炎宁颗粒有效部位化学成分研究

马 静， 许琼明， 吴文倩， 刘春宇

(苏州大学医学部药学院，江苏苏州215123)

炎宁颗粒主要由鸭跖草、白花蛇舌草和鹿茸草组成，是浙江大东吴药业有限公司研制的一味纯中药复方制剂。现代药理证明白花蛇舌草有抗菌消炎利水之功［1-3］，鸭跖草有清热消炎作用［4］，鹿茸草可治感冒、咳嗽，临床报道有治疗上呼吸道感染及慢性气管炎的作用。三药合用清热解毒，抗菌消炎，有效改善炎症造成的红肿热痛等症状。文献报道白花蛇舌草主要含黄酮类、蒽醌类、挥发油类、萜类、有机酸类、甾醇类、多糖类、生物碱、强心苷类等成分，还含有一些微量元素、氨基酸及挥发性成分［5］。鸭跖草属植物中所含的化学成分包括黄酮类，生物碱，萜类、甾体等其他化合物:phydroxyeinnamie acid、mannose、triacontanol、octacontanol、dotriacontano［6］和 2-heneicosanone［7］。鹿茸草属植物化学成分国内外均无相关文献报道。

为了探究炎宁复方的药效物质基础，首次对该复方的水提醇沉液进行了化学研究，从炎宁颗粒中分离得到的5个黄酮类化合物、1个三萜皂苷和1个芳香酸，经化学方法和波谱学方法分别鉴定为齐墩果酸 (1)、芹菜素 (2)、木犀草素 (3)、槲皮素 (4)、山柰酚 (5)、芦丁 (6)和香草酸 (7)。

1 仪器与材料

RE-52A旋转蒸发仪 (上海亚荣生化仪器厂);核磁共振用AVANCE 500型核磁共振仪测定(BRUKER);各种色谱用硅胶 (青岛海洋化工厂);SephadexTMLH-20:GE Healthcare(made in Sweden);LC-20A制备型高效液相色谱仪 (日本岛津);LC-20A分析型高效液相色谱仪 (日本岛津);炎宁颗粒浸膏由浙江大东吴药业提供。AB-8型大孔吸附树脂为天津南开大学化工厂生产。

2 提取分离

取炎宁颗粒水提醇沉液约6.8 kg(相当于生药57 kg)，通过处理好的AB-8大孔吸附树脂吸附，依次用水、30%乙醇、60%乙醇、95%乙醇洗脱，各洗脱部位分别回收溶剂至稠膏状，经冷冻干燥后得到4个部位。经过预试验筛选确定30%和60%乙醇洗脱部位为炎宁颗粒的有效活性部位。30%乙醇洗脱部位通过反复硅胶柱层析、凝胶柱色谱及制备型高效液相色谱分离得到1～5，其中化合物1为石油醚-乙酸乙酯 (9∶1)洗脱得到，化合物2、3、4为石油醚-乙酸乙酯 (7∶3)洗脱得到，化合物5为石油醚-乙酸乙酯 (6∶4)洗脱得到。60%乙醇洗脱部位通过反复硅胶柱层析、凝胶柱色谱及制备型高效液相色谱分离得到6和7，其中化合物6为三氯甲烷-甲醇 (8∶2)洗脱得到，化合物7为石油醚-乙酸乙酯 (7∶3)洗脱得到。

3 结构鉴定

化合物1:白色结晶 (甲醇)，不溶于水，可溶于甲醇、乙醇、丙酮和三氯甲烷，五氯化锑反应(Kahlenberg reaction)、醋酐-浓硫酸反应 (Liebermann-Burchard reaction)、三氯醋酸反应 (Rosen-Heimer reaction)为阳性，Molish反应呈阴性，提示该化合物可能是三萜苷元。1H-NMR(500MHz，MeOD)δ:5.266(1H，t，H-12)是碳碳双键(C=CH)上的氢质子信号，3.175(1H，m，H-3)是与氧相连的碳上的氢质子信号，0.739～2.023为亚甲基以及角甲基的吸收峰，该区域是三萜类化合物的 H-NMR的特征信号峰。13C-NMR(500MHz，MeOD)δ:181.80为羰基 (C=O)碳信号，在144.97和123.44处为13-C和12-C两个烯碳的信号，根据C12的化学位移值在121～124之间，C13的化学位移值位于142～145之间，可以大致判断该化合物的母核为 β-香树脂醇型，79.64是跟氧相连的碳 (3-C)信号。该化合物与齐墩果酸对照品进行TLC检测，结果Rf值与显色行为均一致，同时结合相关文献 ［8］，确定此化合物为齐墩果酸。

化合物2:淡黄色粉末 (甲醇)，盐酸-镁粉反应呈阳性，Molish反应呈阴性，UV光谱图中240～280 nm以及300～400 nm区域有较强吸收，以上均为黄酮类化合物典型特征，初步判断该化合物为黄酮类。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:12.960(5-OH)，10.573(7，4'-OH)，7.925(2H，d，J=9.0 Hz，H-2'，6')，6.928(2H，d，J=8.5 Hz，H-3'，5')，6.776(1H， s， H-3)，6.481(1H，d，J=1.5 Hz，H-8)，6.193(1H，d，J=1.5 Hz，H-6)。13C-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:181.69(C-4)，164.15(C-2)，163.69(C-7)，161.41(C-5)，161.13(C-4')，157.27(C-9)，128.42(C-2'，6')，121.13(C-1')，115.91(C-3'，5')，103.63(C-10)，102.79(C-3)，98.80(C-6)，93.92(C-8)。以上数据与文献 ［9］报道的芹菜素数据基本一致，故确定此化合物为芹菜素。

