比色法测定复方氨基酸注射液中胱氨酸含量

天津市武清区药品检验所（301700）赵刚

复方氨基酸注射液（18AA）收载在《中华人民共和国卫生部药品标准》（二部）第六册（生化药品第一分册）中[1]。该标准无含量测定要求。同时，由于处方中胱氨酸的含量较低（两种规格分别含胱氨酸0.01%和0.024%），目前多采用的柱前衍生化反相高效液相色谱法无法测定或误差较大。为了全面控制该制剂的质量，笔者参考有关文献[2][3]，建立了分光光度法测定其中胱氨酸含量的方法，有较好专属性和准确度，现报道如下：

1 仪器与试药

日本岛津UV-2450型紫外-可见分光光度仪；L-胱氨酸对照品为日本产品，纯度为99.8%；1,4-二硫代苏糖醇为美国SERVAFEINBIOCHEMICA hEIDELBERG生产的生化试剂；氢氧化钠、茚三酮、冰醋酸、盐酸等均为分析纯化学试剂。复方氨基酸注射液（18AA）均为国产制剂，规格为5%和12%。

2 方法与结果

2.1 溶液的配制

2.1.1 二硫代苏糖醇溶液 取1,4-二硫代苏醇约40mg置25ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。

2.1.2 对照品储备液 取经五氧化二磷减压干燥4小时的L-胱氨酸对照品约30mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。

2.1.3 酸性茚三酮溶液 取茚三酮0.25g，加冰醋酸6ml与盐酸4ml，超声振荡使溶解，即得。本液须临用新制。

2.1.4 阴性对照溶液 按处方量配制不含胱氨酸的溶液，精密量取该溶液0.5ml，精密加10mol/L氢氧化钠溶液10μl，加0.1mol/L氢氧化钠溶液适量使对酚酞指示液恰显粉红色为止，再精密加入二硫代苏糖醇溶液0.5ml，用水准确稀释至2ml，摇匀，在室温下放置30分钟后，精密量取1ml，以此作为阴性对照溶液。

2.1.5 样品溶液 精密量取复方氨基酸注射液（18AA）适量（约含胱氨酸0.04mg～0.06mg）用水稀释至0.5ml，依照“2.1.4”项下自“精密加10mol/L氢氧化钠溶液10μl”起同法操作，以此作为样品溶液。

2.2 线性试验 分别精密量取对照品储备液0、0.025、0.05、0.15、0.25、0.35、0.45和0.50ml，用水稀释至0.5ml，作为系列对照溶液。于上述各溶液中分别精密加入10mol/L氢氧化钠溶液10μl，加入0.1mol/L氢氧化钠溶液适量使对酚酞指示液恰显粉红色，再精密加入二硫代苏糖醇溶液0.5ml，用水准确稀释至2ml，摇匀，在室温下放置30分钟后，分别精密量取1ml，置25ml具塞试管底部，于各个试管中精密加入冰醋酸与酸性茚三酮溶液1ml，轻轻摇匀，密塞，在水浴上准确加热10分钟后，立即冷却，分别精密加入乙醇15ml，摇匀，以未加对照品储备液的试液作为空白溶液。

在558nm波长处测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，得出线性方程为A=1.91×10-3+5.81C（r=0.998）。结果表明，胱氨酸在0～0.08mg/ml范围内呈良好线性关系。

2.3 测定方法 精密量取样品溶液1ml，依照“2.2”项下自“置25ml具塞试管底部”起同法操作，将测定结果代入标准曲线，计算注射液中胱氨酸的含量。不同厂家的测定结果见附表。

2.4 显色溶液的稳定性 取已反应完毕的供试液在558nm波长处测定吸光度，每隔5分钟测定一次，共考察25分钟。结果在20分钟内，含量测定结果下降了约2%，符合仪器分析的实验误差要求。

附表 含量测定结果

2.5 回收率试验 依照“2.1.2”项下的方法配制对照品储备液，分别精密量取对照品储备液0.28、0.35、0.42ml各3份（不同溶液中约含胱氨酸分别为测定量的80%、100%和120%），再分别置5ml具塞试管中，然后各加入按处方量配制不含胱氨酸的溶液0.5ml，按“2.2”项下自“于上述各溶液中分别精密加入10mol/L氢氧化钠溶液10μl”起同法操作。高、中、低三种浓度的平均回收率为99.0%，RSD（n=9）为0.51%。

2.6 重复性试验 取同一批样品，分别依照“2.1.2”项下的方法重复测定6次，得RSD为1.10%。

3 讨论

3.1 取显色后的对照品溶液和供试品溶液在400～700nm波长范围内扫描。结果表明，显色后的溶液最大吸收波长为558nm。在此波长处测定空白溶液基本无干扰。故选择558nm为测定波长。

3.2 阴性对照溶液与空白溶液的吸光度值及光谱均一致，故以空白溶液为本底作相应的扣除，不干扰测定结果。

3.3 不同生产厂家在生产复方氨基酸注射液（18AA）时添加的胱氨酸量可能存在较大的差异，如采用对照品比较法会引进误差，而标准曲线法可以测定一定范围内的胱氨酸含量。

3.4 根据测定结果和胱氨酸标示量，其含量限度可控制在为标示量70.00～130.0%。

3.5 在加入供试液（或对照液）时，应注意加至管底部，避免沾在试管壁上而影响结果的准确。