红细胞平均体积联合葡萄糖－6－磷酸脱氢酶活性测定在地中海贫血初筛中的价值研究

袁明生，易旺云

地中海贫血 (Thal，地贫)是由于珠蛋白基因缺失或突变，导致珠蛋白链合成障碍的遗传性疾病，是一种“可防难治”的遗传性疾病，重型地贫的患者终生需要输血和去铁治疗，根治的方法只有进行骨髓移植，手术难度大且风险系数高;如果能在产前做好地贫筛查和诊断，就可以将下一代患重型地贫的机会减至最低。广东地区既是地贫的高发地之一，同时又是葡萄糖－6－磷酸脱氢酶 (G6PD)缺乏症的高发地区之一，中山地区已将地贫的筛查和G6PD活性检测作为产前免费检验项目。国内已有许多报道显示:地贫患者的G6PD活性增高，G6PD活性测定可以应用于地贫的初筛［1－2］。本文回顾性分析了229例样本，综合评价红细胞参数中红细胞平均体积(MCV)和6PD酶活性检测在地贫初筛中的联合应用价值［3－4］，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2011年我院进行地贫基因检测患者229例的血清标本，年龄20～50岁。通过基因检测，将α－地贫患者作为α－地贫组，共94例;将β－地贫患者作为β－地贫组，共53例;两者均有的患者作为α+β－地贫组，共16例，以上统称地贫组，共163例。选取无地贫基因而红细胞参数正常的人群为对照组，共66例。所有患者排除G6PD缺乏、缺铁和其他原因引起的增生性贫血。

1.2 仪器和试剂 G6PD活性定量检测仪器为日立7170A生化分析仪，试剂由广州科方生物技术有限公司提供，测定方法:液体双试剂、速率法，选用广州科方生物技术有限公司生产的室内质控;红细胞参数MCV检测仪器为日本Sysmex三分类血液分析仪KX－21，试剂由中山市创艺生化工程有限公司提供，测定方法为鞘流电阻抗法，选用Sysmex室内质控;地贫基因检测送广东省中山市人民医院检验中心进行聚合酶链式反应 (PCR)分子遗传学测定。

1.3 方法及参考范围 肘正中静脉采血3～4 ml于肝素抗凝剂真空管检测G6PD活性，将肝素抗凝全血样本4 000 r/min(相对离心力为3 130×g)离心5 min后吸取20μl压积红细胞到1 ml裂解液中，红细胞溶解后用日立7170A全自动生化分析仪25 min内测定完毕G6PD活性，按G6PD试剂说明书进行参数设定，G6PD参考范围:6.7～14.0 U/gHb;2 ml于EDTA－K2真空管内进行MCV检测，参考范围:80～100 fl;3～4 ml于无抗凝剂真空管送中山市人民医院检验中心进行PCR地贫基因检测。

检测方法包括单项检测:MCV、G6PD检测;两项并联(前两项任一阳性为并联阳性);两项串联 (前两项均为阳性为串联阳性)。

1.4 统计学方法 采用SPSS 13.0统计软件进行数据统计处理。均数比较采用t检验;率的比较采用χ2检验;将α－地贫组、β－地贫组、α+β－地贫组及对照组资料录入SPSS 13.0统计软件 (MCV和G6PD.sav)，采用两独立样本非参数检验。采用Binary Logistic进行逐步Logistic回归分析产生各个体预测概率的新变量PRE。以新变量PRE为检验变量，诊断结果为状态变量，作ROC曲线分析，计算曲线下面积 (AUC)。以p＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 地贫组与对照组G6PD活性和MCV结果比较 α－地贫组、β－地贫组及α+β－地贫组G6PD活性均高于对照组，且差异有统计学意义 (t值分别为3.89、7.46、3.71，均 P=0.000);α－地贫组、β－地贫组以及α+β－地贫组MCV均显著低于对照组，差异有统计学意义 (t值分别为10.90、11.21、5.18，P=0.000，见表1)。

2.2 应用非参数检验ROC曲线评价G6PD、MCV和两项联检对地贫的诊断效能 以MCV、G6PD和两项联检为检验变量，以诊断结果为状态变量，利用SPSS 13.0中的非参数检验ROC曲线功能绘制ROC曲线图，ROC曲线计算各指标曲线下面积(AUC):MCV、G6PD和两项联检分别分0.905、0.757和0.907(95%可信区间均不包括参考线面积0.5，见图1)。

