慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与HBsAg和HBeAg水平的相关性分析*

李筠竹 张振华 张亚飞 苏 倩 李 旭

我国慢性乙型肝炎（CHB）高发，乙型肝炎病毒（HBV）感染者约有9300 万。在CHB 的抗病毒治疗过程中，大部分患者HBsAg 和（或）HBeAg 很难转阴。临床上以HBV DNA、HBsAg 和HBeAg 的转阴作为评价抗病毒疗效的指标，但仅定性检测HBsAg和HBeAg，并不能动态反应其血清学变化。本研究采用Abbott 化学发光微粒子免疫分析法测定HBsAg 和 HBeAg 滴度，并分析 HBV DNA 水平与HBsAg 和HBeAg 滴度的相关性，旨在探讨测定HBsAg 和（或）HBeAg 滴度变化来推测HBV DNA水平变化的可行性。

对象与方法

一、研究对象 2010年8月至2011年3月在我科门诊及住院的CHB 患者951 例，男743 例，女208 例，年龄 2～80岁，中位数年龄为 38岁。所有患者的诊断标准均符合2010年修订的《慢性乙型肝炎防治指南》[1]。

二、检测方法 采用FQ-PCR 法检测血清HBV DNA 水平（上海科华生物工程股份有限公司）；HBV DNA 检测线性范围为 103～108拷贝 /毫升。将HBV DNA 分成3 组：即＜3 lg 拷贝/毫升、3～7 lg 拷贝/毫升和≥7 lg 拷贝/毫升组；采用CMIA 法检测 HBsAg 和 HBeAg 滴度（美国 Abbott公司）。根据试剂盒提供的标准判断结果。按照CMIA 检测试剂说明，将 HBsAg＞0.05IU/mL 和HBeAg≥1.00 S/CO 判为阳性，前者为定量检测，后者为半定量检测。

三、统计学方法 采用SPSS 13.0 软件进行数据分析，HBV DNA 水平与HBsAg 和HBeAg 水平相关性采用Spearman 秩相关分析，多样本间中位数比较采用Kruskal-Wallis 检验，两组样本间中位数比较采用Mann-Whitney 检验，P＜0.05 被认为差异有统计学意义。

结果

一、血清 HBV DNA 与 HBsAg 和 HBeAg 水平相关性分析 对951 例患者血清HBV DNA 与HBsAg和HBeAg滴度进行Spearman 秩相关分析，结果它们之间具有正相关性（r=0.45 和 0.49，P＜0.05）。

二、不同HBV DNA 水平患者血清HBsAg 和HBeAg 滴度比较 对HBV DNA 载量分别为＜3 lg拷贝/毫升、3～7 lg 拷贝/毫升和≥7 lg 拷贝/毫升3 组患者血清HBsAg 和HBeAg 滴度进行比较，发现各组之间差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 不同HBV DNA水平患者血清HBsAg和HBeAg滴度比较

三、不同HBsAg 滴度患者血清HBV DNA 水平比较 将 HBsAg 滴度分成＜1000 IU/ml、1000～10000 IU/mL 和≥10000 IU/mL3 组。三组之间HBV DNA 水平进行比较后发现，各组之间差异有统计学意义（P＜0.05，表2）。经 Spearman 秩相关分析发现，在HBsAg≥10000 IU/ml 组患者，血清HBsAg滴度与 HBV DNA 水平呈正相关（rS=0.39，P＜0.05）。

表2 不同HBsAg 滴度患者血清HBV DNA 水平比较

讨论

血清 HBV DNA 与 HBsAg 和 HBeAg 滴度是否存在相关性，国内外文献报道不一[2～6]。本文研究结果发现患者血清 HBV DNA 与 HBsAg、HBeAg 滴度呈正相关。分组后显示，在血清HBV DNA≥7 lg 拷贝/毫升和（或）HBsAg 滴度≥10000 IU/mL 患者下，HBV DNA 水平与HBsAg 滴度具有更好的一致性。在HBV DNA＞3 lg 拷贝/毫升患者，HBV DNA水平与HBeAg 滴度呈正相关。

血清HBsAg 是HBV 感染的主要标志，常作为乙型肝炎的筛选和诊断。在血清中HBsAg 以小球形颗粒、丝状或杆状颗粒和Dane 颗粒三种形式存在，前两者不含核酸，不具有传染性，Dane 颗粒为病毒蛋白和部分双链rcDNA 组成，具有很强的传染性[7]。Deguchi[8]等认为HBsAg 滴度在一定程度上能够推测HBV DNA 复制水平。本研究结果显示，有些患者血清HBV DNA 与HBsAg 滴度不具有相关性，这可能是因为：（1）在一般情况下，非感染性HBsAg 颗粒与Dane 颗粒比例约为1∶103～105[9]。血清HBsAg滴度测定实际为三种颗粒总体的滴度，因此，只有双链rcDNA 水平达到一定程度和两种颗粒比例减小时，血清HBsAg 滴度与HBV DNA 水平才具有正相关性；（2）所有患者血清HBV DNA 与HBsAg 滴度的相关性较小，相关系数均为0.5 左右。本研究样本量仅为951 例，且选取患者时未剔除抗病毒治疗对HBV DNA 水平的影响因素，部分患者经过抗病毒治疗后HBV DNA 水平下降，造成病毒载量低的患者两者无明显相关性；（3）HBV DNA＜3 lg 拷贝/毫升组HBV DNA 水平低于最低检测限，虽有实际测量值，但可能存在假阴性结果，造成实验误差；（4）HBV DNA 载量为 3～7 lg 拷贝 / 毫升时，其中 80.05%（301/376）HBsAg 滴度＜10000 IU/ml，因而与HBV DNA 水平无相关性。

