中华竹鼠混合感染巴氏杆菌和大肠埃希菌的分离鉴定及药敏试验

党 龙，黄晓凤＊，韩卫杰，刘晓华，蒋新华，汪志如

（1.江西省林业科学院，江西南昌330032；2.江西农业大学，江西南昌330045）

中华竹鼠是集肉用和药用为一身的野味上品，市场需求量大。中华竹鼠主要分布在广西、广东、福建、安微、贵州、云南等地［1］。近年来，由于过渡捕猎、生境破坏，野生中华竹鼠资源急剧减少。同时疾病的发生，尤其是细菌性疾病对中华竹鼠养殖业造成严重的危害。本研究从江西某中华竹鼠养殖场采取具有典型症状的病鼠样品，经细菌分离鉴定、药敏试验及治疗等环节，以期为中华竹鼠养殖过程中疾病的防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料来源 采集江西省某中华竹鼠养殖场具有典型症状病鼠的心脏、肺脏、肝脏、脾脏和粪便，并冷藏处理。

1.1.2 培养基及试剂 鲜血琼脂平板培养基和麦康凯琼脂平板培养基参照姚火春［2］的方法进行配制；洁霉素、卡那霉素、阿莫西林、新霉素、庆大霉素、头孢噻吩、链霉素、先锋霉素Ⅳ和环丙沙星等药敏片购自江西省人民医院；微量生化反应管为于杭州微生物试剂有限责任公司产品。

1.1.3 实验动物 昆明小鼠，体重18g～20g，购自南昌大学试验动物科学部。

1.2 方法

1.2.1 发病情况观察 观察临床表现，并对死亡中华竹鼠进行剖检，观察其病里变化。

1.2.2 细菌分离培养 采取病死竹鼠的肝、脾、肺、心和粪便，分别接种于鲜血琼脂平板培养基、麦康凯琼脂平板培养基，37℃恒温箱培养，24h后观察［3］。1.2.3 革兰染色镜检 分别挑取鲜血琼脂平板和麦康凯平板上的单菌落涂片，革兰染色，显微镜下观察细菌形态特点。

1.2.4 生化试验 细菌的生化鉴定参照姚火春［2］等的方法进行。将分离的细菌分别接种到鲜血琼脂平板上，37℃培养18h～24h，挑取单菌落到微量生化反应管中，观察结果。

1.2.5 动物接种试验 将分离纯化的1株巴氏杆菌和1株大肠埃希菌分别制成悬液。取18g～20g小鼠30只分成3组，每组10只，分别腹腔注射0.5 mL／只，浓度为5 000个／mL的巴氏杆菌菌液和大肠埃希菌菌液，对照组注射0.5mL／只生理盐水。每日观察小鼠的临床症状，发现病死小鼠，立即无菌解剖和细菌分离。

1.2.6 药敏试验 取2种分离培养菌进行药物敏感性试验，按照药敏试纸说明进行判断。

2 结果

2.1 临床症状和病理变化

病鼠食欲不振，精神沉郁，体温升高，粪便黏稠呈绿色粘于肛门。病理解剖可见腹部、颈部皮下有不同程度的淤血、出血；胸腔、腹腔积有大量浑浊液体；肝脏、脾脏肿大，有出血点；肺出血、瘀血；肾脏大面积出血；腹股沟淋巴结、肠系膜水肿；真胃空虚，幽门部、十二指肠、空肠、回肠弥漫性充血、出血，内容物暗黑稀糊状，大肠臌气、出血（图1～图4）。

图1 心、肝、肺出血淤血Fig.1 Hemorrhage and blood stasis in heart，liver and lungs

图2 肠系膜水肿Fig.2 Mesenteric edema

图3 大肠臌气Fig.3 Air-agitation in large intestine

图4 肾脏出血Fig.4 Hemorrhage in kidney

2.2 细菌分离

在鲜血琼脂平板培养基上可见一种为约2mm～3mm大小的光滑、隆起、灰白色、半透明、露珠样不溶血的小菌落（图5）。在麦康凯琼脂平板培养基上长出形态为圆形、光滑、湿润、边缘整齐粉红色菌落（图6）。

