补肾复方对围绝经期大鼠卵巢超微结构的影响

丁原全，刘鹏，马乾章

（1 中国人民解放军沈阳军区卫生技术干部训练中心，辽宁 大连 116017； 2 辽宁中医药大学； 3 辽宁省中医院）

围绝经期卵巢功能衰退，卵泡闭锁，卵泡数量减少［1］，体内雌激素水平显著降低，从而出现各种临床症状。本研究观察了围绝经期大鼠卵巢的超微结构及补肾复方的干预作用，探讨补肾复方作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 雌性Wistar大鼠，由沈阳医学院实验动物中心提供。实验前，置辽宁省中医院动物实验中心动物室内适应性饲养1周。实验期间同一室内（室温18～22℃），12 h－12 h昼夜环境条件下笼养，自由饮水，摄食颗粒饲料（由沈阳医学院实验动物中心提供）。

1.1.2 药物 补肾复方由熟地、山药、山萸肉、菟丝子、仙灵脾、丹参组成。补肾复方和六味地黄汤生药均由辽宁省中医院门诊中药局提供，并经生药检验。由制剂室制作相应浓度的水煎剂，高压密封备用。

1.1.3 仪器 超薄切片机，瑞典LKBⅤ型；电子显微镜，日本JEM100CX－Ⅱ型。

1.2 方法

1.2.1 动物分组及处理 4月龄青年鼠（青年组）、18月龄老年鼠（老年组）各10只；11～12月龄鼠50只（根据阴道脱落细胞检查，无规律性动情周期变化，确定为围绝经期大鼠），随机分为模型组、对照组及补肾复方高、中、低剂量组各10只。补肾复方高、中、低剂量组大鼠分别给予高、中、低剂量补肾复方20 mL／kg（相当于人临床一日用量的10、6、3倍量，分别含生药5.80、3.50、1.75 kg／L），每天9：00灌胃；对照组灌服等体积六味地黄汤；模型组、青年组与老年组灌服等体积的生理盐水。

1.2.2 超微结构观察 大鼠灌药4周，于最后一次给药后24 h，以200 g／L乌拉坦腹腔注射麻醉后，固定，剖腹迅速取卵巢，切成1 mm3大小的组织块若干，以25 g／L戊二醛、10 g／L锇酸双重固定，乙醇梯度脱水，环氧树脂Epon812包埋，超薄切片机切片，厚度5μm，醋酸铀、柠檬酸铅双染色，于电镜下观察，并拍照。

2 结 果

各组电镜观察所见如下。①青年组：细胞处于增殖分化状态，卵巢皮质的浅表部有大量的卵泡。卵泡周围为单层扁平的颗粒细胞。在生长卵泡中可见多层颗粒细胞，其数量多，细胞核和细胞基质密度均匀，核大，核仁明显，胞质丰富。胞浆中滑面内质网、脂滴均较丰富，滑面内质网无扩张，线粒体分布均匀，囊泡形成较少，基质密度高，体积小，多为管状嵴；异染色质聚集核膜内侧。②模型组：颗粒细胞内线粒体嵴髓峭样变、空变，溶酶体空泡化，并可见滑面内质网扩张，颗粒细胞核孔增大，高尔基体肥大，线粒体肿胀，黄体细胞出现凋亡。③补肾复方高剂量组：细胞结构接近于青年组，细胞处于高度合成与分泌状态，胞浆中存在大量大小均匀的脂滴，电子密度高，滑面内质网充满胞浆，有丰富的高尔基复合体。④补肾复方中剂量组：滑面内质网丰富，中度扩张，胞质内脂滴较多，电子密度不等，线粒体数目增多，体积增大，部分线粒体肿胀，核膜扩张。⑤补肾复方低剂量组：颗粒细胞线粒体丰富，脂滴体积增大，滑面内质网轻度扩张，线粒体扩张显著，脂滴较多，大小不等，卵泡数量较青年组稍少，核膜扩张，核孔增宽。⑥对照组：颗粒细胞丰富，可见少量线粒体肿胀，卵泡细胞出现电子密度高的脂滴，高尔基复合体丰富，核膜扩张。⑦老年组：可见大量髓峭样结构，线粒体肿胀、空泡化，染色质浓缩、边集，基质较薄，电子密度低，可见细胞凋亡。

模型组大鼠卵泡明显少于青年组，闭锁卵泡增多。应用补肾复方后，生长卵泡增多，与对照组比较，补肾复方各剂量组卵巢的超微结构明显改善，表现在线粒体丰富、有大量的脂滴等，且呈一定的剂量效应关系。

3 讨 论

卵巢具有生殖和内分泌功能，其超微结构是鉴定卵巢发育状况，评定其活力及健康状况的重要手段之一。线粒体的形态结构、功能变化等易受细胞内、外环境的影响而发生明显的变化，是细胞病变或衰老最敏感的指标之一［2］。粗面内质网分布情况及发达程度可作为判断细胞功能状态和分化程度的一个指标。滑面内质网主要分布在能合成类固醇激素的细胞，其含有合成胆固醇的全套酶系和使胆固醇转化为类固醇激素如肾上腺激素、雄激素、雌激素的酶类，对内外环境的变化极为敏感，是诱发凋亡的重要细胞器之一［3－4］。高尔基复合体在细胞内膜的交通上也起重要作用。溶酶体能进行内源性和外源性物质的消化，还参与机体的免疫过程、某些生理活动和发育过程［5］。

本实验结果表明，补肾复方在卵巢局部的调节中发挥着重要的作用，可使卵巢滑面内质网增多，脂滴明显增多，线粒体数目增多，且呈一定的剂量效应关系，与高慧等［6］的结论基本吻合。雌激素合成的原料为胆固醇，其在体内以脂滴的形式存在，合成雌激素过程的关键酶为芳香化酶，芳香化酶存在于滑面内质网上。因此，一定的条件可使胆固醇转化成机体需要的雌激素，使卵巢的超微结构明显改变，从而改善卵巢的功能，有利于卵泡的生长发育，在一定程度上延缓卵巢的衰老。补肾复方可以直接作用于卵巢等组织，有类雌激素的治疗作用，能改善卵巢组织的营养状态，有效延缓卵巢组织的萎缩。

［1］BURGER H G，DUDLEY E C，ROBERSON D M，et al.Hor monal changes in the menopause transition［J］.Recent Prog Hor m Res，2002，57：257.

［2］TRIFUNOVIE A，LARSSON N G.Mitoehondrial dysf unction as a cause of ageing［J］.J Intern Med，2008，263（2）：167.

［3］CHEN X Z，DOUG LAS B K，LUO J，et al.Endoplasmie reticulu m Ca2＋dysregulation and endoplasmic reticul um sress following in vitro neuronal ischemia of Na＋－K＋－Cl－contransporter［J］.J Neurochem，2008，106（11）：1563.

［4］MONIQUE C S，BARRY J C，TAREK M S.Ischemic tolerance following low dose NMDA involves modulation of cellular stress proteins［J］.Brain Research，2009，1247（2）：212.

［5］TURK V，TURK B，GUNCAR G，et al.Lysosomal cathepsins：structure，role in antigen processing and presentation and cancer［J］.Adv Enzy me Regul，2002，42：285.

［6］高慧，杨涓，夏天，等.补肾调冲方对卵巢早衰大鼠性激素水平和卵巢组织形态学的影响［J］.国医论坛，2008，23（1）：35.