银花泌炎灵片对产ESBLs大肠埃希菌体外抑菌活性研究

2012-06-20 10:50王槐栋张晓天王冀邯黄红兰倪朝辉
湖南中医药大学学报 2012年10期
关键词:灵片银花埃希菌

王槐栋,胡 亚,张晓天,王冀邯,黄红兰,王 放,倪朝辉

(吉林大学白求恩医学院,吉林 长春 130021)

近年来,由于抗菌药物的广泛使用致耐药性细菌的种类和数量不断产生、增加[1]。超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)为革兰阴性菌产生的能使第三代头孢菌素及单环内酰胺类抗菌药物分解失效的酶,是造成细菌耐药性上升的重要原因。耐药菌株的代表为大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌[2-3]。耐药菌株的出现使临床抗感染治疗面临新的难题,因此寻找更有效的药物和治疗方法迫在眉睫[4]。中成药银花泌炎灵片临床应用证明具有良好的治疗急性尿路感染、急性肾盂肾炎、慢性前列腺炎的作用[5-7]。但该药对产ESBLs的大肠埃希菌是否有明确疗效尚未见报道。因此本文就银花泌炎灵片对产ESBLs大肠埃希菌的体外抑菌活性进行研究,为临床应用抗菌中药制剂治疗产ESBLs大肠埃希菌引起的感染提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验仪器

生物安全柜(AIRTECH BHC-1300ⅡA/B)、紫外分光光度计(UNIC UV-2800AH)。VITEK-32型全自动微生物鉴定仪(法国生物-梅里埃公司)。

1.2 药品与试剂

药敏纸片(英国Oxiod公司),银花泌炎灵片(吉林华康药业股份有限公司,批号:101215规格05g×24s/盒),双黄连胶囊(河北奥星集团药业有限公司),营养琼脂(北京双旋微生物培养基制品厂,批号:20050110)。

1.3 菌株来源

质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922(不产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌)和大肠埃希菌ATCC35218(产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌)。40株大肠埃希菌临床株分离自临床住院患者,并经全自动微生物鉴定系统鉴定确认。参照临床和实验室标准研究所CLSI2009版推荐的方法进行产ESBLs菌株的初筛及确认,其中18株确定为产ESBLs大肠埃希菌。

1.4 药敏试验

所有产ESBLs菌株采用K-B纸片扩散法进行药敏试验,参照CLSI2009 版标准判定敏感、耐药和中介。

1.5 银花泌炎灵片体外抑菌试验

采用2倍平板稀释法测定银花泌炎灵片制剂的最小抑菌浓度(MIC)。制备含待测药物的营养琼脂平板,药物终浓度分别为25、50、100、200、400 mg/mL。复苏菌株,并在MH肉汤中进行增菌培养,紫外分光光度计在波长为600 nm的条件下将MH肉汤中菌液的OD值调整到0.1~0.2之间,菌液浓度为108/mL。取100 μL菌液滴加在不同药物浓度的培养皿和空白培养皿上,37℃孵箱孵育过夜。完全抑制细菌生长的最低药物浓度为被检菌的最低抑菌浓度(MIC),分别检测银花泌炎灵片对18株产ESBLs大肠埃希菌、对照组大肠埃希菌ATCC25922和大肠埃希菌ATCC35218的MIC。

1.6 统计学分析

所有数据用SPSS 11.5软件进行统计分析,组间比较采用t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 药敏实验结果

40株大肠埃希菌临床分离株中检出产ESBLs菌株为18株(45.0%),药敏试验结果显示18株产ESBLs大肠埃希菌全部为多重耐药菌株,除对亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星、头孢吡肟、阿莫西林/克拉维酸及头孢西丁尚较敏感外(耐药率均低于30%),对其他临床常用抗菌药物如头孢呋辛、头孢克洛、复方新诺明、左氧氟沙星、庆大霉素、环丙沙星、头孢曲松等耐药率均超过70%,对氨苄西林和头孢唑啉的耐药率达到100%。结果见表1。

