气体信号分子硫化氢与缺血再灌注损伤

王新宝

(首都医科大学附属北京友谊医院儿科，北京 100050)

气体信号分子具有持续产生、迅速弥散、作用广泛等特点，在机体中发挥着重要的调节作用，近年来研究［1-3］发现硫化氢(hydrogen sulfide，H2S)是继内源性气体分子一氧化氮(notric oxide，NO)和一氧化碳(carbon monoxide，CO)之后的第3种气体信号分子，在机体中发挥着重要的生物学作用，是目前生物学研究领域的热点之一。随着目前导管技术、动脉搭桥技术、冠状动脉血管成形术、心肺复苏、体外循环开胸直视手术、断指再植和器官移植等新技术的应用，缺血再灌注损伤更为常见，探索减轻缺血再灌注(ischemic reperfusion，I/R)损伤的方法具有重要的生物学意义，本文就H2S在I/R损伤中的作用和机制进行了综述。

1 内源性H2S的生成与代谢

H2S在体内可以通过胱硫酸-β-合成酶(cystathionine-β-synthase，CBS)、胱硫醚 －γ －裂解酶(cystathionine-γ-lyase，CSE)的催化作用，以半胱氨酸为底物产生，CSE主要存在于心血管组织中，而CBS主要存在于神经系统［3］，在线粒体内，则以巯基丙酮酸为底物，在巯基丙酮酸转硫酶(mercaptopyruvate transsulphurase，MPST)的作用下产生 H2S［4-5］，H2S 在体内大部分通过氧化代谢生成硫代硫酸盐和硫酸盐，然后经肾脏排出体外。

2 H2S与器官缺血再灌注损伤

研究［6-17］表明H2S可以明显减轻心脏、肺、肝脏、肾脏和小肠的I/R损伤，对组织器官的I/R具有广泛的保护作用。

2.1 H2S减轻心脏I/R损伤

在离体心肌细胞中，给予100 μmol/L的硫氢化钠(H2S供体，NaHS)30 min，然后培养20 h，再进行I/R(5 min/10 min)处理，研究［18］发现 NaHS使细胞活性增强，而给予环氧酶－2(COX-2)抑制剂NS-398可使NaHS的保护作用消失，同时NaHS上调COX-2的表达和前列腺素E2(prostaglanding E2，PGE2)产生，给予KATP抑制剂格列本脲和PKC抑制剂chelerythrine可使NaHS对COX-2的诱导效应消失，给予一氧化氮合酶抑制剂 NG-硝基-L-精氨酸甲酯对COX-2的表达无明显影响，但可抑制NaHS上调COX-2的表达和PGE2产生作用，上述研究表明NaHS的心肌保护效应可能通过KATP/PKC依赖的对COX-2的诱导表达和NO诱导的COX-2的活性途径发挥作用，同时KATP/PKC/ERK1/2和PI3K/Akt也参与了NaHS的心肌保护作用［19］。在离体大鼠心脏I/R(40 min/120 min)模型中，在缺血前10 min给予 NaHS(40 μmol/L)，H2S的心肌保护作用可能与激活热休克蛋白72表达有关［20］。在离体灌流心脏I/R(30 min/90 min)大鼠模型中，1 μmol/L NaHS可明显降低I/R后心肌梗死面积，KATP抑制剂格列本脲和5-HD可抑制NaHS的心肌保护作用［21］。在离体灌流心脏I/R(40 min/60 min)大鼠模型中，内源性H2S介导了缺血后处理的心肌保护作用，并且H2S后处理(间断给予NaHS 6次，每次10 s或给予NaHS 2 min)通过激活Akt、PKC和eNOS途径减轻I/R 损伤［22］。