2.3 以 MCV ＜80 fl［6］、G6PD ＞14.0 U/gHb作为诊断地贫的最佳临界值，MCV、G6PD、两项并联和串联诊断地贫的灵敏度分别为99.4%、37.4%、99.4%和37.4%，特异度分别为47.0%、93.9%、43.9%和97.0%，MCV与两项并联的灵敏度和特异度比较，差异无统计学意义 (χ2=0.075，P＞0.05)，G6PD与两项串联的灵敏度和特异度比较，差异亦无统计学意义 (χ2=0.043，P＞0.05)，MCV诊断地贫的灵敏度显著高于两项串联的灵敏度 (χ2=159.7，p＜0.01)，两项串联诊断地贫的特异度显著高于MCV的特异度 (χ2=159.7，p＜0.01，见表2)。

2.4 地贫基因突变类型及其构成比 在163例地贫阳性样品中，其中α－地贫患者占57.7%，β－地贫患者占42.3%，在α－地贫基因型者又以 －SEA/aa基因型为主，占44.6%，－SEA(东南亚型缺失)携带者;在β－地贫基因型者又以41－42M/N基因型为主，占13.5%;α－地贫合并β－地贫占9.8%(见表3)。

图1 MCV、G6PD和两项联合诊断地贫的ROC曲线Figure 1 The ROC curves of MCV，G6PD and two joint diagnosis to the thalassanemia

表1 各组G6PD活性和MCV检测结果分析Table 1 The analysis of G6PD activity and MCV test results

表1 各组G6PD活性和MCV检测结果分析Table 1 The analysis of G6PD activity and MCV test results

组别 例数 G6PD(U/gHb) MCV(fl)α－地贫组94 12.54±3.53 69.41±4.95 β－地贫组 53 14.15±2.97 65.97±4.11 α+β－地贫组 16 12.80±1.75 69.24±3.29地贫组 163 13.09±3.29 68.28±4.80对照组66 10.63±2.18 82.58±10.13

表2 MCV、G6PD和两项联检诊断地贫结果比较〔n(%)〕Table 2 Thecomparative statement of MCV，G6PD and two joint diagnosis to the thalassanemia

表3 地贫基因突变类型及构成比Table 3 The thalassemia mutations type and constitute ratio

3 讨论

地贫是自体隐性遗传疾病，由于α珠蛋白基因或β珠蛋白基因缺失，使血红蛋白中的一种或一种以上的珠蛋白链缺如或不足所致。广东省是地贫的高发区之一，但用于确诊地贫的基因检测由于操作繁琐、费用高、实验条件要求苛刻，使其难以广泛应用于临床，不能作为地贫诊断的首选，因此地贫的筛查就显得尤为重要，筛查的方法有MCV和血红蛋白电泳等［5－7］。近年来有许多报道，红细胞G6PD活性的增高可以作为各类地贫的辅助诊断［8－9］。

本研究显示，各地贫组G6PD活性均较对照组增高，G6PD活性可用于地中海贫的诊断，ROC曲线分析本次研究显示:G6PD活性诊断地中海地血ROC曲线下面积为0.757，也支持G6PD活性可用于地中海贫的诊断，与国内的研究结论相同。

众所周知，MCV作为地贫初筛方法已使用多年，本研究数据与许多国内研究一致［10－12］，其中MCV诊断地贫的ROC曲线下面积为0.905，对小细胞性贫血如:地贫、缺铁性贫血等有诊断意义，但需通过血红蛋白电泳、游离铁测定、转铁蛋白测定等实验进行鉴别诊断。

作为筛选指标，应有较高的灵敏度，以减少漏诊［13－14］，本项研究表明:MCV、G6PD、两项并联和两项串联诊断地贫的灵敏度分别为99.4%、37.4%、99.4%和37.4%，MCV、MCV与G6PD活性两项并联可作为筛选地贫指标，灵敏度高，均为99.4%，其漏诊率最低，均为0.6%，因两者灵敏度相同或相近，在地贫的初筛实验中，MCV与G6PD两项并联应用的价值跟单一MCV指标无差异，无需并联筛选。而两项串联的灵敏度低，容易漏诊，漏诊率62.6%，不符合作为筛查指标的要求。因此，在地贫的初筛实验中MCV与G6PD联合应用的筛选价值不大，但如果MCV＜80 fl的同时，G6PD同时升高 (串联)，在排除缺铁性贫血等增生性贫血的情况下，诊断地贫的特异度为97.0%，远高于MCV单独指标的特异度(47.0%)，地贫的可能性愈大。本组资料显示:地贫主要是以α－地贫为主，而血红蛋白电泳对α－地贫筛选价值有限，如果MCV＜80 fl的同时，G6PD同时升高 (串联)，而血红蛋白电泳正常，则要考虑可能是α－地贫。因此，G6PD活性可作为α－地贫辅助筛选指标。

综上所述，在地贫的初筛试验中，MCV与G6PD活性并联的价值与MCV单项相近。但两项串联应用，可提高诊断地贫的特异度。

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