正交试验优选复方叶下珠的水提制备工艺

2011-10-17 12:30汕头大学医学院附属粤北人民医院512026徐晓梅谭本仁
首都食品与医药 2011年4期
关键词:附表复方色谱

汕头大学医学院附属粤北人民医院(512026)徐晓梅 谭本仁

顺德顺风药业有限公司(528300)刘贤英

汕头大学医学院附属粤北人民医院(512026)许卫关

复方叶下珠由叶下珠、半边莲、半枝莲、鸡骨草、茵陈、丹参、柴胡等十六味药组成,具有疏肝解郁,益气健脾,抗乙肝病毒,改善肝功能,调节免疫机能等功效。主治急慢性肝炎、重症肝炎、肝硬化、肝癌等疾病。实验为优选复方叶下珠的最佳提取工艺,以君药叶下珠所含没食子酸含量为指标成分,以煎煮时间、加水量、醇沉浓度三个对提取物收率影响较大的条件为考察因素,按L9(34)正交表进行试验,以优选出用于该制剂生产的最佳水提取工艺,从而更好地控制制剂质量,保证药物疗效。

1 仪器与试药

1.1 仪器 美国 Waters 高效液相色谱仪、高效液相色谱仪(waters1525泵、717 自动进样器、2487 紫外检测器);液相色谱柱(Microsorb-MV10-5,C18,250 mm ×4.6 mm,5μm)

1.2 试药 药材:叶下珠、半边莲、半枝莲、鸡骨草、茵陈、丹参、柴胡等经鉴定为真品;没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号110831-200302),水为重蒸水,试剂皆为分析纯。

2 实验方法

2.1 提取溶媒的选择 复方叶下珠是由叶下珠、半边莲、半枝莲、鸡骨草等药材组成的,其中活性作用比较明确的有叶下珠的没食子酸,叶下珠素,半边莲的L-山梗菜碱、延胡索酸,半枝莲的黄芩苷、原儿茶酸以及鸡骨草的相思子碱、黄酮苷等成分,经多次预试验,确定在不违背中药传统提取工艺的前提下,为充分提高药材的生物提出利用率,本品采用水作为溶媒进行提取。具体提取条件采用正交试验方法进行优选。

2.2 正交试验设计 试验以复方叶下珠中叶下珠没食子酸含量为标准,对煎煮时间、加水量、醇沉浓度三个因素进行考察,每因素设置三个水平,设计正交试验(见附表1),从而选取最佳的水提工艺。

2.3 没食子酸含量测定

通过试验预试结果和参考文献[1],采用高效液相色谱法测定样品中没食子酸含量,测定方法经验证可行。

2.3.1 色谱条件 色谱柱:Microsorb-MV10-5,C18柱(250mm×4.6mm,5μm);检测波长280nm;流动相:甲醇-水-磷酸(4:96:0.05);流速1ml/min;柱温:室温。

2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取减压干燥直恒重的没食子酸对照品约4mg,置10ml的容量瓶中,加30%甲醇溶解并定容配成浓度约为0.4mg/ml的溶液,即得。

2.3.3 标准曲线的制备 精密吸取标准溶液0.5,1.0,1.5,2.0,2.5ml,用30%甲醉溶液定容至5ml容量瓶中,分别吸取20μl进样,测定色谱峰面积。以色谱峰面积A为纵坐标,没食子酸对照品的浓度为横坐标,得回归方程 Y=31558X十3677.1(r=0.9994),线性范围为40~200μg/ml,可用外标一点法计算含量。

2.3.4 供试品溶液的制备及供试品测定 分别按处方比例称取9份复方叶下珠中叶下珠、半边莲、半枝莲、鸡骨草等药材,合计每份总重245g,根据附表1正交试验因素水平,按以下工艺提取:叶下珠、半边莲、半枝莲、鸡骨草等十多种中药材→加水煎煮→浓缩→酒沉→回收乙醇至流浸膏。精密称取样品约0.5ml,置50ml量瓶中,加甲醇30ml振荡溶解,用甲醇稀释置刻度,摇匀,过滤,取续滤液即得。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl,注入液相色谱仪,测定计算没食子酸含量。

附表1 正交试验因素水平

3 结果

选用L9(34)正交试验表设计,测定煎液中没食子酸的含量,计算其提取量。试验结果见附表2。

由附表2中数据直观和方差分析可知,对于样品中的没食子酸提取得率来说,A、B、C因素对试验均有显著影响,影响因素为A>B>C。

附表2 方差分析

综合试验结果及实际操作问题,确定提取工艺为A2B2C3,即加水10倍,煎煮1小时,醇沉浓度为60%。

按照上述最佳提取工艺,按处方量称取3份本品中各中药材,合计每份总重735g,试验结果表明该提取工艺下没食子酸提取得率最高,且3批数据接近,说明该工艺稳定、可靠,达到了提取条件优化的目的。

4 讨论

复方叶下珠以叶下珠和半边莲为君药。叶下珠的主要有效成分为没食子酸、叶下珠素。其中,没食子酸有抗HSV活性,能抑制HSV对靶细胞的吸附[2]。叶下珠素能明显降低ALT、AST水平,对CCl4和氨基半乳糖诱发的肝细胞损伤有明显保护作用[3]。半边莲的主要有效成分为山梗菜碱、延胡索酸等具有明显的利胆消炎及抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的作用[4]。

上述有效成分既易溶于水,又易溶于乙醇,为保持该药的特点,发挥中药的复方功效,故在制备工艺上采用水提醇沉法,采用叶下珠中主要活性成分没食子酸提取得率作为指标,通过正交试验用以优选最佳提取工艺。正交试验结果表明,复方叶下珠的最佳提取工艺为加水10倍,煎煮1小时,醇沉浓度为60%。

猜你喜欢
附表复方色谱
《色谱》论文中可直接使用的缩略词
《色谱》论文中可直接使用的缩略词
《色谱》论文中可直接使用的缩略词
《色谱》论文中可直接使用的缩略词
Anti-hypertensive and endothelia protective effects of Fufang Qima capsule (复方芪麻胶囊) on primary hypertension via adiponectin/adenosine monophosphate activated protein kinase pathway
附表4 湖南省饲料添加剂企业名单
附表4 湖南省饲料添加剂企业名单(2021 年1 月1 日—2021 年2 月28 日)
Protective effects of Fufang Ejiao Jiang against aplastic anemia assessed by network pharmacology and metabolomics strategy
附表3 湖南省2018年饲料添加剂、添加剂预混合饲料产品批准文号名单(二)
HPLC-DAD法同时测定复方罗布麻片Ⅰ中4种成分