顶空气相色谱法测定普卢利沙星中多种残留溶剂

丁 艳，林 春

(1.威海市药品检验所，山东威海264200;2.迪沙药业集团有限公司，山东威海264200)

普卢利沙星是第三代氟喹诺酮类广谱抗菌药物，其杀菌机理是以细菌的DNA为作用靶，通过阻碍DNA拓扑异构酶Ⅱ和Ⅳ发挥作用，使细菌DNA无法形成超螺旋进而造成染色体不可逆损害，导致细菌细胞无法分裂繁殖而产生抗菌作用。在该药的合成、精制过程中用到了ICH限制的多种有机溶剂，但目前各生产厂家均根据自己的生产工艺，仅对生产中涉及的溶剂进行检查。经过查阅相关资料［1～3］，本文建立了同时测定该药中乙醇、乙腈、正己烷、三氯甲烷、四氢呋喃、二氧六环、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺、二甲苯九种残留溶剂的顶空气相色谱测定法。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津GC－2014型气相色谱仪;HSJ－05B顶空进样器;Metler Toledo AE240电子天平。

1.2 试药 乙腈为色谱纯;乙醇、正己烷、三氯甲烷、四氢呋喃、二氧六环、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺、二甲苯以及二甲基亚砜均为分析纯;普卢利沙星样品(威海迪素制药有限公司提供，批号为110801、110802、110803)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为5%二苯基—95%二甲基硅氧烷共聚物为固定相的毛细管柱，柱长为30 m，内径为0.32 mm，膜厚为0.25 μm，柱温采取程序升温，初始温度为40℃保持10 min，以10℃·min－1升温至150℃，保持10 min;载气为氮气;柱流速为1.7 mL·min－1。分流比为1∶10;进样口温度为200℃，检测器温度:FID，250℃;顶空预热温度为110℃，保持时间为30 min，取顶空瓶上气体1.0 mL进样测定。

2.2 系统适用性试验 对照溶液的配制:精密量取乙醇500 mg、乙腈44 mg、正己烷29 mg、三氯甲烷6 mg、四氢呋喃72 mg、二氧六环 38 mg、甲苯 89 mg、N，N－二甲基甲酰胺(DMF)88 mg、二甲苯217 mg至100 mL容量瓶中，加二甲亚砜稀释至刻度摇匀，作为对照溶液。

取上述对照溶液1 mL，至20 mL顶空瓶中，顶空预热温度为110℃，保持30 min，取顶空瓶上部气体1 mL在上述色谱条件下进样测定。得到的色谱图经过色谱工作站积分，计算分离度，符合《中国药典》2010年版规定的大于1.5的要求，且峰对称性良好，各残留溶剂的出峰时间及分离度见表1。

表1 各残留溶剂的出峰时间及分离度列表

2.3 线性关系试验 精密称取乙醇50 mg、乙腈4.1 mg、正己烷2.9 mg、三氯甲烷0.6 mg、四氢呋喃7.2 mg、二氧六环3.8 mg、甲苯8.9 mg、DMF 8.8 mg和二甲苯21.7 mg置50 mL容量瓶中，以二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀作为标准曲线储备溶液;按比例精密稀释成不同浓度的标准溶液5瓶，照上述方法进行测定，记录色谱图，通过积分确定峰面积，以浓度为横坐标，以乙醇、乙腈、正己烷、三氯甲烷、四氢呋喃、二氧六环、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺、二甲苯的峰面积为纵坐标，进行线性回归，结果见表2。

表2 回归方程和线性范围(n=5)

2.4 精密度试验 精密量取对照溶液各1.0 mL，分别置6个20 mL的顶空瓶中，密封后在110℃下预热30 min后，进样1.0 mL，记录气相色谱图，通过积分确定峰面积(图1)。分别计算6份对照液中各组分(乙醇、乙腈、正己烷、三氯甲烷、四氢呋喃、二氧六环、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺、二甲苯)峰面积的RSD。得到乙醇、乙腈、正己烷、三氯甲烷、四氢呋喃、二氧六环、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺、二甲苯的RSD分别为3.60%、4.21%、3.01%、4.99%、4.84%、3.09%、3.34%、2.90%、3.58%，均小于10.0%，符合《中国药典》2010年版对残留溶剂检查外标法系统适用性的要求。

图1 普卢利沙星对照溶液GC图谱

2.5 最低检测限 S/N＞3，本方法溶液中的乙醇、乙腈、正己烷、三氯甲烷、四氢呋喃、二氧六环、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺、二甲苯的最低检测限分别为0.5、0.04、0.029、0.06、0.072、0.38、0.089、0.88、2.17 mg·L－1。

2.6 回收率试验 精密称取同一批号的普卢利沙星约0.1 g于顶空瓶中，共称5份，精密加入配制好的对照溶液各1.0 mL，各份样品按上述方法进行测定，同时进未加对照的样品溶液和对照溶液(按外标法计算样品内各项残留溶剂均为未检出)，乙醇、乙腈、正己烷、三氯甲烷、四氢呋喃、二氧六环、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺、二甲苯的平均回收率(n=5)分别为99.77%、99.99%、99.51%、98.51%、98.76%、98.50%、99.10%、99.24%、99.05%;RSD=0.96%、0.73%、0.97%、1.03%、1.05%、0.62%、0.78%、0.60%、0.88%。

2.7 样品测定 分别精密称取普卢利沙星样品3批各0.1 g，至顶空瓶中，精密加入二甲基亚砜1 mL使溶解，密封瓶口，在110℃下平衡30 min后，取顶空瓶上部气体1.0 mL进样，照上述方法进行测定，记录色谱图，通过积分确定其峰面积，用外标法计算试样中的乙醇、乙腈、正己烷、三氯甲烷、四氢呋喃、二氧六环、甲苯、DMF、二甲苯的含量，见表3。

表3 三批普卢利沙星的残留溶剂测定结果

3 讨论

3.1 平衡时间的选择 本试验根据样品的热稳定性情况选择了在恒温(110℃)下加热平衡，分别在10、20、30、40以及60 min时进行测定，比较乙醇、乙腈、正己烷、三氯甲烷、四氢呋喃、二氧六环、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺、二甲苯的峰面积。开始的时候承受时间的增加，峰面积明显增加，20 min后，峰面积的增加变得缓慢;30 min时，各峰面积与加热40及60 min时各峰面积几乎一致。这意味着，30 min后(110℃)各待测成分的分压已基本平衡。因此，本试验采用预热时间为30 min。

3.2 程序升温的选择 经过比较本试验要检测的有机溶剂的沸点以及极性，我们采用了上述程序升温的条件，先采用40℃较低温度保持10min，使沸点低的溶剂能在该条件下出峰，然后以比较小的升温速率升至较高的温度，保障了后面的溶剂也能得到比较好的分离，在150℃保持10 min以保证溶媒二甲基亚砜的全部被吹出，而不影响下一针的测定。

3.3 溶媒的选择 根据普卢利沙星的溶解特性，同时考虑沸点与出峰时间，我们使用了二甲基亚砜为溶媒，测定样品中的乙醇、乙腈、正己烷、三氯甲烷、四氢呋喃、二氧六环、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺、二甲苯，得到了比较理想的分离，可以准确地测定该药中的残留溶剂。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(二部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:附录61－ 65.

［2］ 刘冬，战寒秋，王茜，等.顶空气相色谱法测定西维来司钠中的残留溶剂［J］.中国药品标准，2010，11(3):199－202.

［3］ ICH指导委员会.药品注册的国际技术要求(质量部分)［M］.周海钧，译.北京:人民卫生出版社，2000.