Calvert J W 等［23］利用在体小鼠心脏 I/R(45 min/24 h)模型，在缺血前24 h给予Na2S(100 μg/kg，iv)，研究发现心肌梗死面积减少46%，在早期(再灌注后30 min和2 h)，H2S使核内的nrf2(一种调节抗氧化基因表达的调节因子)基因表达增高，并使血红素加氧酶－1表达增高;在再灌注后24 h，H2S可使热休克蛋白90、热休克蛋白70、Bcl-2、Bcl-xL和环氧酶－2增高，并使凋亡前基因bad灭活，H2S的心肌保护作用与抗氧化和抗凋亡的信号有关。在大鼠心脏I/R(25 min/120 min)模型中，NaHS可明显降低缺血区caspase 9活性，使Bcl-2表达降低，上述作用可被5-HD抑制，进一步的研究［24］表明NaHS可降低 p38 MAPK和JNK的表达、抑制p65 NF-κb基因转位和细胞内黏附分子的表达，减轻多形核白细胞的聚集，降低髓过氧化物酶的活性，上述研究表明H2S的心肌保护作用与抗凋亡和抗炎性反应有关。在猪的心脏I/R(60 min/120 min)中，在缺血前10 min给予Na2S(100 μg·kg－1bolus+1 mg·kg－1·h－1infusion)，可明显降低心肌梗死面积，减少细胞凋亡，降低caspase-3和PARP 表达［25-26］。Sodha N R 等［27］采用猪的在体心脏I/R(60 min/120 min)模型，在缺血前10 min给予Na2S(100 μg/kg)，可使心肌梗死面积减少2.3倍，同时组织中白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、IL-8、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor，TNF-α)和髓过氧化物酶的水平明显降低。

2.2 H2S减轻脑I/R损伤

Florian B等［28］采用大鼠暴露于 H2S气体(含80ppm H2S和19.5%O2)中2 d，发现大鼠脑中的H2S含量增高，诱导了一定程度的低体温，使梗死面积减少50%，进一步采用胎儿小鼠子宫内I/R(5 min/24 h)模型，研究发现胎儿小鼠脑中谷胱甘肽(glutathione，GSH)水平降低 24%，而在缺血前给予 H2S(0.437 5 μmol/kg，i.p.15 min)，可改善胎鼠脑中GSH 水平［29］。Minamishima S 等［25］研究在心脏骤停/心肺复苏的小鼠模型中，给予H2S(0.55 mg/kg)能改善神经系统的功能，降低凋亡蛋白caspase-3的激活，同时增强脑皮质抗凋亡蛋白GSK-3β的磷酸化。另外H2S可通过促进谷胱甘肽的产生而保护神经元免受氧化损伤［30］。NaHS(0.05 －0.01 mmol/L)减轻蛋氨酸诱导的脑内皮细胞过氧化氮和超氧阴离子所致的氧化损伤，减少脑细胞的死亡［31］。Qu K 等［32］采用大鼠大脑中动脉栓塞模型发现，在阻塞前给予0.18 mmol/kg NaHS，使梗死的容积增大150%，给以CBS和CSE抑制剂明显减少了梗死容积，上述研究结果的不同可能与给药方式和剂量不同有关。

2.3 H2S减轻肺I/R损伤

在离体大鼠肺I/R(45 min/45 min)模型中，研究发现I/R使肺组织中H2S增加54%，CSE活性增加43%，在缺血前5 min给予H2S气体溶液(50 μmol/L或100 μmol/L)，降低了MDA的产生，同时使SOD和CAT的活性增强，抑制了自由基的产生，减轻了肺I/R损伤，说明内源性H2S对肺I/R损伤的保护作用与减少自由基的生成有关［14］。

