益母草滴丸中水苏碱的含量测定

彭丽丽，肖苏萍

（1.北京勃然制药有限公司，北京 102204；2.中国药材公司，北京 100195）

益母草滴丸中水苏碱的含量测定

彭丽丽1*，肖苏萍2

（1.北京勃然制药有限公司，北京 102204；2.中国药材公司，北京 100195）

目的：建立益母草滴丸的含量测定方法。方法：采用HPLC测定盐酸水苏碱的含量，Waters Spherisorb SCX阳离子交换树脂柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：15mmol·L－1磷酸二氢钾溶液（含有0.04%三乙胺和0.15%磷酸）；柱温：室温；检测波长：192nm。结果：盐酸水苏碱在0.0214～0.428 mg·mL－1线性关系良好（r＝0.9999），平均回收率为100.42%，RSD＝1.02%。结论：建立的含量测定方法简便、准确、重复性好，可用于益母草滴丸质量控制。

益母草滴丸；水苏碱；高效液相色谱法；含量测定

益母草滴丸是益母草经过提取制成的滴丸，是在卫生部药品标准收载的益母草颗粒标准（WS3-B-1404-93）中的处方和工艺不变的情况下改变剂型而得。具有活血调经功能，用于经闭、痛经及产后瘀血腹痛。益母草是最常用的中药之一，为唇形科植物益母草的干燥地上部分。益母草主要化学成分为益母草碱、水苏碱、益母草啶、益母草宁等［1-3］。其有效成分是以水苏碱和益母草碱为代表的总生物碱，其中水苏碱具有兴奋子宫的作用，且含量较高，易于测定［4］，常作为质控指标。因此，本实验选择君药益母草中的水苏碱（以盐酸水苏碱计）作为益母草滴丸质量控制指标。

1 仪器与试药

Agilent1100高效液相色谱仪；盐酸水苏碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110712-200408）；益母草滴丸（北京勃然制药有限公司，批号：050402，050405，050406，050407），磷酸二氢钾为分析纯，水为重双蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

Waters Spherisorb SCX阳离子交换树脂柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：15mmol·L－1磷酸二氢钾溶液（含有0.04%三乙胺和0.15%磷酸）；柱温：室温；检测波长：192nm；流速：1.0mL·min－1；理论板数以盐酸水苏碱峰计算应不低于3000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取盐酸水苏碱对照品适量，加流动相制成 0.1 mg·mL－1的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取本品1 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加乙醇50mL，称定重量，超声（250 W，40 kHz）处理30min，放冷，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25mL，过氧化铝－活性炭柱（碱性氧化铝5 g，湿法装柱，上覆层析用40～60目活性炭2 g，乙醇预洗），收集乙醇洗脱液100mL，蒸干，残渣加流动相适量使溶解，转移至10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，以微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

2.4 方法专属性试验

按处方组成，取缺益母草药材的益母草滴丸阴性样品1.0g，精密称定，然后按供试品制备项下的方法制备阴性对照溶液，分别吸取阴性对照溶液与供试品溶液各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图与峰面积，见图1～3。结果表明，阴性对照品的图谱中盐酸水苏碱位置上无峰出现，表明阴性无干扰。

图1 盐酸水苏碱对照品HPLC图

2.5 线性关系的考察

图2 益母草滴丸样品HPLC图

图3 益母草滴丸阴性样品HPLC图

精密称取盐酸水苏碱对照品10.7 mg，置25mL容量瓶中，加水使溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成0.428 mg·mL－1的盐酸水苏碱溶液。精密量取对照品溶液5.0，2.5，1.0，0.5mL，分别置于10mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，质量浓度分别为0.214，0.107，0.0428，0.0214mg·mL－1，上述色谱条件下，分别进样10μL，记录峰面积；以浓度（C）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y＝2072X－1.4499，r＝0.9999。试验结果表明盐酸水苏碱的浓度在0.0214～0.428 mg·mL－1与峰面积呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验

取浓度为0.107 mg·mL－1的盐酸水苏碱对照品溶液，在上述色谱条件下重复进样5次，每次10μL，记录盐酸水苏碱色谱图与峰面积，计算RSD＝0.26%，结果表明精密度良好。

2.7 重复性试验

取同一批号的益母草滴丸（批号：050402），按2.3方法分别制备5份供试品液，精密吸取供试品液各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图与峰面积，计算RSD＝0.45%，结果表明重现性良好。

