菜籽多糖APS-2的理化性质及结构研究

2011-11-14 15:36朱建飞唐春红吴谋成
食品工业科技 2011年2期
关键词:马斯亮糖醛酸菜籽

朱建飞,陈 岗,唐春红,吴谋成

(1.重庆工商大学环境与生物工程学院,绿色食品研究所,重庆400067;2.华中农业大学食品科学技术学院,湖北武汉430070)

菜籽多糖APS-2的理化性质及结构研究

朱建飞1,陈 岗1,唐春红1,吴谋成2

(1.重庆工商大学环境与生物工程学院,绿色食品研究所,重庆400067;2.华中农业大学食品科学技术学院,湖北武汉430070)

APS-2为白色絮状的非淀粉多糖,中性糖、糖醛酸、蛋白质含量分别为66.8%、9.3%、8.4%。APS-2中蛋白质部分由13种氨基酸组成。FT-IR、GC初步分析APS-2的官能团特征及单糖组成,确定APS-2单糖主要由阿拉伯糖(Ara)、半乳糖(Gal)、葡萄糖(Glc)、甘露糖(Man)、鼠李糖(Rha)组成,其摩尔百分含量分别为55.0%、26.1%、11.3%、5.7%、1.9%。

菜籽多糖,理化性质,结构

油菜是一种重要的油料作物,我国油菜籽产量居世界第一位。每年油菜籽制油后所产生的菜籽饼粕达600~700万t[1-2]。多糖是菜籽饼粕中的可利用成分之一。笔者在前期研究了菜籽多糖的提取和纯化工艺,提尽水溶性多糖后的菜籽饼粕残渣用稀碱溶液继续提取,得到的菜籽多糖碱提液经特1号大孔吸附树脂柱层析、分步醇沉、DE-52纤维素离子交换柱层析等方法纯化,得到碱溶性菜籽多糖主要级分APS-2。现进一步研究其理化性质及结构表征,为菜籽多糖的利用奠定理论基础。

1 材料与仪器

1.1 材料与仪器

水溶性菜籽多糖 主要级分 APS-2,纯度76.1%;碘、碘化钾、苯酚、硫酸、咔唑、考马斯亮蓝G-250、氢氧化钠、三氟乙酸、硼氢化钠、盐酸、羟胺、吡啶、醋酸酐、氯仿、葡萄糖、木糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖、阿拉伯糖等 均为分析纯。

UV-9100紫外可见分光光度计,Shimadzu GC-9A气相色谱分析仪,Agilent N6890气相色谱分析仪,CJJ79-1磁力加热搅拌器,Nexus红外光谱仪。

1.2 实验方法

1.2.1 基本理化性质的测定 基本理化性质的测定内容包括:溶解性测定、碘反应、硫酸-咔唑反应、考马斯亮蓝G-250反应等[3]。

1.2.2 中性糖含量测定 中性糖测定采用改良苯酚-硫酸法[4]。

1.2.3 己糖醛酸测定 糖醛酸的测定采用硫酸-咔唑法[5]。

1.2.4 蛋白质含量测定 蛋白质含量测定采用考马斯亮蓝G-250染色法[6]。

1.2.5 紫外光谱分析 分别配制1mg/mL的APS-2溶液,以水作空白对照,于200~400nm间进行紫外扫描。

1.2.6 红外光谱分析 APS-2经KBr压片,于红外光谱仪上扫描分析,扫描范围为4000~600cm-1。

1.2.7 单糖组成分析 采用糖醇乙酰酯衍生物气相色谱法(GC)测定单糖组分[7]。GC条件:HP-5石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm);氢火焰离子化检测器;柱温以 10℃/min的速度从 150℃升至160℃,保持8min;再以10℃/min的速度升至180℃,保持2min;再以4℃/min升至210℃,保持4min;检测器和进样口温度均为280℃;H2流量为30mL/min,空气流量为300mL/min,N2流量为15mL/min。

2 结果与分析

2.1 主要理化性质

APS-2的基本理化性质如表1所示。结果表明,APS-2不发生KI-I2反应,属非淀粉多糖;不与斐林试剂反应,即不含单糖;苯酚-硫酸反应、硫酸-咔唑反应、考马斯亮蓝G-250反应均呈阳性,说明APS-2含有糖醛酸、蛋白质。

表1 APS-2的理化性质

2.2 中性糖、糖醛酸含量及蛋白质含量

表2显示,APS-2含有糖醛酸,并结合一定量的蛋白质。

表2 APS-2的组成成分

表3 APS-2中蛋白质的氨基酸组成及含量(mg/100mg)

2.3 氨基酸组成分析

APS-2中结合蛋白部分主要由苯丙氨酸、苏氨酸、谷氨酸等13种氨基酸组成,含有人体必需8种氨基酸中的5种,即亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸和苯丙氨酸,其氨基酸总量与测得的蛋白质含量相近(如表3所示)。

