肾阳虚证动物模型的研究进展*

何帮剑 审校 肖鲁伟 童培建

（1.浙江中医药大学，浙江 杭州 310053；2.浙江中医药大学附属第三医院，浙江 杭州310005）

肾阳虚证动物模型是最早建立的中医证候动物模型，20世纪60年代初，邝安望等开创了中医动物模型的研究，第1次将科学实验方法引入传统中医药学的研究领域。目前肾阳虚动物模型的研制涉及西医病理学、中医病机学、分子生物学等领域，根据造模机理总体分为两大类：模拟传统中医病因学建模及病理建模（如药物建模和手术建模）。本文就肾阳虚动物建模的研究进展做一综述。

1 模拟传统中医病因学建模

1.1 恐伤肾致肾阳虚动物模型 沈雁等［1］根据该理论建立惊恐伤肾肾虚证动物模型，主要有猫吓鼠，人吓猫及爆竹吓狗等方法。以猫吓鼠致恐伤肾较为常用。这种建模方式也是基于传统中医病因学理论的。这种方法利用长期恐惧刺激引起模型动物一系列心理、生理及病理上的反应，分析其发病机制可能是精神—神经内分泌—效应器之间相互关系紊乱而导致结构功能与代谢上的病变。

1.2 老龄大鼠肾阳虚模型［2-4］这是生理性肾阳虚，其下丘脑的甲细胞增加，乙细胞减少，垂体前叶细胞减少，生殖器官萎缩。但临床关于衰老本质的研究结果并未能完全支持这种模型的肾阳虚辨证，衰老并非疾病，参与老化的因素很多，个体差异也很大，仅凭年龄或外表来判定衰老程度还不够全面。因此用老龄动物作肾阳虚证模型还需要对其进行辨证筛选。

1.3 先天性肾阳虚动物模型 根据初生儿体弱瘦小属胎察怯弱肾精不足之胎怯的中医理论，筛选初生3 d内体质量显著不足的动物或利用中医恐伤肾理论用恐吓孕鼠造成小鼠先天肾虚。胎怯者机体宫内发育未成熟，先天察赋不足，表现为生长发育迟缓，生理功能低下，其证候为脾肾两虚尤以肾虚为突出［5-6］。

1.4 劳倦过度，房事不节肾阳虚模型 宋洁等［7］采用连续4周雄雌鼠比例1∶6同笼喂养、频繁交配和雄鼠每日游泳，建立劳倦过度、房室不节肾阳虚小鼠模型。这种建模方式比较符合传统的中医肾阳虚病因学理论。

2 病理建模

2.1 药物建模方法

2.1.1 激素建模 该类动物模型的造模机理［8］是用一定剂量的外源性糖皮质激素（如氢化可的松、皮质酮、泼尼松、强的松、地塞米松等）使垂体前叶的促肾上腺皮质激素（ACTH）释放受抑，转而使肾上腺皮质分泌类固醇激素减少，动物出现系列“耗竭”现象［9-10］。该模型是目前最常用的肾阳虚模型，主要用于中药温肾壮阳功效的评价。但也有观点［11］认为，此类模型与人类“阳虚”有较大距离，“阳虚”患者存在皮质功能低下，而本类“阳虚”模型是由于外源性皮质激素的注入体内皮质激素并不缺乏，血浆皮质醇反而明显增高。此外，在大量皮质激素作用下肝糖原增加，肝细胞浆内糖皮质激素受体增加，这也是同“阳虚”患者肾上腺皮质功能低下不同的，因此认为本模型是由于药物体内大量蓄积导致动物亚急性中毒性反应的结果。