2.8 稳定性试验

取同一批号的益母草滴丸（批号：0504027），按2.3方法制备5份供试品液，分别于0，2，4，6，8，12，24 h精密吸取供试品液各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图与峰面积，计算RSD＝0.52%，表明样品溶液在24 h内稳定。

2.9 加样回收率试验

取已知含量为9.399 mg·g－1的益母草滴丸（批号：050402）共5份，精密称定，置具塞锥形瓶中，再精密称取盐酸水苏碱对照品5份，分别加入上述供试品中，然后按上述色谱条件操作测定，记录色谱图，考察本方法的加样回收率，结果见表1。

表1 盐酸水苏碱加样回收率试验

2.10 样品含量测定

按上述方法对050405，050406，0504073批样品进行含量测定，每批测定2次，记录色谱图与峰面积，计算盐酸水苏碱含量分别为8.75，9.39，9.24 mg·g－1。

3 讨论

3.1 流速的选择

曾试用了0.8，0.9，1.0mL·min－1共 3种流速进行试验，结果流速为1.0mL·min－1时盐酸水苏碱色谱峰与其他成分的峰能较好地分离，峰形较好。故采用1.0mL·min－1的常规流速。

3.2 提取条件的考察

对提取方法、提取溶剂、提取时间等进行了比较实验，结果表明，样品1.0 g采用乙醇50mL、超声30min即可提取完全。同时在氧化铝上层覆活性炭进行脱色，经过优选采用2 g即可；经过实验优选了洗脱体积，发现采用100mL即可洗脱完全，最终确定了该除杂方法。

3.3 流动相选择

益母草滴丸由益母草提取浸膏加入辅料滴制而成，由于盐酸水苏碱的紫外吸收为末端吸收，且其极性较大，故很难以反相HPLC进行测定，有文献［5］采用强阳离子交换柱获得了较好的分离。在参考文献的基础上［5］，试用了流动相：15mmol·L－1磷酸二氢钾溶液（含有0.04%三乙胺和0.15%磷酸）、0.05%三乙胺和0.025 mol·L－1的磷酸二氢钾（用磷酸调至pH 2），结果使用15mmol·L－1磷酸二氢钾溶液（含有0.04%三乙胺和0.15%磷酸）作为流动相峰形较好，也较稳定，盐酸水苏碱色谱峰与其他成分较好地分离，故选此为流动相。

实验结果表明该方法操作简便、可行，重复性好，可用于控制产品质量。

［1］唐盈，王晓强.四种含益母草中成药中水苏碱的含量测定［J］.药物分析杂志，1989，16（3）：21-23.

［2］晁志，周秀佳.益母草类中药的研究概况和进展［J］.中草药，1998，29（6）：414-417.

［3］张娴，彭国平.益母草属化学成分研究进展［J］.天然产物研究与开发，2003，15（2）：162-166.

［4］刘莉，李慧金.益母草提取工艺优选［J］.中国实验方剂学杂志，2003，9（2）：3-5.

［5］姜舜尧.益母草药材中水苏碱成分的高效液相色谱法分析［J］.药物分析杂志，2001，21（4）：243-245.

Determination of Stachydrine in Yimucao Dripping Pills

PENG Li-li1，XIAO Su-ping2
（1.Beijing boran pharmacy Co.，LTD.，Beijing 102204，China，2.China National Corp.of Traditional＆Herbal Medicine，Beijing 100195，China）

Objective：To establish a method for the determination of yimucao dripping pills.Methods：HPLC was adopted with Waters Spherisorb SCX Cation Exchange Resin column（4.6mm×250mm，5μm）；The mobile phase was 15mmol·L-1monopotassium phosphate solution（with 0.04% triethylamine and 0.15%phosphoric acid，column temperature was room temperature，the detection wavelength was 192nm.Results：The linear range of stachydrine was 0.0214～0.428 mg·mL-1（r＝0.9999）.The average recovery was 100.42%and RSD was 1.02%.Conclusion：Themethod is simple，accurate.It has good reproducibility and can be used for quality control of yimucao dripping pills.

Yimucao dripping pills；Stachydrine；HPLC；Determination

*彭丽丽，E-mail：peng＿lili＠163.com

2010-11-05）