化合物3:黄色粉末 (甲醇)，盐酸-镁粉反应呈阳性，Molish反应呈阴性，UV光谱图中240～280 nm以及300～400 nm区域有较强吸收，初步判断该化合物为黄酮类。1H-NMR(500MHz，MeOD)δ:7.356(1H，m，H-2')，7.360(1H，m，H-6')，6.888(1H，d，J=9.0 Hz，H-5')，6.513(1H，s，H-3)，6.420(1H，d，J=2.5 Hz，H-8)，6.193(1H，d，J=2.0 Hz，H-6).13C-NMR(500 MHz，MeOD)δ:184.14(C-4)，166.62(C-7)，166.25(C-2)，163.48(C-9)，159.69(C-5)，151.23(C-4')，147.30(C-3')，124.01(C-6')，120.57(C-1')，117.05(C-5')，114.46(C-2'，105.61(C-3)，104.18(C-10)，100.39(C-6)，95.26(C-8)。以上数据与文献［9］报道的木犀草素数据基本一致，故确定此化合物为木犀草素。

化合物4:黄色粉末 (甲醇)，盐酸-镁粉反应呈阳性，Molish反应呈阴性，UV光谱图中240～280 nm以及300～400 nm区域有较强吸收，初步判断该化合物为黄酮类。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:12.456(1H，5-OH)，10.782(1H，3-OH)，9.547(1H，3'-OH)，9.264(2H，7，4'-OH)，7.649(1H，d，J=2.0 Hz，H-2')，7.514(1H，dd，J=2.0，8.5 Hz，H-6')，7.862(1H，d，J=8.5 Hz，H-5')，6.389(1H，d，J=1.5 Hz，H-8)，6.165(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)。13C-NMR (500 MHz， DMSO-d6) δ:175.78(C-4)，163.85(C-7)，160.66(C-9)，156.08(C-5)，147.65(C-4')，146.75(C-2)，145.01(C-3')，135.66(C-3)，121.90(C-1')，119.92(C-6')，115.56(C-5')，115.02(C-2')，102.95(C-10)，98.13(C-6)，93.29(C-8)。以上数据与文献［10］报道的槲皮素数据基本一致，故确定此化合物为槲皮素。

化合物5:黄色粉末 (甲醇)，盐酸-镁粉反应呈阳性，Molish反应呈阴性，UV光谱图中240～280 nm以及300～400 nm区域有较强吸收，初步判断该化合物为黄酮类。1H-NMR(500 MHz，MeOD) δ:8.077(2H，d，J=8.0 Hz，H-2'，6')，6.891(2H，d，J=9.0 Hz，H-3'，5')，6.382(1H，d，J=1.5 Hz，H-8)，6.173(1H，d，J=1.5Hz， H-6).13C-NMR(500MHz，MeOD) δ:177.78(C-4)， 165.85(C-7)，162.78(C-9)，160.80(C-4')，158.56(C-5)，148.40(C-2)，130.94(C-2'，6')，124.12(C-1')，116.59(C-3'，5')，104.85(C-10)，99.59(C-6)，94.76(C-8)。以上数据与文献 ［10］报道的山柰酚数据基本一致，故确定此化合物为山柰酚。

化合物6:黄色粉末 (甲醇)，盐酸-镁粉反应呈阳性，Molish反应呈阴性，UV光谱图中240～280 nm以及300～400 nm下有较强吸收，初步判断该化合物为黄酮类。1H-NMR(500 MHz，MeOD)δ:7.659(1H，s，H-2')，7.619(1H，d，J=8.0 Hz，H-6')，6.864(1H，d，J=8.0 Hz，H-5')，6.385(1H，s，H-8)，6.198(1H，s，H-6)，5.108(1H，d，J=7.5 Hz，H-1″)，4.519(1H，s，H-1‴).5.099(1H，d，J=7.0 Hz，glu-H)。13C-NMR(500 MHz，MeOD)δ:179.71(C-4)，166.30(C-7)，163.27(C-5)，159.63(C-9)，158.80(C-2)，150.10(C-4')，146.13(C-3')，135.94(C-3)，123.86(C-1')，123.44(C-6')，118.00(C-5')，116.36(C-2')，1015.94(C-10)， 105.02(C-1″)， 102.72(C-1‴)，100.25(C-6)，95.17(C-8)，78.49(C-3″)，77.52(C-5″)，76.03(C-2″)，74.24(C-4‴)，72.55(C-4″)，72.40(C-2‴)，71.70(C-3‴)，70.00(C-5‴)，68.86(C-6″)，18.17(C-6‴)。以上数据与文献 ［11］报道的芦丁数据基本一致，故确定此化合物为芦丁。

化合物7:无色针状结晶，有特殊香气。溴甲酚绿反应阳性，三氯化铁-铁氰化钾反应阳性，初步推测该化合物为芳香酸类结构。1H-NMR(500 MHz，MeOD)δ:7.544(1H，brs，H-2)，7.544(1H，br，H-6)，6.828(1H，d，J=4.5 Hz，H-5)，3.876(3H， s，-OCH3)。13C-NMR(500 MHz，MeOD)δ:170.35(-COOH)，152.94(C-4)，148.94(C-3)，125.57(C-6)，123.41(C-1)， 166.12(C-5)， 114.13(C-2)， 56.69(-OCH3)。以上数据与文献 ［12］报道的香草酸数据基本一致，故确定此化合物为香草酸。

4 讨论

炎宁复方因其组方独特、疗效确切、副作用小而被列为国家中药保护品种。但已有的炎宁颗粒制剂工艺比较传统，有效成分不明确，工艺改革难以进行。本实验首次从炎宁颗粒中分离得到的7个化合物，为进一步研究其药效物质基础、开发新制剂新工艺及制定有关质量控制标准提供了研究基础。

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