作液与SPStrepavidin/Peroxidase Kit均购自北京中山生物技术有限公司。

1.3 方法 辣根过氧化酶标记的SP法:(1)石蜡切片，常规脱蜡至水。(2)3%过氧化氢孵育5～10 min。(3)蒸馏水冲洗，PBS(pH 7.2)浸泡5 min。(4)置枸酸盐缓冲液(pH 6)中，微波炉抗原修复5～10 min，冷却至室温。(5)滴加正常山羊血清工作液，室温孵育10～15 min。(6)滴加一抗，37℃孵育1～2 h。(7)PBS冲洗，3 min×3次。(8)滴加二抗，37℃孵育10～15 min。(9)PBS冲洗，3 min×3次。(10)辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃孵育10～15 min。(11)PBS冲洗，3 min×3次。(12)DAB显色。(13)自来水充分水洗，苏木素复杂，脱水，透明，封片。

2 结果

COX－2蛋白表达定位于细胞浆，＞10%病变细胞的细胞浆出现棕黄色的颗粒者判定为阳性(+)，25% ～50%判定为阳性(++)，＞50%判定为阳性(+++)。不同病变食管组织COX－2蛋白免疫组化染色结果及统计分析见表1。

正常组和单纯增生组为对照组。对照组中未发现COX－2蛋白表达;50%(1/4)中度不典型增生有COX－2蛋白表达，食管鳞状细胞癌组为74%(32/43)。COX－2蛋白表达与淋巴转移、浸润深度、肿物大小及临床分期关系见表2。

经x2检验，COX－2蛋白表达，在食管癌临床分期I～II期和III～IV期间，二者差异有统计学意义(P＜0.05)。COX－2蛋白表达，与淋巴转移、浸润深度、肿物大小无关。

表1 不同病变食管组织中COX－2蛋白免疫组化染色结果

表2 COX－2蛋白表达与淋巴转移、浸润深度、肿物大小及临床分期关系 ［n(%)］

3 讨论

环氧合酶(cyclooxgease，COX)又名前列腺素过氧化物合成酶，通过COX活性催化花生四稀酸(AA)转化为前列腺素G2(PGG2)，通过过氧化酶活性催化PGG2转化成PGH2。PGH2被单个的合成酶或还原酶作用才能转化成具有活性的终产物如PGE2、PGF2等。COX－2 mRNA及蛋白质在组织中表达水平增高很可能是肿瘤发生的早期标志。许多实验者在活体肿瘤标本中发现有COX－2的表达。Zimmerman等［1］检测了食管癌中COX－2表达，发现91%(n=172)的食管鳞状细胞瘤、78%的食管腺癌中COX－2免疫组化染色阳性。Uefuji等［2］检测了23例胃腺癌标本，其中19例有COX－2蛋白表达，占83%。诸多结果提示，COX－2过度表达在消化系肿瘤中起重要作用。

免疫组化染色COX－2的蛋白质发现绝大多数腺癌和几乎全部鳞癌均为阳性，并且腺癌的染色密度强于鳞癌。Tsujii等［6］用COX－2表达载体永久性转移鼠肠上皮细胞(RIE)发现COX－2过表达，细胞对基质黏附性增加，E－钙粘连素水平下降，有证据支持后者可能是侵袭抑制因素。增加的黏附性、下调的E－钙粘连素与瘤细胞的局部浸润有关。Murata等［7］发现在人的食管癌组织中，COX－2过表达与食管壁淋巴管浸润、区域淋巴转移程度明显相关，与病理参数如解剖部位、原位肿瘤浸润深度、远处转移、组织病理分级或食管壁静脉浸润无关。以上实验均提示COX－2过表达在增加肿瘤发生的同时，也增加其转移的潜能。因此，COX－2蛋白的表达与食管癌的发生发展关系密切，是食管癌发生发展中的一个重要指标，可作为食管癌可疑病例定期随访的指标之一。

［1］Zimmermann KC，Sarbia M，WeberAA，et al.COX － 2 espression in human esophageal carcinoma.Cancer pancreatic cancer［J］.Res，1999，59(1):198.

［2］Uefuji K，Ickikura T，Mochizuki H，et al.Expression of COX －2 protein in gastric adenocarcninma［J］.J Surg Oncol，1998，69(3);168.

［3］Tsujii M，DuBois RN，Alterations is cellulaiadhesion and apoptos is in epithelial cells overexpression COX － 2［J］.Cell，1995，83:493.

［4］Murata H，Kawano S，Tsuji S，et al.Cyclooxygenase －2over esprission enhanxes lymphatic lymphatic invasion and metastas is in human gastric carcinoma［J］.Am J Gastroenterology，1999，4(2):451.