新型眼用盐酸羟甲唑啉即型凝胶的制备工艺及其药物含量检测

吴明钗，晏永波，黄鹏，林洁，苏泉，董邦铃，王敏

（1.温州医学院附属第三医院 药学部，浙江 温州 325200；2. 温州医学院，浙江 温州 325035）

盐酸羟甲唑啉（oxymetazoline hydrochloride）为α-肾上腺素受体激动剂， 眼表局部用药可治疗过敏性等非感染性结膜炎，起效迅速，疗效满意，无明显不良反应[1]。但市场上的盐酸羟甲唑啉滴眼剂是溶液剂，滴入眼内以后，由于眼睑的眨动和泪液的分泌，数分钟内可被稀释至原来浓度的0.1%，需要增加给药次数来维持药效。眼用凝胶剂是以亲水性聚合物为载体，有较好的生物相容性，为半固体状态，可延长药物的作用时间，减少用药次数，但给药剂量不易控制[2]。眼用即型凝胶（in situ forming eye gel）是一种新型滴眼剂，具有独特的溶液——凝胶相变性质，兼有使用方便，分剂量准确，与用药部位特别是黏膜组织亲和力强，滞留时间长，生物利用率高等优点[3]。为满足临床需要，本研究以泊洛沙姆407（F127）为主要凝胶载体材料，适用于静脉注射给药浓度的泊洛沙姆188（F68）0.6%为促渗剂，制备新型盐酸羟甲唑啉眼用即型凝胶，并通过高效液相色谱（HPLC）法测定盐酸羟甲唑啉的含量。

1 材料和方法

1.1 仪器 HPLC仪，包括125泵、166紫外检测器、Karat色谱工作站（美国Beckman公司）；TU-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；电子天平（AB104-S梅特勒-托利多）、恒温磁力搅拌器（2B-3A，上海理达仪器厂）、pH计（PHSJ-4型，上海雷磁）。

1.2 试药 盐酸羟甲唑啉原料药及对照品（常州亚邦制药有限公司）；羟苯乙酯（广州汉普医药有限公司，）；F127（Sigma）；F68（Sigma）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

1.3 眼用即型凝胶的制备 采用冷溶法制备凝胶溶液[4]。①分别配置19%、20%、21%、22%、23%、24%的F127溶液各100 mL为a液，分别加入浓度为0.6% F68后为b液，制备空白凝胶溶液，即a液和b液。②参照临床盐酸羟甲唑啉滴眼液的处方， 准确称取相同量的盐酸羟甲唑啉25 mg、羟苯乙酯30 mg、氯化钠800 mg分别溶于a液和b液中，形成含药凝胶溶液。③将含药溶液a液和b液置于冰箱中冷藏片刻，搅拌2 min，然后将其放入4 ℃的冰箱中保存24 h以上，直至得到澄清、无团块、分散均匀的溶液。

1.4 胶凝温度的测定 采用“搅拌子法”测定胶凝温度[5]。取待测溶液20 mL置于玻璃西林瓶中，加入搅拌子。西林瓶的橡胶塞中间打孔并插入精度为0.1 ℃的温度计，温度计的水银球完全没入待测溶液中。将西林瓶置于低温水浴中，开启电磁搅拌，设定搅拌子转速为200 r/min，保持水浴持续缓慢升温，升温速度约为1～2 ℃/min。记录磁力搅拌子完全停止转动时的温度，即为该待测液的胶凝温度。每个样品平行测定3次，结果取其平均值。

1.5 盐酸羟甲唑啉眼用即型凝胶的含量测定

1.5.1 色谱条件：依据文献[6]，盐酸羟甲唑啉和羟苯乙酯的最大吸收波长分别为281 nm和258 nm，实验以羟甲唑啉的最大吸收波长281 nm为检测波长。虽然在281 nm处羟苯乙酯有强吸收，其吸收峰高于羟甲唑啉，但不干扰羟甲唑啉的测定。色谱柱Hypersil ODS2（4.6 mm×250.0 mm，5μm）；流动相醋酸-醋酸铵缓冲液（0.75%醋酸铵，0.36%三乙胺，醋酸调pH至5.3）:乙腈=60:40；流速1 mL·min-1；检测波长281 nm；柱温30 ℃；进样量20 μL[7]。

1.5.2 溶液的制备：①对照品溶液的制备：称取盐酸羟甲唑啉对照品50 mg，置于10 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为贮备液。吸取储备液1.0 mL置于10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀作为对照品溶液（500 mg·L-1）。②供试品溶液的制备：吸取相变温度最低的盐酸羟甲唑啉眼用即型凝胶溶液1.0 mL，置于25 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀即得。③阴性对照溶液的制备：按处方量称取除盐酸羟甲唑啉外的其他辅料，按“供试品溶液”项下方法处理即得。

