水产品中微生物的快速检测方法探讨

赵会生

水产品中微生物的快速检测方法探讨

赵会生

本文主要阐述了几种水产品中一些可能致病的微生物快速检测的方法，这些水产品的检测方法为水产品的检测提供更加安全有力的保障。通过对几种比较有效快速检测方法的介绍以期可以更好的应用在水产品微生物中，更好的保障人们的健康。

水产品；微生物；检测方法

一般水产品的致病生物包含了以下几种，第一种是水产品本身就有的一些细菌，广泛分布在水中，比较常见的如李斯特菌（Listeria monocytosens）和冷源性细菌肉毒杆菌（Clostridium Botulinum）。第二种是人为因素所造成的一些细菌，一般存在动物以及人的肠道，后因为人或者动物对水环境的污染而产生的一些细菌，比较常见的有大肠杆菌（Escherichia coli）和沙门氏菌（Salmonellussp）。第三种以双壳软体动物作为载体的病毒，如诺伏克病毒（Norwalk Vivus）和甲型肝炎病毒（HepatitistypeAHAV）。上述微生物一般是通过水产品来对人体造成影响，患者一般表现为呕吐以及胃肠炎和痢疾等症状。目前对于水产品的检验主要是针对水产品和水产品成品中的致病菌以及污染所进行的检验。但常规检验一般需要 6～7d，通常也有特异性的缺点。这与水产品的储存时间比较短，在实践中需要进行快速的检验的要求不符合。生物技术有着其他技术在水产品检验中无法比拟的优势，在水产品微生物的检测方面发挥出了越来越重要的作用。本文主要论述了以免疫学和 DNA作为基础的快速检测水产品致病微生物的几种有效的方法。

1 实时定量PCR技术

所谓实时定量PCR技术，是采用探针和荧光技术来确保扩增的相关特异性，同时所采取的荧光信号的强弱程度和扩增产物之间成正比例关系，这使得精确的定量成为了可能。实时荧光逆转录PCR方法是一种在常规逆转录PCR的检测中使用1条荧光探针。这种技术不需要使用任何电池，对检测和研究人员的自身更加的健康。

伴随着PCR技术的成熟，使用逆转录PCR检测诺伏克病毒的技术成熟。另一方面，采用多种嵌套式PCR的扩增，从滤食性软体动物中提取的DNA的片段，通过研究PCR的一些扩增后的限制性的片段可以对人体粪便中的隐孢子虫和贾第虫进行鉴定以及检测，结果表明使用这种方法比较适合贝类中的贾第虫以及隐孢子虫的相关检测。

2 酶联免疫吸附技术

酶联免疫吸附技术（ELISA）开始于1971年，伴随着单克隆技术的不断发展和免疫试剂盒的市场化发展。ELISA在食品分析、临床医药以及生物学等各个领域都得到了很好的应用。ELISA是采取将抗体和抗原的特异性进行结合而作为基础，使用酶和辅酶来作为标记物，使用酶来促使反应的放大作用。ELISA在进行水产品中的检验报道比较多，水产品中比较常见的一些致病菌都可以用 ELISA来进行相关的检测。比较常见的如大肠杆菌、李斯特菌以及沙门氏菌都可通过这种方法来进行检测。采取这种方法进行检测更为简单和快捷，一般可以在23h左右出具相关的报告，比一般常规的方法要快出5d。同时这种方法比较稳定，不会和亲水气单孢菌等13种杂菌发生交叉反应。

通过应用酶联免疫技术所制造出来的全自动的免疫分析仪，是使用了荧光分析技术，采用固相吸附器，使用已知的来进行目标生物体的扑捉。采用这种方法的优势是灵敏度高并且速度很快，能够对单核李斯特菌和沙门氏菌做出快速的鉴定。

3 基因芯片技术

基因芯片技术以通过各种基因寡核苷酸点样在芯片的表面，微生物的样品DNA经过PCR扩增之后制备银光标记的探针。再和基因芯片上的寡核苷酸点进行杂交，最终通过扫描仪进行定量并且分析荧光分布的模式来确定检测的样品中是否存在着某种特定的微生物。这种技术能够对水产品的致病微生物进行高通量的并行检测。从理论上分析，基因芯片技术具有再一次实验中对多种潜在致病菌检验的能力，同时能够使用芯片对某一种病源的多种潜在的遗传学的指标进行检测。

这种技术具有特异、灵敏以及快速便捷的特点，因此在水产品致病菌的检测过程中有着很好的应用价值。虽然基因芯片技术已经取得了很好的进展，但是要想将这种技术广泛的应用在食品微生物的检测上，还有很多问题需要解决，比如降低检测的费用、建立标准化的检测程序等。所以说，基因芯片技术在水产品致病微生物的检测中还需要进一步的加强和提升。

4 免疫磁珠分离法

免疫磁珠分离法是通过将特异性抗体进行偶联在磁性颗粒的表面，和样品被检测的致病微生物发生特异性的结合。载有致病微生物的磁性微球在外加磁场的作用之下向着磁极的方向进行聚集。所以能够特异性的将目标微生物从样品中很好的分离出来。

与常规水产品的检验进行比较，使用免疫磁珠分离方法具有比较明显的优势。这是因为采取免疫磁珠分离法可从大量的水产品中将目标微生物进行分离，及时和其他一些比较快速的检测方法来比较，这种技术仍然能够较为快速的提升水产品中致病菌的检测效率。采取这种方法比较灵敏、特异。灵敏度程度相当于是逆转录PCR方法结合打点杂交。将视频中的单核细胞增多性李斯特菌进行免疫磁珠分离和 PCR方法一起进行结合使用的检测方法是建立了检测视频中单核细胞增多性的李斯特菌的IMS-PCR方法，实践表明，这种方法可有效的培养基成分、杂菌以及水产品的基质等对PCR检测的干扰，且检测所耗费的时间比较短，敏感度很高，检测的结果非常准确。

5 总结

基于特异遗传因子和免疫特性的指标来进行测定微生物的数量的PCR法，基因芯片和免疫法等技术在现实中具有很好的应用价值，PCR技术能够使得微量特定的 DNA片段在很短的时间内扩增到百万倍，这极大的提升了检测的速度和灵敏度。另外，在实验条件不当时会引起特异性和灵敏度的下降。相对而言，基因芯片技术具有更好的现实应用性，避免了PCR技术的一些缺陷，但基因芯片的费用比较高，如果想要进行大规模的投入使用，则需要大量的时间以及资金进行投入。随着生物学技术的不断向前发展，使用多种技术来进行综合的使用，能够使得水产品致病微生物的检测发挥出越来越积极地作用。

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