2.4 APS-2的紫外光谱分析

APS-2水溶液的紫外扫描图谱如图1所示,未见280nm和260nm处的蛋白质及核酸特征吸收,可能是其含量较低所致。

图1 APS-2的紫外光谱

2.5 红外光谱分析

参考糖类红外光谱官能团分析[7-8],APS-2的红外光谱如图2所示,主要有以下结构特征:3700~ 3100cm-1左右的宽峰是糖类O-H的伸缩振动;C-H的伸缩振动位于3397cm-1左右;1632cm-1左右的吸收峰是-CHO中C=O的伸缩振动;1409cm-1左右的弱峰是-CH2-中C-H的变角振动;1079cm-1左右的强峰是O-H键的变角振动,APS-2红外吸收光谱对应官能团的指认见表4。

图2 APS-2的红外光谱

表4 APS-2红外吸收光谱对应官能团的指认

2.6 气相色谱分析

单糖标准品和APS-2水解物的糖醇乙酰酯气相色谱图见图3。根据面积归一化法,计算出 APS-2单糖组成:Ara、Gal、Glc、Man、Rha的摩尔百分含量分别为55.0%、26.1%、11.3%、5.7%、1.9%。以上GC分析中未能检出己糖醛酸,是因为在制备糖醇衍生物的过程中己糖醛酸遭到破坏的缘故[9]。

图3 标准单糖(A)和APS-2(B)水解物糖醇乙酰酯衍生物气相色谱图

3 结论

经过分级纯化得到的水溶性多糖级分APS-2为白色絮状非淀粉多糖,且都含有糖醛酸和蛋白质,通过GC对菜籽多糖的单糖组分分析,APS-2主要是由Ara、Gal、Glc组成,还有少量Man、Rha等组分。

[1]吴谋成,袁俊华.加快我国油菜籽加工及综合利用的研究与产业化[J].粮食与油脂,2001(1):11-13.

[2]王汉中.我国油菜产需形势分析及产业发展对策[J].中国油料作物学报,2007,29(1):101-l05.

[3]谭周进,谢达平,王征,等.蜜环菌多糖分离纯化及性质的研究[J].食品科学,2002,23(9):49-53.

[4]董群,郑丽伊,方积年.改良的苯酚-硫酸法测定多糖和寡糖含量的研究[J].中国药学杂志,1996,31(9):550-553.

[5]刘桂敏,赵秀梅,陈菊娣,等.刺参酸性粘多糖质控分析方法的研究[J].解放军预防医学杂志,2004,22(2):107-109.

[6]李娟,张耀庭,曾伟,等.应用考马斯亮蓝法测定总蛋白含量[J].中国生物制品学杂志,2000,13(2):118-120.

[7]张惟杰.糖复合物生化研究技术[M].杭州:浙江大学出版社,1999:398-417.

[8]Yang X P,Guo D Y,Zhang J M,et al.Characterization and antitumor activity of pollen polysaccharide[ J] .Int Immunopharmacol,2007(7):427-434.

[9]Jecob L.Differential gas-liquid chromatography method for determination of uronic acid in carbohydrate mixture[J].Anal Biochem,1981,115:410.

Physicochemical and structural characterization of rapeseed polysaccharide APS-2

ZHU Jian-fei1,CHEN Gang1,TANG Chun-hong1,WU Mou-cheng2
(1.College of Environmental and Biological Engineering,Natural and Health Food Research Institute,Chongqing Technology and Business University,Chongqing 400067,China;2.College of Food Science and Technology,Huazhong Agricultural University,Wuhan 430070,China)

APS-2 is a non-starch polysaccharides with white and flocculent appearance,in which the contents of neutral sugar,uronic acid and protein were 66.8%,9.3%and 8.4%,respectively.The associated protein portions in APS-2 consisted of 13 different amino acids.To their monosaccharide composition,APS-2 consisted primarily of Ara(55.0mol%),Gal(26.1mol%),and Glc(11.3mol%),accompanied by some Man(5.7mol%)and Rha(1.9mol%)which were tested by FT-lR and GC.

rapeseed polysaccharide;physicochemical properties;structure

TS229

A

1002-0306(2011)02-0147-03

2010-01-20

朱建飞(1979-),男,博士,讲师,研究方向:农业资源综合利用。

国家“十五”重大科技专项资助项目(2001BA501A20)。

猜你喜欢
马斯亮糖醛酸菜籽
The 2022 Report on the Work of the Government
改良考马斯亮蓝试剂法测定壳聚糖及其 衍生物中蛋白质含量
春天时蔬菜籽头
作者更正
高蛋白菜籽粕对成长猪只有益
气相色谱法同步测定甜菜果胶中醛糖与糖醛酸
林下参片中总糖、还原糖及糖醛酸的含量测定
考马斯亮蓝显现血手印配方的改进研究
奶粉中蛋白质含量的快速测定
高蛋白菜籽料和传统菜籽料对于断奶仔猪各性能的影响