表1 18株产ESBLs大肠埃希菌对临床常用抗菌药物耐药情况(例,%)

2.2 银花泌炎灵片的抑菌活性

银花泌炎灵片对18株产ESBLs大肠埃希菌临床株及质控菌对照株ATCC25922和ATCC35218的MIC范围均在100 mg/mL-200 mg/mL之间,各组别抑菌活性差异无统计学意义(P>0.05)。

3 讨论

细菌耐药性已成为严重的医学和生态学问题,滥用抗生素与其直接相关[8]。本研究从40株大肠埃希菌临床分离株中鉴定出18株产ESBLs的大肠埃希菌,且它们对临床一线用药如:氨苄西林、头孢唑啉、哌拉西林、头孢呋辛酯、复方新诺明、头孢克洛、左旋氧氟沙星、庆大霉素、环丙沙星、头孢曲松等都产生了超过80%的耐药情况。ESBLs是丝氨酸蛋白酶的衍生物,它的出现是由于β-内酰胺酶上1~4位点氨基酸发生了突变,可以通过质粒传播。在临床分离的菌株中,由质粒介导的耐药比由染色体介导的耐药多,它可在不同菌株、菌种或菌属间转移扩散。突变产生的ESBLs抗药谱扩大,且在ESBLs的质粒上常携带对其他抗生素如氨基糖苷类及氟喹诺酮类的耐药基因,故呈多重耐药性[9-10]。西药存在副作用、价格高等问题,使用受到限制,寻找并研制对耐药菌具有抗菌作用的中药具有重大意义。

在对抗生素耐药日益严重的今天,中药抑菌的重要作用被人们越来越关注。金银花具有较强的广谱抗菌作用[11];半枝莲挥发油有一定抑菌作用,而且对革兰氏阳性菌G+菌的抑菌效果强于对革兰氏阴性菌G-菌的抑菌效果[12]。根据美国学者ZhaoX和Kari Drlica的突变选择窗理论,减少细菌突变菌株选择性富集,防止耐药发生的方法有:(1)选择低防突变浓度,窄突变选择窗浓度的药物;(2)使抗菌药物浓度快速达到防突变浓度之上,减少药物浓度落入突变选择窗内的时间,但是这种方法可选择的药物有限,大多数抗菌药物的防突变浓度比较高,增大药物剂量则可能增加药物的不良反应。(3)通过联合使用抗菌药物,降低药物的防突变浓度缩小突变选择窗[13]。而中药正是因为其含有多种相互作用的化合物,对细菌的繁殖起到影响,使细菌不能针对某一种抑菌机制产生抑制作用从而对某种药物产生耐药性。

本研究中的银花泌炎灵片是以传统中医药理论为基础,以地道中药材为原料,采用现代先进工艺精制加工而制成的纯中药制剂。银花泌炎灵片由金银花、半枝莲、萹蓄、淡竹叶、灯心草、石韦、桑寄生等十味中药材组成,具有清热解毒、利湿通淋之功效,临床主要用于急性肾盂肾炎,急性膀胱炎等症。文献报道其具有良好的治疗急性尿路感染、急性肾盂肾炎、慢性前列腺炎等[6-7]等作用。

有报道称中药可以使耐药的大肠埃希菌失去耐药性,其逆转程度和药物浓度及培养时间有关[14]。所以用中药代替抗生素治疗耐药菌株感染为一种值得推广的方法。本实验研究结果表明临床常用抗生素广泛耐药的产β-内酰胺酶大肠埃希菌对中药制剂银花泌炎灵片并不产生明显的耐药性。说明中药制剂的抑菌机制与化学抗菌药物不同,且不受细菌耐药质粒及耐药基因的影响。因此,利用抗菌中药解决产ESBLs大肠埃希菌的耐药问题,可为临床应用抗菌中药治疗产ESBLs大肠埃希菌感染提供实验依据。

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