北沙参对免疫抑制C57BL/6J小鼠T淋巴细胞亚群影响的实验研究*

杨宪勇

(泰山医学院附属泰山医院，山东 泰安 271000)

北沙参为伞形科植物珊瑚菜Glehnia littora-lis Fr. Schmidt ex Miq.的干燥根及根茎[1]。北沙参具有解热、镇痛、镇咳、祛痰、强心、抗突变、调解免疫系统等多种药理作用[2]。常应用在抗衰老和癌症化疗后恢复体质的中药方剂中,为临床常用中药[3]。本实验探讨北沙参超临界二氧化碳(SFE-CO2)萃取物对免疫抑制C57BL/6J小鼠T淋巴细胞亚群影响，为其进一步应用与开发提供实验依据。

1 材料和方法

1.1材料

1.1.1药物 注射用环磷酰胺(CTX)，批号：11102305，上海华联制药有限公司产品；注射用生理盐水(NS)，批号：1D11061709；北沙参SFE-CO2萃取物由泰山医学院动脉粥样硬化研究所惠赠；二甲亚砜(DMSO)。

1.1.2动物 清洁级C57BL/6J小鼠，6～7周龄，18～22 g，泰山医学院免疫学教研室惠赠，动物饲养温度(23±2)℃，相对湿度(50±5)%，自由进食和饮水。

1.1.3试剂 CD3-FITC，CD4-PE，CD8-PE荧光单抗，批号：11101207，USA Biolegen 公司；溶血素，批号：11091902，USA BD公司。

1.1.4仪器 FACScaliur流式细胞仪 ，USA BD公司；B160A型水平离心机，河北白洋离心机厂；全自动生化仪，日本日立公司；三分类血球计数仪，日本日立公司。

1.2方法

1.2.1实验分组 采用正常C57BL/6J雌性小鼠，随机分为4组，每组8只： 第1组为正常对照组，第2组为免疫抑制组，第3组为北沙参SFE-CO2萃取物高剂量组，第4组为北沙参SFE-CO2萃取物低剂量组。第1组连续6天静滴DMSO 0.1 ml，前3天连续静滴0.1 ml NS；第2组连续6天静滴DMSO 0.1 ml，前3天静滴80 mg/(kg·d) CTX；第3组连续6天静滴4 g/kg(北沙参生药)的北沙参SFE-CO2萃取物的DMSO溶液，前3天静滴80 mg/(kg·d) CTX；第4组连续6天静滴剂量为2 g/kg(北沙参生药)的北沙参SFE-CO2萃取物的DMSO溶液，前3天静滴80 mg/(kg·d) CTX[4]。

1.2.2外周血白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血小板(PLT)的测定 第7天处死小鼠，眼静脉取血，EDTA抗凝，血球计数仪自动检测WBC、RBC、PLT。

1.2.3流式细胞术分析 取EDTA抗凝全血100 μl，分别加入3只上样管，管1加入鼠抗鼠IgG1-FITC、IgG1-PE各20 μl；管2加入CD3-FITC、CD4-PE各20 μl；管3加入CD3-FITC、CD8-PE各20 μl；室温避光孵育15 min。加入裂解液1 ml，室温避光8 min，500 r/min离心5 min，0.9%NS洗2次，500 μl NS重悬，上机，用流式细胞仪检测其阳性表达率。根据T细胞亚群比例和细胞绝对计数，计算T细胞亚群绝对数量[5]。

2 结 果

2.1北沙参SFE-CO2萃取物对CTX诱导免疫抑制C57BL/6J小鼠外周血WBC、RBC、PLT的影响

北沙参SFE-CO2萃取物能显著提高CTX诱导免疫抑制C57BL/6J小鼠外周血WBC和PLT的数量(P<0.05)，但未达到正常对照组的水平，北沙参SFE-CO2萃取物不同浓度间无显著差异。见表1。

