复方氟康唑软膏临床药效试验

张瑞丽，郝智慧，侯加法，刘元元，崔亮亮，邱 梅

（1.青岛农业大学化学与药学院，山东青岛266111；2.青岛康地恩药业股份有限公司，山东青岛266061；3.南京农业大学动物医学院，江苏南京210095）

近年来，宠物饲养逐年增多。宠物犬、猫在带给每个家庭诸多快乐的同时，耳道疾病的频发却引起人们许多烦恼，因犬猫耳部结构褶皱多毛，日常护理难度大，如经常忽略清洁或护理不彻底，犬猫耳部污垢多会大量滋生细菌、真菌［1-2］，感染耳螨、疥、蚤等外寄生虫，引发爱宠搔痒、皮炎及外耳炎等，并继发性产生恶劣的异味。通过调查发现，耳部真菌、细菌治疗的方法较多，但大体分为局部和全身用药［3-6］，局部制剂刺激性小，对角质浸透力和抑制真菌作用强，内服制剂的作用相对比较缓慢，但作用持久疗效好。对慢性的真菌、细菌感染，局部用药尤为广泛。而国内、外市场上用于治疗耳部和皮肤感染的药物较少。

在考察宠物药市场的需求的基础上，我们研制了一种用于治疗宠物耳道真菌、细菌感染的药物-复方氟康唑软膏，主要成分为氟康唑、硫酸新霉素、曲安奈德。其中氟康唑具有广谱抗真菌作用，硫酸新霉素为广谱高效抗生素，曲安奈德为抗炎药物，可以消除中耳黏膜肿胀。目前国内外还未有与3种药物相同组方的制剂。为进一步验证该药的疗效和可能的不良反应，提出科学的给药方案和注意事项，进行了人工感染和自然感染临床药效试验。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验药品与试剂 复方氟康唑软膏（青岛康地恩药业有限公司研制，批号：20081021），耳肤灵（法国威隆，批号20070516），营养肉汤，20g／L琼脂LB培养基，SDA真菌培养基（不添加琼脂），犬猫皮肤真菌快速诊断培养基（南京仕必得生物有限公司，批号080518），KOH（上海凌峰化学试剂有限公司，批号080218），瑞氏染料（伊红：上海三爱思试剂有限公司，批号：080622；美蓝：国药集团化学试剂有限公司，批号：F20081123）。

1.1.2 试验动物 Ⅱ期临床试验动物为健康中华田园犬80只，18月龄～24月龄，购自江苏省宿迁市豫区蔡集镇犬养殖场。Ⅲ期临床试验动物为南京某流浪犬收容所（犬场甲）、南京某流浪犬收容所（犬场乙）、无锡某流浪犬收容所（犬场丙）内收留2个月以上的流浪犬。

1.2 方法

1.2.1 病原液的制备 将人工培养的含金黄色葡萄球菌的营养肉汤（临床分离株，由南京农业大学动物医学院微生物教研组提供）、含有马拉色菌的SDA培养基（临床分离株，由南京农业大学动物医学院内科教研组提供），置于灭菌烧杯内，加生理盐水稀释至每毫升含5×108个细菌、5×104个真菌孢子。

1.2.2 试验用动物的处理及分组 人工感染临床试验动物麻醉后用铁丝钩分别在右耳垂直外耳道内划3道长约2cm的伤口，伤口深度以划破耳道表皮为宜，用注射器吸取病原液（制备见1.2.2）1mL注入垂直外耳道内。人工感染1周后，有31条试验犬耳道有炎性分泌物，时常甩头、挠耳，有明显感染症状。2周后增至47只，3.5周时增至55只。根据感染严重程度相似原则分为5组：空白对照组10只，耳肤灵组10只，推荐剂量减半组10只，推荐剂量组15只，推荐剂量加倍组10只。自人工感染3.5周开始用药试验。

