内皮衍生基因-1在甲状腺乳头状癌组织中的表达

孙亚东 张景斌 王海英 马 彦 姜春浩 邸 军 (吉林省人民医院内分泌科，吉林 长春 130021)

内皮衍生基因-1在甲状腺乳头状癌组织中的表达

孙亚东 张景斌 王海英 马 彦 姜春浩 邸 军 (吉林省人民医院内分泌科，吉林 长春 130021)

目的探讨甲状腺乳头状癌组织中内皮衍生基因-1(EG-1)表达的临床意义。方法选取吉林省人民医院2006年2月至2008年9月普外科收治的38例甲状腺乳头状癌患者，另取15例良性甲状腺疾病病例作为对照组，应用RT-PCR方法检测EG-1基因水平。结果38例甲状腺乳头状癌组织中有23例检测出EG-1 mRNA的表达，阳性表达率为61%(23/38);15例甲状腺瘤组织中有5例检测出EG-1 mRNA表达，阳性表达率为20%(3/15)，组间比较EG-1 mRNA在甲状腺乳头状癌组织的阳性表达率高于甲状腺瘤组织(P＜0.05)。EG-1基因在甲状腺乳头状癌组织中的表达与组织学分级有关(P＜0.05)，与性别、年龄无关(P＞0.05)。结论EG-1基因在甲状腺乳头状癌组织中异常高表达，可能参与甲状腺癌的发生和发展。

内皮衍生基因-1;基因表达;甲状腺癌

调查显示，我国甲状腺癌发病率逐年增加〔1〕，目前对其分子发病机制的研究越来越深入，已发现不少基因与甲状腺癌的发生、发展、转归有关〔2，3〕。以往研究发现，内皮衍生基因-1(EG-1)与内皮细胞、上皮细胞的增生激活状态相关〔4〕，而EG-1在甲状腺癌组织的表达少有报道。本研究通过RT-PCR方法检测EG-1在甲状腺癌组织中的表达，探讨其在甲状腺癌发生和发展中的作用，为判定甲状腺肿瘤的良恶性和生物行为提供一定指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院2006年2月至2008年9月普外科收治的38例甲状腺乳头状癌患者，其中男12例，女26例，年龄30～66〔平均(48±16)〕岁，均经病理科专家确诊，所有病例术前均未行放、化疗。甲状腺癌的组织学分级参照选择性血管造影(SAG)评分标准，SAG评分0分为I级，1分为Ⅱ级，2～3分为Ⅲ级，其中I级9例，Ⅱ级17例，Ⅲ级12例。另取15例良性甲状腺疾病病例作为对照组。所有病例均获取其甲状腺组织石蜡包埋块。

1.2 方法

1.2.1 石蜡包埋标本RNA提取〔5，6〕取石蜡包埋标本，切片，每片厚度4～5μm，共5～8片，将组织放入1.5 m l离心管，加入1 ml二甲苯常规脱蜡2次，尽可能清除石蜡。用100%乙醇洗涤3次后离心，除去剩余的乙醇，室温空气干燥15～20 min。选用Ambion公司试剂盒(Paraffin BlockRNA Isolation kit)提取RNA。依据试剂盒的工作程序将蛋白酶K加入组织已彻底干躁的离心管，45℃水浴110 min后加入600μl RNA提取液孵育5 min，再加入700μl酚-氯仿进行提取，加入1μl线性丙烯酰胺混合后再加入等体积的异丙醇，混匀，－20℃孵育过夜。高速离心，移出上层物，加入75%乙醇洗涤沉淀后移出乙醇，空气干燥后的沉淀即为所需的RNA。紫外线可见光分光光度计测定RNA含量。

1.2.2 目的RNA扩增 应用上海生工逆转录试剂盒(SK2028)转录合成cDNA。配成20μl反应体系，RNA模板12μl。选择β-肌动蛋白(β-actin)做内参照进行扩增，引物序列为:上游 5'-ACACTGTGCCCATCTACGAGGGG-3';下游:5'-ATGAGTGAGTTGAAGGTAGTTTCGTGGAT-3'(上海生工合成);扩增片段366 bp。目的基因EG-1扩增引物序列为:上游5'-TGCATCTCTGGTGAGTCAGG-3';下游:5'-TGCCTCAGCTTTGTCAAGTG-3'(上海生工合成);扩增片段246 bp。

1.2.3 RT-PCR扩增 选用Biometra PCR仪，扩增体系为20μl，其中模板2μl。RT-PCR后用1.5%琼脂糖凝胶进行电泳，凝胶成像分析系统成像，分析灰度密度并照相。

1.3 统计学方法 应用SPSS10.0软件行χ2检验。

2 结果

2.1 EG-1基因在甲状腺乳头状癌及甲状腺瘤的表达 RTPCR扩增产物为246 bp特异性条带，以β-actin做内参照，所有mRNA都可扩增出366 bp的β-actin条带。见图1。

图1 各组织EG-1基因RT-PCR检测结果

2.2 RT-PCR结果显示 38例甲状腺癌组织中有23例检测出EG-1 mRNA的表达，EG-1 mRNA的阳性表达率为63%(24/38);15例甲状腺瘤组织中有5例检测出EG-1 mRNA的表达，EG-1 mRNA的阳性表达率为20%(3/15);二者相比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.3 甲状腺乳头状癌患者EG-1表达与临床特点间的关系