2.4 H2S减轻肝脏I/R损伤

在小鼠的肝脏I/R(60 min/5 h)模型中，H2S可降低I/R后血清中的血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和血清门冬氨酸氨基转移酶(AST)，H2S介导的细胞保护作用与改善GSH和氧化型谷胱甘肽(GSSG)的平衡相关，减少脂质过氧化的形成，同时H2S通过增强HSP-90和Bcl-2的表达抑制I/R诱导的细胞凋亡［13］。在大鼠肝脏缺血30 min，再灌注后1、3 和6 h，发现I/R后各时间点的血清中H2S水平和CSE活性增高，血清中TNF-α水平和肝脏TNF-α蛋白表达增高，而给予NaHS后，血清中TNF-α水平和肝脏TNF-α蛋白表达降低，PAG可加重肝脏I/R损伤，上述研究表明H2S通过抑制炎性反应、抑制凋亡而减轻肝脏I/R 损伤［33］。H2S(14 μmol/kg)可明显降低 I/R 后脂质过氧化的产生，抑制炎性反应因子(包括NO、TNF-α、IL-10和细胞内黏附分子1)，减少细胞凋亡，降低细胞凋亡相关蛋白的表达，包括caspase-3、Fas和TNF-α表达，而PAG可加重上述指标的变化［34］。

2.5 H2S减轻小肠I/R损伤

在体外培养的大鼠肠细胞分别缺氧1 h、2 h或3 h，均复氧3 h，NaHS均在缺氧(或缺血)前20 min中给予，H2S(10 μmol/L)可使缺氧1 h的细胞凋亡指数明显减低;缺氧 3 h 后给予 1 μmol/L、10 μmol/L 和100 μmol/L H2S同样可使细胞凋亡指数明显降低。在大鼠体内H2S(10或100 μmol/L)可使I/R(1 h/3 h)的肠保持正常的颜色、绒毛形态，缺血2 h再灌注3 h后，只有10 μmol/L H2S处理的肠没有损伤，上述研究表明H2S可明显减轻肠的I/R损伤［35］。但是有趣的是，在随后的研究中，NaHS均在缺氧或缺血前20 min中给予，体外肠细胞培养研究发现，10 μmol/L H2S在肠细胞缺氧1、2或3 h时均能降低细胞凋亡指数，而100 μmol/L H2S只在缺氧2 h时能降低凋亡指数;在体内肠 I/R中，在缺血 1 h，10或 100 μmol/L H2S均能减轻 I/R 损伤，缺血2 h，10 μmol/L H2S能减轻肠损伤而100 μmol/L H2S不具有上述作用，在缺血3 h时，均不具有减轻肠损伤的作用［7］，上述研究表明H2S对肠I/R损伤的保护作用与给药时间和浓度有一定的关系。

2.6 H2S减轻肾脏I/R损伤

CBS是肾脏转硫途径中的限速酶，Xu Z等［36］通过研究SD大鼠左侧肾脏I/R(45 min/6 h)模型发现，I/R导致了肾脏的脂质过氧化和细胞死亡，CBS活性降低，H2S的生成减少，而另外一种H2S的生成酶CSE在肾脏中没有明显变化，给予NaHS(100 μg/kg)可明显改善肾脏功能，上述研究表明在肾脏中保持一定的H2S水平可以减轻I/R损伤。

在小鼠双侧肾脏I/R(30 min/24 h)模型中，I/R后CSE表达明显增高，H2S水平增高，在缺血前30 min和再灌注6 h给予NaHS(100 μmol/kg)，可改善I/R损伤造成的肾功能障碍，使血清中肌酐和尿素氮水平明显降低［37］。在 Wistar大鼠双侧肾脏 I/R(45 min/72 h)模型中，CSE抑制剂PPG可抑制肾功能的恢复，血清中肌酐和尿素氮水平明显增高。NaHS(100 μmol/kg)在肾脏缺血前15 min和再灌注前5 min 2次给予，在肾脏缺血45 min再灌注30 min时，NaHS可明显降低丝裂原激酶的磷酸化(p38、c-JNK和ERK)和激活NF-κB，在再灌注6 h时，NaHS明显减轻急性肾小管坏死，使抗凋亡蛋白Bcl-2增高，NF-κB依赖的相关蛋白降低(iNOS、COX-2和ICAM-1)，以上研究表明CSE在肾脏I/R后恢复功能拮抗损伤是必要的，NaHS可降低肾脏I/R损伤和功能障碍，其保护作用与抗凋亡和抗炎性反应有关［17］。在猪的主动脉阻塞诱导的肾脏I/R损伤模型中，利用主动脉内气囊阻塞使肾脏缺血90 min然后再灌注8 h，Na2S使血液中IL-6、IL-1β和硝基硝酸盐水平降低，同时降低iNOS 和 Bcl-xL 表达，使 NF-κB 激活增高［38］。

