食管鳞状细胞癌组织中POKemon和P14ARF蛋白的表达

荣爱梅，郭长青

郑州大学第一附属医院消化内科郑州450052

(2010-11-24收稿 责任编辑 王 曼)

POKemon基因即POK红系髓性致癌因子，是POK转录抑制物家族成员，能特异性抑制抑癌基因ARF，促进肿瘤的发生发展［1］。该基因在肝癌、非小细胞肺癌、鼻咽癌、乳癌及恶性胶质细胞瘤等多种肿瘤组织中表达明显增高［2-6］。P14ARF是细胞周期依赖性激酶4抑制因子家族中的一员，通过细胞周期的调控发挥抑癌作用［7］。作者通过检测POKemon和P14ARF蛋白在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)及正常组织中的表达，探讨POKemon和P14ARF与ESCC发生发展的关系及临床意义。

1 材料与方法

1.1 标本来源 选用郑州大学第一附属医院病理科2009年1月至2010年3月经病理证实的ESCC患者的病理组织蜡块88例及部分相应的正常食管黏膜组织蜡块28例，均为胸外科手术切除标本。患者术前均未接受过放化疗及免疫治疗，男65例，女23例，年龄45～74岁;高分化23例，中分化40例，低分化25例;TNM分期Ⅰ、Ⅱ期49例，Ⅲ、Ⅳ期39例;有淋巴结转移32例，无淋巴结转移56例。

1.2 POKemon及P14ARF蛋白的免疫组化染色POKemon、P14ARF兔抗人多克隆抗体均购自北京博奥森生物技术有限公司，抗体工作浓度分别为1∶100和1∶200。SP-9001免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司，采用SP三步法，按试剂盒说明操作，DAB显色，苏木素复染，盐酸乙醇分色。以PBS替代一抗作为空白对照，用已知阳性片作阳性对照。

1.3 结果判定 POKemon和P14ARF蛋白阳性表现为胞膜及胞质出现棕黄色染色。每张切片取5个400倍视野，首先按染色强度计分:无染色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分;然后计数阳性细胞:阳性细胞百分数＜5%为0分，5% ～为1分，25% ～为2分，≥50%为3分;两项积分之和≤3分为阴性(－)，＞3分为阳性(+)。

1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0进行分析。正常食管黏膜和ESCC组织中2种蛋白阳性表达率的比较应用配对χ2检验，不同临床病理特征的ESCC组织中2种蛋白阳性表达率的比较应用χ2检验，以列联系数评估ESCC组织中2种蛋白表达的关系，检验水准 α=0.05。

2 结果

2.1 正常食管黏膜和ESCC组织中P14ARF和POKemon的表达 见图1、表1。

图1 正常食管黏膜及ESCC组织中POKemon和P14ARF免疫组化染色(SP，×400)A，B:分别为ESCC及正常食管黏膜组织中POKemon蛋白的表达;C，D:分别为正常食管黏膜及ESCC组织中P14ARF蛋白的表达。

表1 正常食管黏膜及ESCC组织中POKemon和P14ARF蛋白的表达 例

2.2 ESCC组织中POKemon和P14ARF蛋白表达与临床病理特征的关系 见表2。

2.3 ESCC组织中POKemon和P14ARF蛋白表达的关联性分析 见表3。

表2 POKemon和P14ARF蛋白的表达与ESCC临床病理特征的关系

表3 ESCC组织中POKemon和P14ARF蛋白表达的关联性 例

3 讨论

癌基因POKemon是近年发现的转录抑制因子，广泛存在于人类成熟组织的细胞系中。Stogios等［8］研究表明POKemon的POZ结构域是一个转录调节器，POKemon抑制多种重要基因的转录，包括ARF、c-fos和 c-myc等。Maeda等［1］研究发现，POKemon过表达无论在转基因鼠的体内还是体外都导致了明显的致癌性细胞转化，说明POKemon与肿瘤有着密切的关系。该研究结果表明，POKemon在ESCC癌组织中高表达，而在正常组织中低表达，POKemon的表达与ESCC的TNM分期和淋巴结转移有关，而与性别、年龄及分化程度无关。说明POKemon在ESCC的发生及浸润转移中起重要作用。

抑癌基因P14ARF位于INK4a/ARF基因位点，此基因位点在人染色体9p21上，可编码 P16和P14ARF 2种蛋白。P14ARF对细胞周期有显著的负性调控作用，多种研究［9-10］表明其抑癌机制为通过P14ARF的N端与MDM2的C端结合，抑制MDM2在胞核与胞质中穿梭，促使其降解，从而抑制P53的降解，将细胞周期阻断在G1期和G2/M转换期或促进凋亡，抑制肿瘤发生。也有研究［11］认为P14ARF可以通过非依赖p53途径发挥抑癌作用。Cheng等［12］研究表明在人ESCC组织中P53的表达与MDM2、P14ARF有关，并且P14ARF常见于P53和MDM2都表达阳性的标本。由以上研究可以推断ESCC的发生可能是通过下调ARF→上调MDM2→下调p53→肿瘤发生。该研究结果显示P14ARF在ESCC中低表达，P14ARF的表达与ESCC组织的分化程度有关，而与性别、年龄、TNM分期和淋巴结转移均无关。

该研究结果还显示，ESCC中 POKemon与P14ARF表达呈负相关，两者表达失衡可能导致肿瘤的发生。POKemon与P14ARF在多种肿瘤组织(乳癌［13］、非小细胞肺癌［3］等)中的表达具有相关性，并且POKemon是P53途径的一个重要的控制器［14］。POKemon致癌机制可能为POKemon的过表达特异性抑制 P14ARF的转录活性，通过 ARFMDM2-P53途径促使肿瘤发生。

综上所述，POKemon与P14ARF在ESCC发生发展中发挥着重要作用，有望成为ESCC诊断、基因治疗的新靶点和预后判断的重要指标。

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