自然感染临床试验动物为犬场甲、乙、丙3个场所的流浪犬，收留2个月以上，挑选有耳部感染症状病犬进行试验。每个犬场根据症状相似原则，选取30只病犬做耳肤灵试验组，60只做复方氟康唑试验组。

1.2.3 给药方案 用止血钳夹持棉球，清理完耳道内分泌物。将药物挤进注射器内，接上橡胶软管，插入耳内，挤适量药膏进入耳道，再进行耳根按摩，使药物涂抹均匀。

人工感染临床治疗：耳肤灵1次／d，每次0.5 mL；复方氟康唑1次／d，推荐剂量减半组每次0.25 mL，推荐剂量组每次0.5mL，推荐剂量加倍组每次1mL，连续治疗6周。

自然感染临床治疗：耳肤灵、复方氟康唑软膏均1次／d，每次0.5mL，连续治疗6周。

1.2.4 病原检查方法

1.2.4.1 真菌的检查 将患耳分泌物无菌接种到犬猫皮肤真菌快速诊断培养基，室温培养5d后，如有絮状物即为真菌感染，如没有即没有真菌。挑取真菌压片，根据《真菌鉴定手册》［7］和《真菌的形态与分类》［8］中马拉色菌的生长形态、菌落性状、色泽、菌丝、孢子等形态特征来鉴定是否有马拉色菌存在。

1.2.4.2 致病菌的检查 将患耳分泌物接种于20 g／L琼脂LB培养基，37℃温箱培养18h～24h，观察有无金黄色菌落［9-10］。

1.2.5 疗效判定 根据病犬搔抓耳部、摇头甩耳，耳道内渗出物，耳道表皮增生及耳部是否有压痛感等临床症状和试验室检查进行评估，判断病犬的治疗情况。临床疗效一般分为痊愈、显效、好转、无效，具体评估方法如下：

痊愈：症状消失，试验室检查病原体呈阴性。

显效：症状消失大于或等于60%，试验室检查病原体呈阴性。

好转：症状消失20%～60%，试验室检查病原体呈阳性。

无效：症状消失小于20%，试验室检查病原体呈阳性。

加重：症状消失小于0。

如果试验组治愈率加显效率均大于等于90%，且与耳肤灵治愈率加显效率相比无显著差异或显著高于之，则判定该药有效。

1.2.6 数据处理 所得数据通过SPSS13.0统计软件进行分析，通过卡方检验与空白对照组之间进行差异显著性分析。

2 结果

2.1 人工感染临床试验结果

2.1.1 临床观察结果 根据相关文献［11-14］，空白对照组临床症状基本未见改变，试验犬耳部感染严重，分泌物较多，时常甩头、挠耳。耳肤灵组、推荐剂量减半组、推荐剂量组、推荐剂量加倍组用药后，症状大多得到明显改善，试验犬挠耳、甩头症状逐渐减少，分泌物也逐渐减少，部分试验犬临床症状消失，部分试验犬症状有显著改善，部分试验犬症状有所改善，未见症状加重病例（表1）。

2.1.2 耳部病原菌检查结果 在用药后第7、14、21、28、35、42天，采耳部病料，进行感染病原学检查，如发现葡萄球菌或／和马拉色菌则为阳性，以确定患耳道内病原是否消失（表2）。

2.1.3 综合疗效判定 根据临床观察结果和病原检查结果，在用药后第42天综合判定疗效，与空白对照组进行卡方检验（表3）。

2.2 自然感染临床试验结果

2.2.1 临床观察结果 耳肤灵组和氟康唑组用药后，症状大多得到明显改善，试验犬挠耳、甩头症状逐渐减少，分泌物也逐渐减少，6周后绝大部分试验犬都已恢复正常，临床症状基本消失，未见无效和加重现象（表4）。

2.2.2 耳部病原菌检查结果 在用药后第7、14、21、28、35、42天，采耳部病料，进行病原学检查，如发现细菌、真菌感染则为阳性，以确定患耳道内病原是否消失（表5）。

