藤茶中二氢杨梅素β-环糊精包合物制备工艺研究

粱晓岚，李云耀，何桂霞*，邹 茜，刘赫男

（湖南中医药大学药学院中药现代化省教育厅重点实验室，湖南 长沙 410208）

藤茶中二氢杨梅素β-环糊精包合物制备工艺研究

粱晓岚，李云耀，何桂霞*，邹 茜，刘赫男

（湖南中医药大学药学院中药现代化省教育厅重点实验室，湖南 长沙 410208）

目的 研究二氢杨梅素β-环糊精包合的最佳工艺。方法 运用紫外分光光度计，采用正交实验法，以包合温度、包合时间、β-环糊精与二氢杨梅素的比例为考察因素，以二氢杨梅素包合率为指标，优选包合的最佳工艺。结果 β-环糊精包合二氢杨梅素的最佳制备工艺为：包合温度为70℃ ，包合时间为60min，β-环糊精与二氢杨梅素为1∶2.5。结论 优选的β-环糊精包合工艺简单，方便实用。

藤茶；二氢杨梅素；β-环糊精包合物；制备工艺；正交实验；紫外分光光度计

二氢杨梅素(Dihydromyricetin，简称DMY)为葡萄科蛇葡萄属植物藤茶Ampelopsis grossedentala(Hand—Mazz)W.T.Wang中主要化学成分， 且含量高达20%多[1-2]。药理研究表明，二氢杨梅素能对抗去肾上腺素和高K+所致的兔胸主动脉条的收缩反应及显著扩血管和钙阻滞作用，具有消炎、抑菌、止咳、镇痛、消脂及抗脂质过氧化等功效[3-4]。因二氢杨梅素在藤茶中含量高及较明显的药用价值成为近年研究的热点。由于二氢杨梅素常温下水溶解性差，生物利用度低，且有多酚羟基结构，对光线、溶液的pH值及铁、铝等金属离子敏感，易氧化变质，使其应用受到较大限制[5]。为改善其物理特性，更好地发挥其功效，采用β-环糊精（β-CD）包合技术[6-7]，将二氢杨梅素制成包合物；利用正交实验设计，对影响包合率的诸多因素进行考察，从而筛选优化得到最佳的包合工艺。现将方法及结果报道如下。

1 仪器与试药

K-2501紫外分光检测器(北京北分瑞利分析仪器(集团)有限责任公司)；FA2104万分之一电子天平(上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂)；KQ-250DE型数控超声波清洗器 （昆山市超声仪器有限公司）。二氢杨梅素(DMY)对照品为自制，1H-NMR光谱分析鉴定结构，高效液相归一化方法检测，含量在99.0%以上；β-环糊精 （中国医药集团上海化学试剂公司）；所用化学试剂均为国产分析纯。

2 方法与结果

2.1 包合物中二氢杨梅素的含量测定

2.1.1 二氢杨梅素对照品储备液的配制 精密称取真空70℃干燥至恒重的二氢杨梅素对照品11.5mg，95%乙醇溶解并定容至25 mL，备用。

2.1.2 吸收波长选择 分别将二氢杨梅素、β-环糊精及二氢杨梅素β-环糊精包合物的95%乙醇溶液在190～400 nm波长范围进行紫外扫描，二氢杨梅素溶液在290 nm波长处有最大吸收峰，二氢杨梅素β-环糊精包合物与二氢杨梅素的最大吸收波长一致，而β-环糊精在此无吸收，故选择290 nm为检测波长。

2.1.3 标准曲线的制备 精密吸取二氢杨梅素对照品储 备 液 0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL， 分 别置50 mL量瓶中，加95%乙醇定容至刻度，摇匀，于290 nm下测定吸光度，以浓度C为横坐标，吸收度A为纵坐标，得回归方程

2.1.4 精密度试验 按线性范围分别配制高、中、低3种浓度的二氢杨梅素乙醇溶液，以95%乙醇为空白，于290 nm处分别1 d内测定5次和5 d内测定5次，按标准曲线法计算浓度。结果日内精密度RSD为0.42%，日间精密度RDS为0.78%。

2.1.5 回收率试验 取已知含量的二氢杨梅素β-环糊精包合物2mg，精密称定，共9份分成3组，置50 mL容量瓶中加95%乙醇溶解并定容，再量取该溶液1 mL置于10 mL容量瓶中，分别加入0.1、0.2、0.4 mL 二氢杨梅素对照品储备液，按“2.1.3”项下方法测定吸光度，求加样回收率。平均回收率为97.86%，RSD 为 1.597%(n=9)。

2.1.6 样品测定 取二氢杨梅素β-环糊精包合物2mg，精密称定，用95%乙醇定容至250 mL，超声使之溶解，在290 nm波长处测定吸光度，按下式计算出二氢杨梅素包合率：

2.2 正交实验设计

2.2.1 因素及水平 经初步试验，选择β-环糊精与二氢杨梅素的比例(A)、包合温度(B)、包合时间(C)为考察因素，利用L9(34)进行正交实验。包合工艺因素水平见表1。