38例甲状腺癌组织中，8例为男性，16例为女性;年龄＜45岁11例，≥45岁13例。男性患者的EG-1阳性表达率(67%)较女性患者的EG-1阳性表达率(67%)高，但差异无统计学意义(P＞0.05);年龄＜45岁患者的EG-1阳性表达率(61%)较年龄≥45岁患者的EG-1阳性表达率(65%)低，但差异也无统计学意义(P＞0.05)。将38例甲状腺癌组织按组织学分级，其中I级9例，EG-1蛋白表达阳性4例(44%);Ⅱ级17例，EG-1蛋白表达阳性11例(53%);Ⅲ级12例，EG-1蛋白表达阳性9例(75%)，差异有统计学意义(P＜0.05)。

3 讨论

甲状腺癌是常见的内分泌肿瘤，临床发现的甲状腺结节中有5%～10%为甲状腺癌，甲状腺良性结节除有压迫等不适症状，可不必手术，而甲状腺癌则需尽早手术切除。因此，如何早期准确地对甲状腺结节做出定性诊断，显得尤为重要。而在临床研究中发现有些结节的性质难以从细胞学上鉴别，随着对肿瘤基因的深入研究，对甲状腺癌的分子发病机制有了进一步的认识〔7〕，有助于早期对甲状腺癌做出诊断。

甲状腺癌的演进很大程度上依赖于血液供应和新生血管生成，促进内皮细胞增殖、存活和迁移的基因可能会通过刺激血管生成而引起肿瘤的发生和发展。定位于4号染色体的EG-1基因，在富含血管的组织中高表达，如胎盘、睾丸、肝脏〔8〕，与内皮、上皮细胞的激活状态有关。在关于EG-1基因在乳腺癌组织中表达的研究结果表明，乳腺癌组织EG-1基因表达阳性率显著高于良性乳腺组织〔9〕。本研究证实EG-1基因在甲状腺乳头状癌组织中高表达，说明EG-1基因的激活与甲状腺癌的发生有关，而且EG-1基因的激活与甲状腺癌的进展有关。有研究利用siRNA干扰技术封闭EG-1基因的表达，结果发现体外细胞系增殖明显下降，异源肿瘤体积明显减小〔10〕。目前已有学者通过体外试验研究证明EG-1基因过表达可激活c-Src蛋白，从而激活MAPK信号通路引起细胞的增殖或分化〔11〕。关于EG-1基因促进甲状腺癌发生及发展的作用机制还有待于进一步研究。

1 关海霞，单忠艳，米小轶，等.普通食盐碘化前后甲状腺癌发病变化的11年病理资料分析〔J〕.中国医科大学学报，2006;35(3):284-5.

2 朱卫东，王 鑫，张一兵.EZH2和P16基因在甲状腺乳头状癌中表达的临床意义〔J〕.河北医药，2010;32(18):2484-6.

3 唐 颖，崔全才.甲状腺癌相关基因研究进展〔J〕.诊断病理学杂志，2010;17(5):386-8.

4 Liu C，Zhang L，Shao ZM，et al.Identification of a novel endothelial-derived gene EG-1〔J〕.Biochem Biophys Res Commun，2002;290(1):602-12.

5 景红梅，克晓燕，董 菲，等.石蜡包埋组织提起RNA检测API2-MALT1融合基因的研究〔J〕.北京医学，2006;28(3):129-31.

6 Lu M，Zhang L，Maul RS，et al.The novel gene EG-l stimulates cellular proliferation〔J〕.Cancer Res，2005;65(14):6159-66.

7 迟晓云，焦淑贤.甲状腺癌易感基因的研究进展〔J〕.现代肿瘤医学，2011;19(1):176-9.

8 Zhang L，Maul RS，Rao J，et al.Expression pattern of the novel gene EG-1 in cancer〔J〕.Clin Cancer Res，2004;10(10):3504-8.

9 丛明华，刘 奇，杨朝花，等.乳腺癌组织中EG-1 mRNA的表达与临床病理特征及预后的关系〔J〕.中华普通外科杂志，2009;24(2):156-9.

10 Lu M，Sartippour MR，Zhang L，etal.Targeted inhibition of EG-1 blocks breast tumor growth〔J〕.Cancer Biol Ther，2007;6(6):936-41.

11 Lu M，Zhang L，SartippourMR，etal.EG-1 interactswith c-Src and activates its signaling pathway〔J〕.Int JOncol，2006;29:1013-8.

R736

A

1005-9202(2012)12-2476-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.12.013

吉林省自然科学基金项目(No.201015127)

孙亚东(1964-)，女，博士，主任医师，主要从事内分泌代谢病基础及临床研究。

〔2011-11-20收稿 2012-03-27修回〕

(编辑 袁左鸣)