1.5.3 系统适应性实验：分别取对照品溶液，供试品溶液和空白对照溶液，按“1.5.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图。

1.5.4 标准曲线的绘制：精密吸取上述对照品溶液1、2、4、6、8、10 mL，分别置于10 mL容量瓶得50、100、200、300、400、500 mg·L-1的溶液，依次按“1.5.1”项下色谱条件进行测定，以峰面积（A）对浓度（C）作线性回归。

1.5.5 精密度试验：精密吸取上述对照品溶液置10 mL容量瓶中，分别配制成300 mg·L-1的对照品溶液，各连续进样3次，测得盐酸羟甲唑啉的浓度，进行日内（0、1、2、4、6、8 h）考察；连续测定3 d，计算日间RSD。

1.5.6 回收率试验：精密称取盐酸羟甲唑啉，按处方比例配制成高、中、低3种不同浓度，按照“1.5.1”项下的色谱条件下进样，每一浓度平行测定3次，计算回收率。

1.5.7 样品含量测定：根据最优处方比例制备盐酸羟甲唑啉眼用即型凝胶3批次，精密量取样品6 mL，置于10 mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，以“1.5.1”项色谱条件进样，测定峰面积，计算含量。

2 结果

2.1 盐酸羟甲唑啉眼用即型凝胶温度的影响 盐酸羟甲唑啉眼用即型凝胶溶液受热能形成膏状的凝胶，单纯F127溶液组的胶凝温度与F127与F68混合组的胶凝温度均随F127含量的增加而降低。从图1中可以得出，只有含19% F127溶液组的胶凝温度高于体表温度，含20% F127溶液组的胶凝温度接近体表温度，其他质量分数大于20%的F127溶液组的胶凝温度都低于体表温度，均能在眼内胶凝。考虑到临床的实际需要，在室温下应为自由流动的液体，而生理条件下（包括体温环境等）又能转变为半固态凝胶，即盐酸羟甲唑啉眼用即型凝胶在室温时是溶液，滴入眼内能形成胶状，缓慢释放，而含21% F127与0.6% F68溶液组的胶凝温度为（27.6±0.39）℃正好符合这一要求，因此本实验选择21%F127与F68溶液组为最优盐酸羟甲唑啉眼用即型凝胶的处方，并通过HPLC法进行含量检测。

图1 不同质量分数F127对胶凝温度的影响

2.2 含量测定

2.2.1 方法的专属性：据文献[8]报道，选择多种流动相进行预试验，结果确定0.75%醋酸铵+0.36%三乙胺（醋酸调pH至5.3）-乙腈（60:40）作为流动相。在此条件下，样品主要成分保留时间适当，峰形对称，各组分之间无干扰。由图2可知，辅料对盐酸羟甲唑啉眼的测定无干扰，方法专属性好。

2.2.2 线性关系考察：以峰面积A为纵坐标，以对照品浓度C（mg·L-1）为横坐标，绘制标准曲线，得标准曲线方程为依次按“3.1”项下色谱条件进行测定，以峰面积（A）对浓度（C）作线性回归，A=7.38×103C-5.18×103，r=0.9999。结果表明，盐酸羟甲唑啉在线性范围为50～500 mg·L-1浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。

图2 盐酸羟甲唑啉眼用即型凝胶的HPLC图

2.2.3 精密度试验：日内（0、1、2、4、6、8 h）考察，RSD为0.62%。连续3日，每日测定3次，日间RSD为1.3%。结果表明，对照品溶液的日内、日间RSD均小于2%，符合方法学要求。

2.2.4 回收率试验：在“1.6.1”项色谱条件下进样，每一浓度平行测定3次，计算回收率，测定结果见表1，结果表明，回收率均在98%～102%，符合方法学要求。

表1 回收率测定结果（n=3）

2.2.5 样品含量测定：3批样品的含量测定结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

盐酸羟甲唑啉眼用即型凝胶是一种新型制剂，本研究应用F127和F68制备了具有适宜相变温度的眼用即型凝胶，温变范围短，更加接近于眼内温度，热可逆性更好，可在室温下变为溶液，且具有触变性，易于使用，可提高盐酸羟甲唑啉眼用即型凝胶的眼内生物利用度，降低因频繁使用盐酸羟甲唑啉的不良反应。F127溶液胶凝温度具有强烈的浓度依赖性，当F127低于某一浓度时不能形成凝胶；浓度过高时，其胶凝温度又低于室温，需冷藏后使用，这就给患者造成用药不便。F68是一种安全性较高的表面活性剂，具有极强的促黏膜吸收作用[9]，本研究选用0.6%的F68在发挥调节胶凝温度的同时，可以有效促进药物进入眼部组织。同时本研究建立的药物含量测定方法，操作简便，灵敏度高，重现性好，可用于该制剂的含量测定。

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