在HBV 复制过程中，HBeAg 滴度与HBV DNA水平应为正相关[5]。本研究结果表明，在HBV DNA载量为3～7lg 拷贝/毫升组和≥7lg 拷贝/毫升组，两者有相关性。对于分组后相关系数偏低的原因可能是因为：（1）本研究未区分HBeAg 阳性和HBeAg阴性患者，且部分患者经过抗病毒治疗后HBeAg 滴度下降；（2）Abbott CMIA 技术测定 HBeAg 滴度为半定量，可能会造成上述实验误差。

本实验结果与国内外文献报道有一定的差异，原因可能有以下几点：（1）检测试剂灵敏度不同；（2）HBsAg 存在 G145R 等突变[10]；（3）荧光定量 PCR检测方法存在不足。本研究HBsAg、HBeAg 滴度的测定方法采用美国Abbott CMIA 技术，试剂灵敏度高，线性范围宽，是国际公认的定量检测试剂，且G145R 等变异不影响Abbott 试剂的检测灵敏度和线性范围[10]。

有文献指出，血清HBsAg 滴度测定由于其高度灵敏性及相对准确性，在未来预测及评估抗病毒治疗疗效中可能会起重要的作用[11]。血清HBeAg 和HBV DNA 水平均可以评估HBV 复制活跃程度，HBeAg 滴度在一定程度上可以推测HBV DNA 水平，且在评估CHB 进展程度上优于后者[12，13]。但部分患者血清HBsAg 滴度和HBV DNA 水平在抗病毒治疗过程中逐步下降。所以，在HBsAg 滴度和HBV DNA 都为低水平时，要综合血清HBsAg、HBeAg 滴度和HBV DNA 来评估抗病毒的疗效。

CHB 的发展过程是病毒、细胞和免疫系统相互作用的结果，监测HBsAg 滴度在一定程度上可以反映抗病毒疗效，而HBV DNA 水平和HBeAg 滴度都是衡量HBV 活动的一个重要的指标，综合HBsAg、HBeAg 和HBV DNA 水平能够更好地评估抗病毒疗效。本研究利用美国Abbott 试剂检测HBsAg、HBeAg 滴度，结果具有更高的准确性及可靠性，但没有剔除抗病毒治疗的影响，是本研究不足之处，有待于进一步分层研究。

[1]中华医学会肝病学分会和感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）.实用肝脏病杂志，2011，14（2）：81-89.

[2]雷建华，杨旭，罗红雨，等.血清 HBsAg 和HBeAg 阳性乙型肝炎患者HBsAg 滴度与HBV 复制水平的关系.中南大学学报，2006，31（4）：548-551.

[3]蔡文品，赵春，吴惠洁，等.慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与肝纤维化指标的相关性.实用医学杂志，2009，25（2）：72-73.

[4]Ozdil B，Cosar AM，Akkiz H，et al.Negative correlation between viral load and HBsAg levels in chronic HBV-infected patients.Arch Virol，2009，154（9）:1415-1451.

[5]徐敬轩，谢而付，黄珮珺，等.慢性乙型肝炎患者血清中HBeAg、HBsAg 与 HBV DNA 的关系.检验医 学与 临床，2010，21（7）：2337-2340.

[6]方红龙，吴金明，江宏峰，等.慢性乙型肝炎患者外周血HBsAg 与 HBV DNA 相关性分析.实用肝脏病杂志，2011，14（2）：108-109.

[7]Louisirirotchanakul S，Kanoksinsombat C，The amboonlert A，et al.Mutation of the“a”determinant of HBsAg with discordant HBsAg diagnostic kits.Viral Immunol，2004，17（3）:440-441.

[8]Deguchi M，Yamashita N，Kagita M，et al.Quantitation of hepatitis B surface antigen by an automated chem ilum inescent microparticle immunoassay.J Virol Methods，2004，115（2）:217-222.

[9]Moucari R，Marcellin P.Quantification of hepatitis B surface antigen：a new concept for the management of chronic hepatitis B.Liver Int，2011，31（1）:122-128.

[10]Werle lapostolle B，Bowden S，Locamini S，et al.Persistence of cccDNA during the natural history of chronic Hepatitis B decline during adefovir dipivoxil therapy.Gastroenterology，2004，126（7）:1750-1758.

[11]赵秀英.血清HBsAg 定量检测及探讨-从检验者角度看HBsAg 定量.北京医学，2010，32（7）:216-218.

[12]Liaw Y F.HBeAg seroconversion as an important end point in the treatment of chronic hepatitis B.Hepatol Int，2009，3（3）:425-433.

[13]Yang HI，Lu S N，Liaw YF，et al.Hepatitis B e antigen and the risk of hepatocellular carcinoma.N Engl J Med，2002，347（1）:168-174.