高效液相色谱法测定头孢拉定胶囊的溶出度

江苏省泰州市食品药品检验所（225300） 柏大为 钱桂英

2005年版《中国药典》（一部）规定的溶出度测定方法为紫外分光光度法（UV），该方法操作过程较繁琐，且结果易受试剂影响。为此，笔者建立了测定头孢拉定胶囊溶出度的高效液相色谱法（HPLC），并与UV法进行了比较。

1 仪器与试药

附图 头孢拉定溶出度HPLC图谱

WATERS 2695-2996液相色谱仪（美国Waters公司）；UV2550紫外分光光度计（日本岛津公司）；RC-3B药物溶出仪（天津大学无线电厂）；METTLER AG135电子天平（梅特勒公司）。头孢拉定对照品（中国药品生物制品检定所，批号为130427-200306，含量为91.8%）；头孢拉定胶囊（扬子江药业集团有限公司，批号为10040612，规格为250mg／粒；上海衡山药业有限公司，批号为091212，规格为250mg／粒；北京京丰制药有限公司，批号为091215，规格为250mg／粒）；乙腈（色谱纯）；其余试剂（分析纯）；水（纯化水）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱条件中，色谱柱：Shimadzu VP-ODS C18柱（250mm×4.6mm，5mm）；流动相：水-4%醋酸溶液-3.86%醋酸钠-甲醇（1564∶6∶30∶400）；流速：1.0ml／min；检测波长：254nm；进样量：20μl。

2.2 溶出条件[1][2]溶剂：以醋酸盐缓冲液（pH5.5）（取0.04mol/L醋酸钠溶液，用冰醋酸调节pH为5.5）900ml；转速：100 r/min；取样时间：45min。

2.3 测定方法 精密称取头孢拉定对照品适量（约相当于头孢拉定27mg），置100ml量瓶中，加醋酸盐缓冲液（pH5.5）超声溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过。取续滤液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。另取样品，按照2.2项下条件处理，取溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液。按“2.1”项的色谱条件，精密量取上述两种溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算出每片的溶出量。限度为标示量的80%，应符合规定。

2.3.1 回收率试验 按处方比分别精密称取相当于样品标量的50%、80%、100%的头孢拉定对照品及相应量的空白辅料，加醋酸盐缓冲液（pH5.5）适量，振摇使头孢拉定溶解，并加醋酸盐缓冲液（pH5.5）至规定浓度，摇匀，滤过。取滤液按“2.2”项的色谱条件测定，对本法的准确性进行考察。结果平均回收率为99.6%（RSD=0.8%）。

2.3.2 方法学考察 线性关系考察：精密称取头孢拉定对照品0.02574g，置25ml量瓶中，加流动相至刻度，取0.25 ml、0.5 ml、1.0 ml、1.5 ml、2.0 ml、3.0 ml、4.0ml，分别置10ml量瓶中，加流动相稀释到刻度，摇匀。精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积。以质量浓度对峰面积进行线性回归，得回归方程Y=4.12506×10-7X+0.00l79228，r=0.999 7（n=7）。结果表明，头孢拉定质量浓度在0.02174～1.0236g/L范围内与峰面积线性关系良好。

2.3.3 溶出曲线的绘制[1][2]取本品，按溶出度测定法（《中国药典》2005年版二部附XC第一法），以醋酸盐缓冲液（pH5.5）溶出介质，转速为10r/min，依法操作，在5min、10min、15min、30min、45min和60min时，分别以溶液5ml滤过，并及时在操作容器中补充上述溶剂5ml。另取头孢拉定对照品适量，用上述溶出介质溶解稀释制成每lml中含0.16mg的溶液，作为对照品溶液。按“2.2”项的色谱条件，精密量取上述两种溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算出每片的溶出量。结果见附表和附图。

附表 头孢拉定胶囊溶出度测定结果（方法l为UV，方法Ⅱ为HPLC）

3 讨论

从实验结果可知，头孢拉定胶囊溶出度检查采用对照品对照比自身对照所得的检验结果，与含量测定项下所测得的结果一致，即含量测定采用高效液相色谱法更能有效地分离不同的组分，减少头孢氨苄对测定的影响。说明采用对照品对照比自身对照所得的检验结果较能真实、客观地反映药品的质量。