表1 北沙参SFE-CO2萃取物对免疫抑制C57BL/6J小鼠WBC、RBC和PLT的影响

2.2北沙参SFE-CO2萃取物对CTX诱导免疫抑制C57BL/6J小鼠外周血T淋巴细胞亚群的影响

北沙参SFE-CO2萃取物能提高免疫抑制C57BL/6J小鼠CD3+T 、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T细胞在外周血的含量 (P<0.05) ，北沙参SFE-CO2萃取物低剂量时提高免疫抑制C57BL/6J小鼠CD3+CD4+T细胞的作用比高剂量强(P<0.05)；高剂量时提高免疫抑制C57BL/6J小鼠CD3+CD8+T细胞的作用比低剂量强(P<0.05)；但两组数值都低于正常对照组(P<0.05)。

北沙参SFE-CO2萃取物低剂量时，CD3+CD4+T/CD3+CD8+T比值与正常对照组无显著差异(P>0.05)，说明低剂量北沙参SFE-CO2萃取物已使免疫抑制的小鼠CD3+CD4+T/CD3+CD8+T比值恢复到正常水平；高剂量北沙参SFE-CO2萃取物不能提高CD3+CD4+T/CD3+CD8+T比值。见表2。

表2 北沙参SFE-CO2萃取物对CTX诱导免疫抑制C57BL/6J小鼠T淋巴细胞亚群的影响

3 讨 论

北沙参属常用补阴药，多用于阴虚肺热等症，具有补虚扶正祛邪的功效，可增强细胞免疫、体液免疫[6]。北沙参SFE-CO2萃取物中的很多成分具有生物活性，其中2,6-十六烷基-1-(+)-抗坏血酸酯具有抗老化、抗不良刺激、活血化淤、免疫调节[7]等功效；角鲨烯是一种脂质不皂化物，具有提高体内超氧化物歧化酶(SOD)活性、增强机体免疫能力、抗肿瘤等多种生理功能[8]。

骨髓是人和哺乳动物的造血器官和中枢免疫器官，骨髓抑制是化疗药物最明显毒副作用之一[5]。外周WBC是机体抵御外界微生物的重要组成部分，其寿命短暂，需骨髓干细胞源源不断分化补充。本实验观察到化疗药物CTX导致C57BL/6J小鼠的外周血WBC数量减少，北沙参SFE-CO2萃取物可以明显增加免疫抑制C57BL/6J小鼠外周血中WBC数量，表明北沙参SFE-CO2萃取物可拮抗CTX所导致的WBC的减少，具有增强免疫抑制C57BL/6J小鼠的免疫功能。

T淋巴细胞主要介导机体内的细胞免疫功能，包括CD4+T细胞和CD8+T细胞。实验观察到，北沙参SFE-CO2萃取物可显著提高免疫抑制C57BL/6J小鼠外周血中CD3+T、CD4+T和CD8+T细胞的绝对数量，提示北沙参SFE-CO2萃取物对免疫抑制C57BL/6J小鼠的细胞免疫具有改善作用。

本实验初步研究了北沙参SFE-CO2萃取物对免疫抑制C57BL/6J小鼠外周血WBC数与外周血T细胞亚群细胞数量的影响，结果提示北沙参SFE-CO2萃取物对免疫抑制C57BL/6J小鼠外周免疫系统有较显著的恢复作用，其分子机制有待进一步的研究。

[1] 中国药典.一部[S]. 北京:中国医药出版社,2010:92.

[2] 郑虎占,董泽宏,余靖.中药现代研究与应用[M].北京:学苑出版社,1997：46.

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[4] 苏颖,郭焱,刘智,等. 益气方对化疗所致小鼠免疫功能影响的实验研究[J] 长春中医药大学学报,2011,27(1):3-4.

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[6] 李仪奎,姜名瑛.中药药理学[M].北京:中国中医药出版社,1992:180.

[7] 崔艳梅,娄安如,赵长琦.红景天属植物化学成分及药理作用研究进展[J].北京师范大学学报(自然科学版),2008,44(3):328-333.

[8] 许瑞波,刘玮炜,王明艳,等.角鲨烯的制备及应用进展[J].山东医药,2005,25(35):69-70.