表1 因素水平表

2.2.2 β-环糊精包合物制备工艺 精密称取一定量β-环糊精，加入纯化水，超声使成饱和溶液。另精密称取一定量二氢杨梅素，用95%乙醇溶解，超声下将其缓缓滴入β-环糊精饱和溶液中，超声处理一定时间，放冷至室温，然后放入冰箱中冷藏12 h，抽滤，固体物先用乙醇洗涤，再用纯化水洗涤，抽干，于60℃真空干燥10 h，得二氢杨梅素β-环糊精包合物，称质量。以二氢杨梅素包合率为评价指标，筛选最佳工艺条件。

2.2.3 正交试验结果 二氢杨梅素β-环糊精包合工艺条件筛选的正交试验结果见表2。影响包合的因素排列顺序为A>C>B,最佳因素水平为A2B2C3，即最佳包合工艺条件为β-环糊精与二氢杨梅素的分子比为1∶2.5、包合温度为60℃、包合时间为90min，含药量为32.24%。方差分析表明，β-环糊精与二氢杨梅素的分子比对，实验结果有显著性影响，而包合时间和包合温度对包合率影响不显著。见表3。

表2 包合工艺正交试验结果

表3 以包合率为指标的方差分析

2.3 包合物的鉴定

2.3.1 薄层色谱法 将二氢杨梅素对照品乙醇溶液、二氢杨梅素对照品乙醚溶液、二氢杨梅素β-环糊精包合物乙醇溶液、二氢杨梅素β-环糊精包合物乙醚溶液点于同一硅胶G板上，置展开剂甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶8∶5)中展开，将层析板取出晾干，喷 3%三氯化铁乙醇溶液显色，结果前3个样品均在Rf值0.6处出现相同的紫色斑点，而二氢杨梅素β-环糊精包合物乙醚溶液样品色谱中未出现与前三者相同的斑点，说明二氢杨梅素被β-环糊精包合。

2.3.2 紫外光谱法 将二氢杨梅素及二氢杨梅素β-环糊精包合物乙醇溶液在200～400 nm波长范围进行紫外扫描，结果，二氢杨梅素和二氢杨梅素β-环糊精包合物的吸收图谱完全一致，说明包合前后二氢杨梅素未发生化学变化，而是通过物理包合作用形成了包合物。

3 讨论

近年来β-环糊精包合物在中药制剂中的应用研究日渐广泛，β-环糊精包合物可用于改善难溶性药物的溶解度，可使液体药物粉末化与防挥发，掩盖药物不良臭味和降低刺激性，提高药物的稳定性等[8]。目前β-环糊精包合技术主要有饱合水溶液法、溶液-搅拌法、研磨法、超声波等。超声波是机械振动能量的传播，可在液体中形成有效的搅动与流动，破坏介质的结构，能达到普通低频机械搅动达不到的效果，超声波法制备包合物具有时间短、包合率较高、条件易控制、工艺简单等优点[9-10]。本论文筛选制备二氢杨梅素β-环糊精包合物的最佳工艺，包合率为86.77%，二氢杨梅素的含量为32.24%，制得的包合物为白色无味的粉末。关于二氢杨梅素β-环糊精包合物的溶出度、稳定性和药效的观察有待于进一步研究。

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[2]何桂霞，裴 刚，杨伟丽，等.HPLC测定藤茶不同采收时期及不同部位的二氢杨酶素含量[J].中成药，2004，26(3)：210-212.

[3]周雪仙，周天达.二氢杨梅树皮素对兔胸主动脉条平滑肌收缩反应[J].现代应用药学，1997，14(2)：43-45.

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Preparation of inclusion complex of dihydromyricetin-β-cyclodextrin from ampelopsis grossedentala

LIANG Xiao-lan,LI Yun-yao,HE Gui-xia,ZOU Qian,LIU He-nan
(Pharmacy College,TCM University of Hunan,Changsha,Hunan 410208,China)

ampelopsis grossedentala； dihydromyricetin;complex of β -cyclodextrin；preparation；orthogonal test;UV spectrophotometer

R283.6

B

10.3969/j.issn.1674－070X.2011.01.012.043.03

〔Absrract〕Objective To study the optimized process for preparation of the inclusion complex of dihydromyricetin β-cyclodextrin.Methods The orthogonal design and ultraviolet spectrophotometer were used,and the including temperature,including time,the ratio of β-cyclodextrin and dihydromyricetin were studied,and inclusion ratio were used as optimizing index.Results The optimized preparation conditions of dihydromyricetin-β-cyclodextrin included that the ratio of β-cyclodextrin and dihydromyricetin was 1:2.5,the inclusion temperature 70℃ and the stirring time 60 min.Conclusion The optimizied process is simple, functional and convenient for preparation of the inclusion complex of dihydromyricetin-β-cyclodextrin.

2010-03-12

湖南省教育厅科学研究资助项目(07C498)；湖南省教育厅中药学重点学科和“十一五”校级重点学科中药化学与分析的项目资助。

梁晓岚(1988-)，女，湖南益阳人，硕士研究生，从事中药化学与制剂工艺研究。

* 何桂霞，博士，教授，硕士生导师，E-mail： heguixia65@yahoo.cn。

（本文编辑 徐爱良）