3种方法检测尿液中红细胞的对比分析

王昌壁，许 慧，唐 燕

(江苏省张家港市中医医院检验科 215600)

尿液有形成分分析是临床检验的重要组成部分，尤其是红细胞的检测，对泌尿系统疾病的诊断、辅助诊断及治疗有重要意义。以往对于它的检测是采用传统的显微镜，但其效率低下，结果易受技术人员的水平和主观因素的影响；随后出现了干化学技术，因其灵敏、快速而逐渐取代了显微镜；近年来又有了利用流式细胞记数法(FCM)技术的UF-1000i尿细胞分析仪(简称UF-1000i)，因其自动化程度高、精密度好，被广泛应用于临床检验。但在实际的工作中，由于不同方法的过筛标准不同及尿液有形成分的复杂，往往会出现一些假阳(阴)性结果，针对这一情况，作者对1 297例尿液标本运用UF-1000i、H-800干化学分析仪(简称H-800)及显微镜3种方法进行测定并比较分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 (1) 标本来源：收集本院2011年10～11月共1 297例住院患者晨尿20 mL，平均分两管，一份用于UF-1000i检测，另一份用于H-800和显微镜检测。(2)仪器与试剂：UF-1000i全自动尿细胞分析仪(日本希森美康株式会社)及其配套的试剂和质控品；H-800(长春迪瑞医疗科技股份有限公司)及其配套的试纸条和质控品；Olympus显微镜(日本奥林巴斯株式会社)；80-2台式低速离心机(上海医疗器械有限公司)；刻度离心管。

1.2方法

1.2.1操作方法 (1)UF-1000i和H-800：严格按照操作说明每天对其进行清洗、调试和配套质控，确保其正确测试。(2)显微镜镜检：根据第3版《全国临床检验操作规程》中显微镜尿沉渣操作程序进行，对进行H-800检测后的标本混匀后倒入刻度离心管，1 500 r/min,相对离心力400 g，时间5 min，弃上清液，留0.2 mL沉渣轻轻混匀后镜检。

1.2.2结果判定 (1)UF-1000i正常参考值：女性红细胞 0～25个/μL，男性红细胞 0～15个/μL，超过此上限为阳性；(2)H-800结果为：-、±、+、++、+++，检测以+以上为阳性；(3)显微镜：红细胞大于或等于3个/HP为阳性。

1.3统计学处理 采用SPSS13.0 统计软件对所有数据进行分析，配对计数资料采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.13种方法检测尿液红细胞结果比较 以显微镜检测结果作为尿液有形成分检测的金标准分别对UF-1000i和H-800的检测结果评价。UF-1000i分析尿液红细胞阳性符合率为94.24%，阴性符合率为95.68%，假阳性率为4.32%，假阴性率为5.76%，总符合率为95.30%，二者结果差异有统计学意义(χ2=6.56，P<0.05)；H-800分析尿液红细胞阳性符合率为95.68%,阴性符合率为97.16%，假阳性率为2.84%，假阴性率为4.32%，总符合率为98.84%，二者结果差异无统计学意义(χ2=2.88,P>0.05)；UF-1000i与H-800结果差异无统计学意义(χ2=0.98,P>0.05)，见表1。

表1 3种方法检测尿液红细胞结果比较(n)

2.23种方法检测尿液中红细胞结果分析 见表2。

表2 3种方法检测尿液红细胞结果分析

2.3UF-1000i 、H-800检测尿液红细胞假阳性及假阴性结果分析 UF-1000i的检测结果中红细胞假阳性41例，其中草酸钙结晶29例，尿酸盐结晶3例，磷酸盐结晶1例，细菌3例，(类)酵母菌4例，精子1例；红细胞假阴性20例，其中红细胞碎片3例，影红细胞6例，未知原因11例； H-800的检测结果中红细胞假阳性27例，其中血红蛋白尿4例，细菌尿3例，肾病患者15例，pH>8.0 3例，未知原因2例；红细胞假阴性15例，其中抗坏血酸大于5.7 mmol/L 5例，尿比重(SG)>1.030 4例，尿pH<5.0 4例，受药物影响2例。