2.7 H2S减轻肌肉I/R损伤

在培养的小鼠骨骼肌细胞缺氧复氧模型中，发现给予10 μmol/L H2S其保护作用明显。在小鼠下肢骨骼肌I/R(3 h/3 h)模型中，10 μmol/L H2S可明显减轻I/R所致的细胞损伤，降低凋亡指数［39］。在体外培养的肌细胞中，H2S在缺氧1、3和5 h使凋亡指数分别降低75%(P=0.002)、80%(P=0.006)和83%(P＜0.001)。在小鼠下肢骨骼肌I/R模型中，H2S可明显减轻损伤，降低细胞凋亡指数，在再灌注前20 min给予H2S可有明显的细胞保护作用，但在缺血前1 min给予H2S不具有上述保护作用，以上研究表明H2S可减轻骨骼肌I/R损伤，H2S的剂量和给予时间是影响治疗效果的因素［40］。

2.8 器官移植

H2S在各种缺氧和炎性反应疾病中能诱导低代谢和血流动力学［41］，能减轻在体移植皮瓣的损伤，从而提高成活率［42］，通过NOS-3依赖的信号途径改善心脏骤停后心脏复苏的效果［25］。在无心跳供体猪肾脏移植研究［31］中发现，H2S能改善肾功能障碍相关的缺血损伤，改善肾脏供血，增高肌酐清除率，减轻氧化损伤［6］，能抑制休克诱导的代谢性酸中毒，降低iNOS的表达和NO的产生［43］。

3 H2S减轻I/R损伤的机制

3.1 ATP敏感性钾 (ATP sensitive potassium，KATP)通道

Bian J S等［44］对离体心肌细胞 I/R(9 min/10 min)研究表明，在缺血前间断3次给予NaHS(100 μmol/L，每次3 min)可明显减轻I/R损伤作用，细胞活力增强，细胞内钙浓度降低，给予膜KATP通道特异性抑制剂HMR-1098和非选择性KATP抑制剂格列本脲均能使NaHS对大鼠心肌I/R的保护作用消失，而给予线粒体KATP通道抑制剂 (5-HD，100 μmol/L)无上述作用，说明膜KATP通道在H2S减轻心肌I/R中发挥着重要的作用。然而，Johansen D等［15］在离体大鼠心脏I/R(30 min/120 min)模型研究［31］中发现，给予5-HD(100 μmol/L)可抑制NaHS(100 μmol/L)对心脏I/R的保护作用，Sivarajah A等［45］采用在体大鼠心脏I/R模型(25 min/120 min)研究发现，给予5-HD(5 mg/kg)可抑制NaHS的心肌保护作用，上述研究表明线粒体KATP也参与了NaHS的心肌保护作用，之所以研究结果略有不同可能与NaHS的给药方式和动物模型不同有关。

3.2 减轻氧自由基损伤

Jha S等［13］研究表明在小鼠的肝脏I/R(60 min/5 h)模型中，H2S可减轻I/R损伤，降低血浆中升高的ALT和AST，使GSH/GSSG比值增高，上调细胞的抗氧化能力。另外H2S可减轻肺I/R损伤［14］，降低肺组织中MDA的生成，使抗氧化物质SOD和CAT的活性增强，减少超氧阴离子产生，MDA是氧自由基攻击生物膜中的不饱和脂肪酸而形成的脂质过氧化物，它能生成聚合物并与人体内的蛋白质和脱氧核糖核酸发生反应，使蛋白质的结构变异。研究［31］中发现H2S可以明显减轻高同型半胱氨酸诱导的小鼠脑的氧化损伤，增强GSH、CAT和SOD的活性，减少氧自由基的生成。在培养的大鼠神经细胞中，H2S通过增高GSH的产生，而抑制线粒体中的氧化应激［29］，上述研究表明H2S的细胞保护作用与抑制自由基的生成，增强细胞抗氧化能力有关