2.1.2 其他药物建模 （1）氨基导眠能法。该法由邝氏［12］于1987年始创。目前有关氨基导眠能肾阳虚模型的研究不多，其证型也有待于进一步研究确定。（2）腺嘌呤法。其导致肾阳虚的机理是当大剂量摄入腺嘌呤时，在黄嘌呤氧化酶的作用下将其转变为极难溶解于水中的2，8-二羟基腺嘌呤并沉积于肾小管，导致肾功能衰竭。其机械阻塞肾小管和对肾组织的毒性作用，影响了肾的能量代谢。傅晓晴等［13］研究表明以腺嘌呤制作SD大鼠肾阳虚型慢性肾功能衰竭模型在生化研究方面达到较理想的结果，其临床症状符合中医肾阳虚型动物模型表现。笔者认为此模型与西医肾脏疾病的病理变化较吻合，其临床症状又符合中医肾阳虚型动物模型表现，是一种创新的肾阳虚动物模型。（2）羟基脲法。刘福春等［14］以不同浓度羟基脲混悬灌胃，经7~15 d，以出现阳虚症状为度，发现每日7.5 mg合适剂量，17-羟醇、17-酮醇显著降低，睾丸激素分泌减少，而肾上腺变化不大。这类建模比较接近阳虚类型。马威等［15］用羟基脲灌胃法建立日本种雄性大耳白家兔肾阳虚模型，并用右归丸加以治疗。发现造模过程中家兔逐渐出现饮食减少、消瘦、毛发失去光泽、脱毛、体质量和皮温明显下降、反应迟钝、倦怠、弓背等不良反应，动物全血铜、铁、锌等元素含量与造模前相比均显著降低。用右归丸治疗后以上症状明显好转，也可以佐证造模的成功。该造模方法的机理为羟基脲以抑制核苷酸还原酶达到抑制DNA合成，从而影响蛋白质代谢，出现一系列虚损症状。符合中医临床患者的病期长，全身各系统处于低水平的表现。（3）他巴唑法。巴唑为硫脲类抗甲状腺药，能降腺功能，用以造模可出现甲减型阳虚证。欧阳轶强等［16］研究认为他巴唑模型适用于模拟甲状腺功能低下为主的肾阳虚证，其他方面的病理改变不明显，雄性大鼠和雌性大鼠均可使用作。（4）苯甲酸雌二醇法。该药可诱发鼠下丘脑－垂体－性腺轴受抑而造成肾阳虚模型。动物出现活动能力减弱，抗疲劳下降等表现。范景等［17］对ICR小鼠按0.1 mL/10g腹腔注射0.4 mg/mL的苯甲酸雌二醇大豆油稀释液，每日1次，连续治疗15 d，造成肾阳虚模型。

2.2 手术建模 （1）甲状腺切除法。甲状腺机能减退者体内的代谢普遍减慢，基础代谢率降低，中医辨证甲减患者大多具有脾肾阳虚症状，以温肾补阳药治疗，临床症状好转，基础代谢率升高，血浆cAMP升高。因此切除动物甲状腺造成的“阳虚”动物模型可模拟人类的阳虚证。卢德赵等［18］采用切除SD大鼠甲状腺，喂养7 d后大鼠现少食少饮、体质量减轻、反应迟钝、活动减少、拱背耸、毛色无光泽、易脱落、大便稀溏等肾阳虚症状，并应用差异蛋白质组学技术研究肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组，认为肾阳虚大鼠可能因糖类和脂类物质分解代谢受抑以及细胞内信号转导异常而出现虚寒症状。（2）肾上腺切除法。卢德赵等［19］切除大鼠两侧肾上腺，喂养6 d后大鼠出现饮食明显减少、体质量减轻、反应迟钝、拱背耸毛毛色无光泽、有脱毛现象，大便稀溏等肾阳虚症状，这符合肾上腺功能减退病理。但笔者认为该法由于切断了下丘脑－垂体－肾上腺皮质轴的反馈途径，与临床实际相距太远。（3）去势法。该法用手术切除雄性动物双侧睾丸或雌性动物双侧卵巢，目的在于模拟中医肾虚精少，肾阳虚的病机。史宏等［20］制备去势及药物（氢化可的松）诱发肾阳虚小鼠模型，观察复方仙脾合剂的壮阳效果及免疫功能，观察小鼠阴茎勃起的潜伏时间及抗应激反应，认为复方仙脾合剂对去势及药物诱发的肾阳虚小鼠有一定补肾壮阳作用，对肾阳虚小鼠应激能力及免疫功能有较好的提高作用。然而单纯以去除内生殖器的方法模拟的肾阳虚是片面的，去势不是肾阳虚建模的适合方法，同样也切断了性腺轴的反馈途径。

2.3 其他方法 包括人工高血糖法、锁阳水灌注法、庆大霉素法、环磷酰胺法［21-24］。但应用均较少。

3 结 语

尽管目前肾阳虚证造模方法较多，可分为中医病因、药物及手术建模，但仍存在较多的缺陷与不足。（1）各种方法在给药途径、剂量、时间上存在较大的差异，目前尚缺乏客观的比较与评估，这给模型的引用带来一定的困难，同时也影响实验的科学性和准确性；（2）目前许多病理建模方法与中医证候无关，且缺乏方法学和相关影响因素的研究，模型重复性差；（3）目前模型验证的方法多停留在对某些指标的检测上，缺乏阳性药物的反证；（4）以传统病因造模的方式较少，其是否符合实际、如何评估，还要进行深入的探索。

在今后复制肾证模型工作中应做到：（1）首先要深入理解中医理论对肾的论述，这样才能更好的开展肾的研究及肾证动物模型的复制工作；（2）在进行复制时应首先以中医病因病机理论为指导，复制的方法应尽量符合中医理论；（3）中医肾与内分泌系统的关系应进一步研究；（4）今后应进一步在动物的品种、品系、造模方式、药物的剂量、给药方式、给药时间等方面进行优化，并使之规范化。

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