3 讨 论

3.1UF-1000i使用的是FCM技术。用激光束照射染色后在鞘流贯流分析池中形成的鞘流样本，并通过对各粒子产生的前向散射光、侧向散射光以及侧向荧光信号转换成的光电信号来进行综合分析细胞形态、细胞横截面积、染色片段的长度、细胞容积等信息，绘出散点图，得出计数结果，并通过对每一个细胞信号和波形的特征来对其分类。对于红细胞则是利用细胞膜和核酸亲和力不一样的两种荧光染料进行染色，红细胞仅细胞膜被染色，仪器根据荧光强度低和前向散射光强度低将其归为红细胞[1]。因此凡是影响上述二者的因素都直接导致了结果的假性增高。从表1得到UF-1000i与显微镜的结果差异有统计学意义(χ2=6.56，P<0.05)，国外也有一些这方面的报道[2-3]。本文的假阳性率为4.32%，产生的原因有：(1)草酸钙结晶29例，因其形态大小与红细胞相似，在散点图中与红细胞交叉分布形成干扰；(2)集聚成团的非晶形尿酸盐结晶、磷酸盐结晶4例，与红细胞散点出现交叉，当其浓度增高时，会对红细胞产生影响[4]；(3)细菌3例，染色后荧光强度和前向散射光强度都低，当尿中细菌超过一定量聚集时会被误认为红细胞[5-6]；(4)酵母菌、类酵母菌4例，精子1例，其形态大小与红细胞类似，造成仪器判别有误,有文献资料也证实了这一点[7-8]。而对于假阴性(5.76%)的产生则是由于：(1)红细胞碎片3例，影红细胞6例[9]，后也经过干化学验证；(2)未知原因11例，可能是患者在治疗过程中使用了能产生荧光染料类似作用的药物，使红细胞不易被染液染色或被其他染料染色，从而影响计数[1]。

3.2H-800的原理是利用红细胞内的血红蛋白中的亚铁血红素有过氧化物酶样活性，使过氧化氢茴香素分解产生氧离子，氧化四甲基联苯胺呈蓝色来进行测定。所以其结果与尿中过氧化酶类活性有关，本实验结果与显微镜对比，差异无统计学意义(χ2=2.88,P>0.05)。从表1中得到H-800的假阳性率为2.84%，产生的原因可能为：(1)血红蛋白尿4例，2例为浓茶色，2例为酱油色,H-800蛋白定性的结果均为“+++”；(2)细菌尿3例，因为大多革兰阴性杆菌和某些革兰阳性球菌可释放过氧化酶活性物质或由于细菌代谢繁殖过程中合成的触酶、过氧化物酶和超过氧化物歧化酶，这些物质和酶都能使试带中的过氧化氢分解出游离氧，使色源呈色而出现假阳性[10]；(3)肾病患者15例，3例pH>8.0 ，因肾病患者的红细胞在肾脏或泌尿道破坏及尿液pH偏高均易造成红细胞破坏，血红蛋白释放入尿中；(4)未知原因2例，可能是尿液中有对热不稳定的酶或试纸条被污染、保存不当、操作不正确等。而对于假阴性(4.32%)的产生可能是：(1)5例抗坏血酸大于5.7 mmol/L，因高浓度的抗坏血酸可起竞争性抑制反应；(2)4例尿SG>1.030；(3)4例尿pH<5.0；(4)2例可能为某些药物影响，如利福平可降低红细胞的反应性，使结果偏低一个阳性等级。

综上所述，UF-1000i和H-800作为自动化仪器，其标准化提高了结果的可靠性，可作为一个常规筛查的重要手段而又不可以单独完全依赖，二者在联合应用中可以减轻显微镜镜检的工作量、降低使用单一仪器造成的假阳性和假阴性率、降低人为误差，在临床检验中具有较高的应用价值。但同时也必须认识到其中假阳(阴)性的存在，必要时还是要结合显微镜以保证尿液分析的精确度[11-12],为临床提供快速、准确的数据。

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