3.3 减少细胞凋亡

Hu Y 等［19］采用 H2S(1 ～100 μmol/L)预处理，发现H2S增强了细胞活性，在预处理过程中使用ERK1/2或Akt的抑制剂可减弱H2S的心肌保护作用，蛋白免疫印记分析表明H2S预处理增强了ERK1/2或Akt磷酸化表达。Minamishima S等［25］采用离体成年大鼠心肌细胞缺氧6 h复氧12 h研究H2S对凋亡途径的作用，发现NaHS减少了caspase-3的激活，降低了核碎裂DNA片段，说明抑制了心肌I/R损伤的凋亡。Sivarajah A等［24］发现大鼠局部心肌缺血增强了p38 MAPK和JNK1/2的磷酸化，在缺血前给予NaHS可明显降低p38 MAPK和JNK1/2的磷酸化。另外，H2S对大鼠心肌I/R的保护作用与下调c-Fos蛋白的表达有关［46］，在小鼠心肌缺血45 min再灌注120 min后，心肌未裂解的caspase-3的表达减少，裂解的caspase-3活性增强，而给予Na2S后，有活性的裂解caspase-3明显降低，说明Na2S抑制了I/R过程的凋亡途径。热休克蛋白(heat shock proteins，HSPs)与细胞凋亡关系密切，其作用机制与HSP抑制应激激活蛋白激酶、抑制凋亡基因P53和Bax的表达和氧自由基生成以及对细胞线粒体功能的保护作用有关［47］。在心肌I/R 研究［20，23］中发现，H2S 明显增高 HSP90、HSP70 或HSP72蛋白表达，另外，研究［13］表明H2S明显增高小鼠肝脏I/R后肝组织中HSP90的表达，上述研究表明H2S的抗凋亡作用与上调HSPs家族有关。另外，Yao L L等［48］研究表明，NaHS通过诱导 GSK-3β 的磷酸化，然后抑制线粒体通透性转换孔的开放，减少心肌细胞缺氧复氧所致的凋亡。

3.4 抑制炎性反应

研究［24］表明在大鼠心脏 I/R后，心肌中炎性反应因子ICAM-1和髓过氧化物酶水平明显增高，NF-κB蛋白表达明显增高，缺血前给予NaHS(3 mg/kg)后，ICAM-1和髓过氧化物酶水平明显下降，NF-κB蛋白表达明显降低，另外，研究［27］表明H2S可明显降低猪I/R后心肌组织中相关炎性反应因子(IL-6、IL-8和TNF-α)的水平，同时髓过氧化物酶水平明显降低，在大鼠肝I/R中，H2S可降低血清中相关炎性反应因子(NO、ICAM-1、IL-10 和 TNF-α)的水平［34］，上述研究表明H2S对I/R损伤的炎性反应介质具有明显的抑制作用。环氧合酶(cyclcoxygenase，COX)是前列腺素合成过程中一个重要限速酶，分为结构型(COX-1)和诱导型(COX-2)。COX-1主要位于内质网上，COX-2集中在核膜上，受炎性反应信号、生长因子等刺激而增加［49］，COX-2通过促进氧自由基的生成、增加细胞内钙超载和降解细胞外基质等加重I/R损伤［50］。研究［17-18，23］表明心肌 I/R 后，心肌组织中 COX-2 蛋白表达明显降低，给予H2S可使I/R后心肌COX-2蛋白表达明显增高，上述研究表明H2S对I/R损伤的炎性反应具有明显的抑制作用。

总之，H2S对器官I/R具有广泛的保护作用，其机制与抑制自由基的形成、减少细胞凋亡、抑制炎性反应和KATP通道等有关，探索H2S的机制及应用方式具有重要的意义，可为临床的药物开发提供实验基础。

［1］Du J B，Chen X B，Geng B，et al.Hydrogen sulfide as a messenger molecule in cardiovascular system［J］.J Peking Univ(Health Sci)(Chin)，2002，34:187.