2.2.3 综合疗效判定 根据临床观察和病原检查结果，在用药后42d综合判定疗效，与空白对照组进行卡方检验（表6）。

表1 人工感染犬治疗后临床症状观察结果Table 1 Results of clinical symptoms in artificially infected dogs after treatment单位：只

表2 人工感染犬治疗后病原菌检查结果Table 2 The in results of pathogen detection in artificially infected dogs after treatment单位：只

表3 人工感染犬综合疗效判定结果Table 3 The results of comprehensive treatment efficacy in artificially infected dogs

表4 自然感染犬治疗后临床症状观察结果Table 4 Observation of clinical symptoms in naturally infected dogs after treatment单位：只

表5 自然感染犬治疗后病原菌检查结果Table 5 Test results of pathogen detection in naturally infected dogs after treatment单位：只

3 讨论

复方氟康唑软膏主要有效成分为氟康唑、新霉素和曲安奈德。其中，氟康唑为三唑类抗真菌新药，具有抗真菌谱广、口服吸收完全、组织器官内浓度较高、不良反应小、临床疗效好等优点，国外已广泛用于临床，是一极有前景的抗真菌药物。氟康唑对于治疗深部真菌感染特别是白色念珠菌及新型隐球菌有显著疗效，是目前用于治疗深部真菌病的重要抗真菌药之一。新霉素为碱性物质，常用其硫酸盐，易溶于水，耐热，抗菌范围与卜那霉素相似。因其对肾、耳毒性较强，且能阻滞神经肌肉接头，抑制呼吸，故一般不作全身应用。新霉素对金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、大肠埃希菌及流行性感冒杆菌有抑制生长的作用，为一中等广度的抗生素。曲安奈德属于肾上腺皮质激素及促肾上腺皮质激素，作用与去炎松相似，其抗炎和抗过敏作用较强且远较持久。曲安奈德多用于局部用药，对骨关节病、肌肉损伤等消炎、止痛作用；它还可用于多种皮肤病，尤其是神经皮炎、肥厚性瘫痕、皮肤淀粉样变性等；对变态反应性病，如过敏性鼻炎、支气管哮喘等有一定的疗效。因此，3种药物组方可以达到抗细菌，抗真菌，抗炎症的效果。

表6 自然感染犬临床综合疗效判定结果Table 6 Results of comprehensive treatment efficacy in naturally infected dogs

本品人工感染临床药效试验主要针对人工细菌和真菌感染，试验结果显示，复方氟康唑软膏和耳肤灵对犬人工细菌和真菌外耳道感染均有较好的治疗效果，两者疗效相似，差异不显著。0.5mL和1.0mL复方氟康唑软膏，每天治疗1次，连续用药4周，对由真菌和细菌引起的耳道感染治愈率＋显效率均大于等于90%，且与空白对照组相比，差异极显著（P＜0.01），因此可以用于犬耳道真菌和细菌感染的治疗。

自然感染临床药效试验数据表明，复方氟康唑软膏对耳道感染的治愈率＋显效率均大于90%，复方氟康唑软膏和对照组耳肤灵对犬外耳道感染治疗的效果差异不显著，但有优于耳肤灵的趋势，这可能是因为氟康唑的抗真菌效果要优于耳肤灵中的制霉菌素。氟康唑高度选择性干扰真菌细胞色素P-450活性，从而抑制真菌细胞膜上麦角固醇的生物合成，发挥抗真菌作用；制霉菌素是多烯类的抗真菌药，与真菌细胞膜上的甾醇相结合，致细胞膜通透性的改变，导致重要细胞内容物漏失而发挥抗真菌作用。与制霉菌素相比，氟康唑的抗菌谱更广、抗菌效果更强［9］，因此其治疗效果也更好。

综上所述，复方氟康唑软膏以每天每次0.5 mL／耳的剂量，连续治疗4周的给药方案，对由真菌和细菌引起的外耳道感染有较好的治疗作用，可以在临床上推广使用。

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