血浆1－3－β－D葡聚糖检测在深部真菌感染患者中的临床价值

李兰亚（江苏省沭阳县中医院检验科 223600）

随着免疫抑制患者的增多，临床中发生深部真菌感染的概率也越来越高。一般来说，深部真菌感染通常发生于危重患者，对于这些患者的治疗成功与否很大程度上取决于能否快速识别入侵的病原菌。通过检测体液中真菌抗原或代谢物来诊断深部真菌感染的研究很多［1-2］，其中之一就是关于真菌的细胞壁成分为1－3－β－D葡聚糖。除结合菌外，所有真菌的细胞膜上都含有1－3－β－D葡聚糖，而其他微生物、动物及人的细胞成分和细胞外液都不含这种成分，因此在机体的体液中检测到1－3－β－D葡聚糖是诊断深部真菌感染的有效依据［3］。本研究采用MB－80微生物快速动态检测系统，检测了深部真菌感染患者的血浆1－3－β－D葡聚糖含量，并探讨其临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 来自本院2010年1月至2011年10月住院深部真菌感染患者60例，其中男35例，女25例，年龄10～85岁，平均（58.6±26.9）岁。均经培养证实存在深部真菌感染，感染部位包括呼吸道、血液、泌尿道及静脉插管引起的系统性感染。诊断标准按照欧洲肿瘤研究治疗组织（EORTC）深部真菌感染合作组（IFICG）和国家过敏及感染类疾病研究所（NIAID）真菌病研究组（MSG）对深部真菌感染的定义和分类进行判断［4］，判断过程结合临床，患者出院后进行总结。另外选取健康体检者30名作为健康对照组。

1.2 仪器与试剂 MB－80微生物快速动态检测系统、T01智能恒温仪、冰浴槽以及GKT－5M Set动态真菌检测试剂盒（定量）均由北京金山川科技发展有限公司提供。

1.3 血浆1－3－β－D葡聚糖检测方法

1.3.1 血浆样品制备 用含有少许无菌抗凝剂（肝素钠）的无菌玻璃注射器或一次性采血管采取静脉血1～2 mL，缓慢放入无热源离心管中，用灭菌铝箔封闭管口以防污染，然后3 000 r／min离心60 s，分离得富血小板血浆（PRP），取出后立即放入冰水浴中直到下一步，若暂时不用，可在－30℃冰箱中保存1个月。取上述富血小板血浆0.05 mL，加入装有0.45 mL样品处理液中，混匀后70℃保温10min，取出后立刻放入冰水浴中，即为待测血浆样品。

1.3.2 测定分析 取待测血浆0.2 mL直接加入反应主剂中，溶解后使用微量加样器转移至10mm×75mm标准玻璃反应管中（不要产生气泡），插入 MB－80微生物快速动态检测系统中进行反应，反应结束后由标准曲线自动计算出待测血浆中1－3－β－D葡聚糖含量。操作过程中注意避免微生物及细菌污染。

1.4 统计学处理 应用统计软件包SPSS15.0进行t检验，取P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

深部真菌感染组血浆1－3－β－D葡聚糖含量最高为142.44 ng／L，最低为12.99 ng／L，平均值为（48.96±29.33）ng／L；健康对照组血浆1－3－β－D葡聚糖含量最高为6.48 ng／L，最低为0.40 ng／L，平均值为（2.55±1.97）ng／L。经SPSS统计软件t－检验分析，两组1－3－β－D葡聚糖平均值差异有统计学意义（P＜0.01）。

3 讨 论

随着医疗技术的发展，危重患者的生存时间越来越长，广谱抗生素广泛地用于危重患者感染的降阶梯抗炎治疗，免疫抑制剂的应用改善了器官移植患者的器官排异，但深部真菌感染亦较移植前更常见。尽管进行有力的抗真菌治疗，深部真菌感染的病死率仍居高不下。真菌培养的确可为临床提供最为直接的诊断依据，但培养方法耗时长，不适宜用作早期诊断。而免疫学方法，往往需要作多种真菌抗原或抗体检测，既费时又不经济，且当抗原谱或抗体谱不全时也极易造成漏诊。

葡聚糖广泛存在于真菌细胞壁中，占其干燥质量的80%～90%。1－3－β－D葡聚糖是一种多聚糖成分，特异的存在于除结合菌和隐球菌外的其他真菌。1－3－β－D葡聚糖可以被G因子检测出来，G因子是马蹄蟹的一种凝血因子。本研究利用真菌β葡聚糖激活酶反应主剂中的相应因子后形成凝固蛋白，根据其浊度变化对真菌β葡聚糖浓度进行定量。原核生物、病毒和人类的细胞都没有葡聚糖，如出现在血和其他无菌体液中则提示深部真菌感染。国内目前葡聚糖检测手段有比浊法，一些国内的研究证明其可以有效地诊断深部真菌感染。本研究深部真菌感染组的血浆葡聚糖水平明显高于健康对照组，差异具有统计学意义，与研究结果一致［5-6］。

虽然检测1－3－β－D葡聚糖只能提示有无真菌侵袭性感染，不能确定为何种真菌，这是此方法的缺陷，但也可能转化为一种优势。近年来，一些罕见的条件致病真菌也可引起深部感染，这就要求一种能迅速确定有无深部真菌感染的方法，因系统抗真菌药物种类较少，抗菌谱较广，不因真菌种类而异。当检测到标本中葡聚糖含量较高时，即刻予以系统治疗，否则会贻误最佳治疗时机。本研究检测的深部真菌感染患者均经细菌培养证实为念珠菌感染，若以10 ng／L为cut－off值，则阳性率为100.0%；20 ng／L为cut－off值，则阳性率为91.4%。所以血清葡聚糖检测可为临床医生早期诊断机体是否感染真菌的提供实验依据，具有重要的临床价值，值得推广。

［1］Yoshida K.Recent advances of serodiagnosis for systemic fungal infections［J］.Nihon Ishinkin Gakkai Zasshi，2006，47（3）：135－142.

［2］熊祝嘉，徐英春.半乳甘露聚糖用于侵袭性曲霉感染实验诊断的研究现状［J］.中国真菌学杂志，2007，2（1）：52－54.

［3］廖军，郝飞.深部真菌感染血清真菌成分检测方法研究进展［J］.国外医学：临床生物化学与检验学分册，2002，23（2）：85－86.

［4］Ascioglu S，Rex JH，de Pauw B，et al.Defining opportunisticinvasive fungal infections in immunocompromised patients with cancer and hematopoietic stem cell transplants：an internationalconsensus［J］.Clin Infect Dis，2002，34（1）：7－14.

［5］杨洁琼.深部真菌感染患者血浆1，3－β－D葡聚糖检测的临床价值［J］.现代检验医学杂志，2009，24（2）：12－13.

［6］李军，王浚霁，陈伟，等.（1，3）－β－D葡聚糖检测对侵袭性真菌感染的诊断意义［J］.检验医学与临床，2010，7（17）：1804－1805.