［2］Tang C，Li X，Du J.Hydrogen sulfide as a new endogenous gaseous transmitter in the cardiovascular system［J］.Curr Vasc Pharmacol，2006，4(1):17-22.

［3］Wang R.Two's company，three's a crowd:can H2S be the third endogenous gaseous transmitter?［J］.FASEB J，2002，16(13):1792-1798.

［4］Stipanuk M H，Beck P W.Characterization of the enzymic capacity for cysteine desulphhydration in liver and kidney of the rat［J］.Biochem J，1982，206(2):267-277.

［5］Tang C，Li X，Du J.Hydrogen sulfide as a new endogenous gaseous transmitter in the cardiovascular system［J］.Curr Vasc Pharmacol，2006，4(1):17-22.

［6］Hosgood S A，Nicholson M L.Hydrogen sulphide ameliorates ischaemia-reperfusion injury in an experimental model of non-heart-beating donor kidney transplantation［J］.Br J Surg，2010，97(2):202-209.

［7］Henderson P W，Weinstein A L，Sohn A M，et al.Hydrogen sulfide attenuates intestinal ischemia-reperfusion injury when delivered in the post-ischemic period［J］.J Gastroenterol Hepatol，2010，25(10):1642-1647.

［8］Zhuo Y，Chen P F，Zhang A Z，et al.Cardioprotective effect of hydrogen sulfide in ischemic reperfusion experimental rats and its influence on expression of survivin gene［J］.Biol Pharm Bull，2009，32(8):1406-1410.

［9］Osipov R M，Robich M P，Feng J，et al.Effect of hydrogen sulfide in a porcine model of myocardial ischemia-reperfusion:comparison of different administration regimens and characterization of the cellular mechanisms of protection［J］.J Cardiovasc Pharmacol，2009，54(4):287-297.

［10］Liu H，Bai X B，Shi S，et al.Hydrogen sulfide protects from intestinal ischaemia-reperfusion injury in rats［J］.J Pharm Pharmacol，2009，61(2):207-212.

［11］Bos E M，Leuvenink H G，Snijder P M，et al.Hydrogen sulfide-induced hypometabolism prevents renal ischemia/reperfusion injury［J］.J Am Soc Nephrol，2009，20(9):1901-1905.

［12］Pan T T，Neo K L，Hu L F，et al.H2S preconditioning-induced PKC activation regulates intracellular calcium handling in rat cardiomyocytes［J］.Am J Physiol Cell Physiol，2008，294(1):C169-C177.

［13］Jha S，Calvert J W，Duranski M R，et al.Hydrogen sulfide attenuates hepatic ischemia-reperfusion injury:role of antioxidant and antiapoptotic signaling［J］.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2008，295(2):H801-806.

［14］Fu Z，Liu X，Geng B，et al.Hydrogen sulfide protects rat lung from ischemia-reperfusion injury［J］.Life Sci，2008，82(23-24):1196-1202.

［15］Johansen D，Ytrehus K，Baxter G F.Exogenous hydrogen sulfide(H2S)protects against regional myocardial ischemia-reperfusion injury-Evidence for a role of K ATP channels［J］.Basic Res Cardiol，2006，101(1):53-60.

［16］Nicholson C K，Calvert J W.Hydrogen sulfide and ischemiareperfusion injury［J］.Pharmacol Res，2010，62(4):289-297.

［17］Tripatara P，Patel N S，Collino M，et al.Generation of endogenous hydrogen sulfide by cystathionine gamma-lyase limits renal ischemia/reperfusion injury and dysfunction［J］.Lab Invest，2008，88(10):1038-1048.

