HCV特异性T淋巴细胞输注疗法治疗慢性丙型肝炎的临床研究

史继静 崔中锋 李广明

河南省传染病医院，河南郑州 450000

慢性丙型肝炎（CHC）由丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）引起，严重威胁人类健康，是导致慢性肝炎肝硬化及肝细胞癌的重要诱因[1-3]。CHC中20%～30%最终发展成肝硬化及肝细胞癌。CHC的治疗尚无理想药物，干扰素是目前唯一有效的抗病毒药物，但其疗效尚难令人满意，治愈率低且停药后约一半病例复发。近年来研究表明：HCV感染所诱发的细胞毒性T淋巴细胞（CTL，效应性CD8+T细胞）在清除HCV和控制HCV感染中起重要作用[4]。本研究中，笔者采用HCV特异性T淋巴细胞输注疗法治疗慢性丙肝，现将结果报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2010年1月～2011年12月在我院住院治疗的慢性丙型肝炎患者45例，其中，男28例，女17例；年龄14～65岁，平均（32±17）岁。诊断标准符合2000年修订的《病毒性肝炎防治方案》[5]。在知情同意的基础上愿意接受自体HCV特异性CTL输注治疗的入选为治疗组（30例），不愿意接受该疗法，同时亦不愿接受干扰素等抗病毒治疗的归为对照组（15例）。两组患者性别构成、年龄、病程、病情的严重程度、辅助检查等比较差异无统计学意义（P＞0.05），具可比性。治疗前丙氨酸氨基转移酶（ALT）超过正常值上限1倍。抗HCV及HCV RNA阳性，其他肝炎血清学指标均为阴性。所有患者均无肝硬化失代偿表现及严重的心肺功能不全，并排除自身免疫性肝炎、EB和巨细胞病毒感染及酒精性肝损害。治疗组采用自体HCV特异性CTL输注治疗，2周1次，6次为1个疗程，并辅以一般护肝及支持疗法；对照组采用一般护肝及支持疗法。两组均不使用免疫调节剂及抗病毒制剂。疗程结束后两组均随访半年。

1.2 方法

1.2.1 HCV特异性T淋巴细胞的制备

①HCV特异性CTL诱导剂：诱导剂为混合性，由北京希波医学技术开发公司提供。②制备方法：抽取患者外周血100 mL，肝素抗凝，离心后分为血浆层、中间白膜层和红细胞层，取中间白膜层即外周血单个核细胞层于37℃，5%CO2培养箱中用HCV特异性CTL诱导剂诱导培养6 h后，与血浆和红细胞一并回输给患者。

1.2.2 观察指标与方法

1.2.2.1 症状与体征 记录治疗前后主要症状和体征、肝功能变化情况及相关不良反应。

1.2.2.2 检测指标 治疗前、治疗6周、12周及随访结束时分别检测患者的肝功（Beckman公司）、HCV RNA（泰普生物科学有限公司）、抗-HCV（上海科华公司）。

1.3 统计学方法

采用SPSS 13.0软件进行分析，非正态分布资料采用秩和检验或χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 临床症状及不良反应发生情况

两组患者的精神、食欲、体力等均较治疗前好转，治疗组改善更明显。两组患者均未出现严重不良反应及并发症。

2.2 两组患者ALT复常率

治疗后两组患者的肝功能均有改善，治疗组ALT复常率明显高于对照组。见表1。

表1 两组患者ALT复常率的比较

2.3 两组患者HCV-RNA阴转率

治疗组患者HCV-RNA阴转率在疗程结束时为46.67%，随访24周发现随着患者机体免疫应答的增强，有2例在随访期发生阴转；而对照组无一例阴转。见表2。

表2 两组患者HCV-RNA转阴率的比较[n（%）]

2.4 治疗组患者治疗前病毒复制水平与HCV-RNA转阴的关系

对治疗组患者治疗前的病毒复制水平进行分层分析发现，HCV RNA＞105copies/mL时病毒的阴转率明显低于HCV RNA≤105copies/mL时病毒的阴转率。见表3。

表3 HCV RNA水平与转阴率的关系[n（%）]

3 讨论

目前，全世界HCV感染率为0.1%～5.0%，约70%的患者感染后成为慢性肝炎，我国有3 000～4 000万的HCV感染者，HCV感染引起的慢性丙型肝炎已成为重大的世界卫生问题。且HCV是除了HBV感染外引起肝细胞癌的主要致病因素之一[6-7]。因此，对CHC的有效治疗已成为众多学者关注的热点。

体外诱导抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞治疗技术[8]最初用于肿瘤治疗。其治疗丙肝原理为采用特异性T淋巴细胞回输，用HCV多肽抗原在体外诱导、增殖、活化丙肝患者的单个核细胞，此种细胞回输体内后可在体内继续增殖并聚集在其他靶细胞部位，引起强烈的细胞免疫反应而起到清除丙肝病毒的作用。本研究中，30例接受HCV特异性T淋巴细胞治疗的患者，在治疗12周HCV RNA阴转率为46.67%，随后在随访中又有2例发生阴转，这可能与该疗法改善了患者自身的免疫功能有关。同时，笔者对治疗组患者按照不同的病毒复制状态进行分层分组研究，发现治疗前HCV-RNA≤105copies/mL时病毒的转阴率较高，这可能与病毒的高复制状态不利于特异性T淋巴细胞回输后在体内进行免疫激活有关。对该类患者的治疗是否可与其他药物联合以提高疗效是笔者后续研究的问题。

干扰素联合利巴韦林是目前公认的治疗慢性丙肝的方法，但疗效欠满意，尤其是治疗过程中出现的严重副作用，使不少患者无法耐受。笔者用HCV特异性T淋巴细胞输注治疗的30例慢性丙型肝炎患者，治疗及随访期间未发现明显的不良反应，患者耐受性良好，精神体力明显好转，这无疑为不愿接受干扰素治疗或干扰素无法耐受的患者提供了一种新的治疗策略。

本研究证实，HCV特异性T淋巴细胞输注疗法治疗慢性丙肝安全有效，为CHC的治疗提供了新的思路和方法，但其远期疗效如何，值得临床进一步研究。

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