图5 鲜血琼脂上的巴氏杆菌Fig.5 Pasteurella multocida on blood agar

图6 麦康凯培养基上的大肠埃希菌Fig.6 Escherichia coli on MacConkey agar

2.3 染色镜检

从平板上挑起涂片，革兰染色，镜检为革兰阴性，可见两端钝圆、两极浓染的椭圆形小杆菌，疑为巴氏杆菌；革兰阴性、染色均一、两端钝圆的短杆菌疑为大肠埃希菌（图7，图8）。

图7 显微镜下的巴氏杆菌Fig.7 Pasteurella multocida under light microscope

图8 显微镜下的大肠埃希菌Fig.8 Escherichia coli under light microscope

2.4 生化试验

由表1可见生化特性与多杀性巴氏杆菌基本一致，根据是否产生硫化氢，可以判定其为多杀性巴氏杆菌。表2生化特性与大肠埃希菌基本一致，因此可以确定为大肠埃希菌。

2.5 动物接种试验

小鼠巴氏杆菌组在接种10h出现精神沉郁，小鼠大肠埃希菌在接种18h出现精神沉郁症状，两组接菌小鼠在2d内发生死亡，对照组未死亡。在死亡小鼠的心、肝、血液内均分离出了纯细菌培养物。经生化鉴定，证明从小鼠体内分离得到巴氏杆菌和大肠埃希菌。

表1 巴氏杆菌生化鉴定表Table 1 Biochemistry identification of Pasteurella

表2 大肠埃希菌生化鉴定表Table 2 Biochemistry identification of Escherichia coli

2.6 药敏试验

依据CLSI药敏试验执行标准［4］，本次分离的大肠埃希菌只对先锋霉素和环丙沙星敏感，对氯霉素中度敏感，其他的药物不敏感；分离巴氏杆菌对头孢噻吩和环丙沙星敏感，其他药物均不敏感，结果见表3。

表3 药敏试验结果Table 3 The results of antimicrobial sensitivity test

2.7 防治

加强对走道和笼舍的消毒。用百毒杀液每月两次，火焰消毒笼舍，用干燥的稻草铺垫竹鼠笼舍。调整日粮的营养水平，添加多维和环丙沙星粉剂，全群饲喂预防。发病竹鼠肌肉注射环丙沙星针剂，连用3 d，用药后竹鼠逐渐康复，全群未出现新增病例。

3 讨论

通过细菌分离、生化试验、动物试验、药敏试验等证实该竹鼠养殖场的急性死亡由巴氏杆菌、大肠埃希菌混合感染引起。中华竹鼠死亡原因主要是由于笼舍剩料和粪便等未及时清理，部分垫料在本舍或邻舍的循环使用造成二次污染，同时该养殖场接纳了较多的参观人员，未消毒进场也是引起该病的重要原因。

药敏试验表明，病原菌对很多治疗中未使用的药物也产生耐药性，这可能与平时饲料中添加复合抗生素有关，导致一般药物无效，造成感染不断扩大，导致急性死亡。

中华竹鼠大肠埃希菌病［5-8］和巴氏杆菌病［9-10］的诊治已有报道，但两者混合感染的报道本文是首次。在药物的敏感性上也略有不同，这可能与细菌的血清型和养殖场平时用药有关。

［1］ 陈梦林，韦咏梅.竹狸高产绝招秘术［M］.广西南宁：广西南宁广香彩印厂，2000.

［2］ 姚火春.兽医微生物学实验实习指导［M］.北京：中国农业出版社，2005.

［3］ 李建强，李六金.兽医微生物学试验实习指导［M］.陕西西安：陕西科学出版社，1999.

［4］ M100-S12，Performance standards for antimicrobial susceptibility testing：21st informational supplement［S］.CLSI：wayne，PA，2011.

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［6］ 王书权，何得肆.O141型大肠杆菌引起竹鼠水肿病的诊治［J］.黑龙江畜牧兽医，2011（7）：121-122.

［7］ 颜运秋，尹得明，黎满香.中华竹鼠水肿病的诊断与治疗［J］.动物医学进展，2010，31（7）：124-125.

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［10］ 刘 欢，苏丹萍，陈敏鸿，等.竹鼠巴氏杆菌病的诊治［J］.中国畜牧兽医，2009，36（10）：165-168.