［18］Hu L F，Pan T T，Neo K L，et al.Cyclooxygenase-2 mediates the delayed cardioprotection induced by hydrogen sulfide preconditioning in isolated rat cardiomyocytes［J］.Pflugers Arch，2008，455(6):971-978.

［19］Hu Y，Chen X，Pan T T，et al.Cardioprotection induced by hydrogen sulfide preconditioning involves activation of ERK and PI3K/Akt pathways［J］.Pflugers Arch，2008，455(4):607-616.

［20］Bliksoen M，Kaljusto M L，Vaage J，et al.Effects of hydrogen sulphide on ischaemia-reperfusion injury and ischaemic preconditioning in the isolated，perfused rat heart［J］.Eur J Cardiothorac Surg，2008，34(2):344-349.

［21］Ji Y，Pang Q F，Xu G，et al.Exogenous hydrogen sulfide postconditioning protects isolated rat hearts against ischemia-reperfusion injury［J］.Eur J Pharmacol，2008，587(1-3):1-7.

［22］Yong Q C，Lee S W，Foo C S，et al.Endogenous hydrogen sulphide mediates the cardioprotection induced by ischemic postconditioning［J］.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2008，295(3):H1330-1340.

［23］Calvert J W，Jha S，Gundewar S，et al.Hydrogen sulfide mediates cardioprotection through Nrf2 signaling［J］.Circ Res，2009，105(4):365-374.

［24］Sivarajah A，Collino M，Yasin M，et al.Anti-apoptotic and anti-inflammatory effects of hydrogen sulfide in a rat model of regional myocardial I/R［J］.Shock，2009，31(3):267-274.

［25］Minamishima S，Bougaki M，Sips P Y，et al.Hydrogen sulfide improves survival after cardiac arrest and cardiopulmonary resuscitation via a nitric oxide synthase 3-dependent mechanism in mice［J］.Circulation，2009，120(10):88-896.

［26］Sodha N R，Clements R T，Feng J，et al.The effects of therapeutic sulfide on myocardial apoptosis in response to ischemia-reperfusion injury［J］.Eur J Cardiothorac Surg，2008，33(5):906-913.

［27］Sodha N R，Clements R T，Feng J，et al.Hydrogen sulfide therapy attenuates the inflammatory response in a porcine model of myocardial ischemia/reperfusion injury［J］.J Thorac Cardiovasc Surg，2009，138(4):977-984.

［28］Florian B，Vintilescu R，Balseanu A T，et al.Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia［J］.Neurosci Lett，2008，438(2):180-185.

［29］Kimura Y，Goto Y，Kimura H.Hydrogen sulfide increases glutathione production and suppresses oxidative stress in mitochondria［J］.Antioxid Redox Signal，2010，12(1):1-13.

［30］Soejima A，Matsuzawa N，Hayashi T，et al.Alteration of redox state of human serum albumin before and after hemodialysis［J］.Blood Purif，2004，22(6):525-529.

［31］Tyagi N，Moshal K S，Sen U，et al.H2S protects against methionine-induced oxidative stress in brain endothelial cells［J］.Antioxid Redox Signal，2009，11(1):25-33.

［32］Qu K，Chen C P，Halliwell B，et al.Hydrogen sulfide is a mediator of cerebral ischemic damage［J］.Stroke，2006，37(3):889-893.

［33］Kang K，Jiang H C，Zhao M Y，et al.［Protection of CSE/H2S system in hepatic ischemia reperfusion injury in rats］［J］.Zhonghua Wai Ke Za Zhi，2010，48(12):924-928.

［34］Kang K，Zhao M，Jiang H，et al.Role of hydrogen sulfide in hepatic ischemia-reperfusion-induced injury in rats［J］.Liver Transpl，2009，15(10):1306-1314.

［35］Henderson P W，Weinstein A L，Sung J，et al.Hydrogen sulfide attenuates ischemia-reperfusion injury in in vitro and in vivo models of intestine free tissue transfer［J］.Plast Reconstr Surg，2011，127(1):487-488.

［36］Xu Z，Prathapasinghe G，Wu N，et al.Ischemia-reperfusion reduces cystathionine-beta-synthase-mediated hydrogen sulfide generation in the kidney［J］.Am J Physiol Renal Physiol，2009，297(1):F27-35.

［37］Tripatara P，Patel N S，Brancaleone V，et al.Characterisation of cystathionine gamma-lyase/hydrogen sulphide pathway in ischaemia/reperfusion injury of the mouse kidney:an in vivo study［J］.Eur J Pharmacol，2009，606(1-3):205-209.

［38］Simon F，Scheuerle A，Groger M，et al.Effects of intravenous sulfide during porcine aortic occlusion-induced kidney ischemia/reperfusion injury［J］.Shock，2011，35(2):156-163.

［39］Henderson P W，Singh S P，Weinstein A L，et al.Therapeutic metabolic inhibition:hydrogen sulfide significantly mitigates skeletal muscle ischemia reperfusion injury in vitro and in vivo［J］.Plast Reconstr Surg，2010，126(6):1890-1898.

［40］Henderson P W，Jimenez N，Ruffino J，et al.Therapeutic delivery of hydrogen sulfide for salvage of ischemic skeletal muscle after the onset of critical ischemia［J］.J Vasc Surg，2011，53(3):785-791.

［41］Aslami H，Schultz M J，Juffermans N P.Potential applications of hydrogen sulfide-induced suspended animation［J］.Curr Med Chem，2009，16(10):1295-1303.

［42］Henderson P W，Singh S P，Belkin D，et al.Hydrogen sulfide protects against ischemia-reperfusion injury in an in vitro model of cutaneous tissue transplantation［J］.J Surg Res，2010，159(1):451-455.

［43］Ganster F，Burban M，de La Bourdonnaye M，et al.Effects of hydrogen sulfide on hemodynamics，inflammatory response and oxidative stress during resuscitated hemorrhagic shock in rats［J］.Crit Care，2010，14(5):R165.

［44］Bian J S，Yong Q C，Pan T T，et al.Role of hydrogen sulfide in the cardioprotection caused by ischemic preconditioning in the rat heart and cardiac myocytes［J］.J Pharmacol Exp Ther，2006，316(2):670-678.

［45］Sivarajah A，McDonald M C，Thiemermann C.The production of hydrogen sulfide limits myocardial ischemia and reperfusion injury and contributes to the cardioprotective effects of preconditioning with endotoxin，but not ischemia in the rat［J］.Shock，2006，26(2):154-161.

［46］Zhu X Y，Yan X H，Chen S J.H2S protects myocardium against ischemia/reperfusion injury and its effect on c-Fos protein expression in rats［J］.Sheng Li Xue Bao，2008，60(2):221-227.

［47］Samali A，Cotter T G.Heat shock proteins increase resistance to apoptosis［J］.Exp Cell Res，1996，223(1):163-170.

［48］Yao L L，Huang X W，Wang Y G，et al.Hydrogen sulfide protects cardiomyocytes from hypoxia/reoxygenation-induced apoptosis by preventing GSK-3beta-dependent opening of mPTP［J］.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2010，298(5):H1310-1319.

［49］Salinas G，Rangasetty U C，Uretsky B F，et al.The cycloxygenase 2(COX-2)story:it's time to explain，not inflame［J］.J Cardiovasc Pharmacol Ther，2007，12(2):98-111.

［50］Bolli R，Shinmura K，Tang X L，et al.Discovery of a new function of cyclooxygenase(COX)－2:COX-2 is a cardioprotective protein that alleviates ischemia/reperfusion injury and mediates the late phase of preconditioning［J］.Cardiovasc Res，2002，55(3):506-519.