上皮钙黏蛋白和黏附分子CD44V6及基质金属蛋白酶2在贲门癌中的表达及意义

安继荣，张亚珍，刘小峰，陈乐天

贲门癌为消化道常见恶性肿瘤，占胃癌的15%～20%，占食管癌的11%～50%，发病年龄在40～70岁。贲门癌起源于食管胃结合部，在解剖组织学、生理特点、发病情况、细胞学方面有许多与胃癌不同的特征，更具有本身独特的临床表现和诊治方法，其治疗效果远逊于胃癌［1］。本研究选择近年来研究较为广泛的与肿瘤转移密切相关的上皮钙黏蛋白 (E－cadherin，E－cad)以及近年来备受关注的与癌转移高度相关的黏附分子CD44V6、基质金属蛋白酶2(MMP－2)进行研究，探讨三者在贲门癌中的表达及其与淋巴结浸润转移的关系，为临床判断预后及早期发现转移提供依据。

1 材料与方法

1.1 标本来源 选取2006—2009年在天水市第四人民医院行手术治疗的64例贲门癌患者，其中男40例，女24例;年龄39～85岁，平均54岁;病理类型均为腺癌;贲门癌的分级按照WHO的标准分为:高分化 (Ⅰ级)9例，中分化 (Ⅱ级)24例，低分化 (Ⅲ级)31例。术前未进行放疗、化疗或其他特殊治疗。另选取其中20例贲门癌患者的癌旁组织切片作为对照，其中男15例，女5例。贲门癌组织石蜡标本及癌旁组织标本均经10%甲醛溶液固定，4 μm厚连续切片，HE染色，病理诊断证实。

1.2 主要试剂 鼠抗人E－cad蛋白单克隆抗体及SP试剂盒购于福州迈新生物技术开发有限公司。鼠抗人CD44V6单克隆抗体、鼠抗人MMP－2单克隆抗体及S－P免疫组化染色试剂盒其中包括过氧化酶阻断液、10%非免疫动物血清、生物素标记的第二抗体、链霉素抗生物素－过氧化物酶溶液，购于北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 方法 蜡块行4 μm厚度的切片2张，贴于经多聚赖氨酸处理的玻片上，58℃烘烤24 h。1张行HE染色复查诊断，1张行免疫组织化学研究，染色方法严格按照SABC试剂盒说明书步骤进行。DAB显色，苏木素复染，中性树胶封固，以PBS代替一抗作为阴性对照，用已知阳性切片作阳性对照。

1.4 结果判断 E－cad蛋白阳性判断标准:E－cad着色部位为细胞膜，呈棕黄色或黄色;在高倍镜下随机观察10个高倍视野，每个视野下计数1 000个细胞，阳性细胞数占全部肿瘤细胞数的百分比＞75%为表达强阳性 (+++)，51%～75%为表达阳性 (++)，25%～50%为表达弱阳性 (+)，＜25%为表达阴性 (－)。

CD44V6蛋白阳性判断标准:CD44V6蛋白阳性表达主要定位于细胞膜，呈棕黄色颗粒。

MMP－2蛋白阳性判断标准:MMP－2蛋白以细胞质中出现棕黄色颗粒为阳性，即随机选取5个高倍视野计数阳性细胞百分比平均数。无阳性细胞为0分，≤25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分;着色强度以多数阳性细胞呈现的染色计分，无着色计0分，淡黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分;将阳性细胞百分比着色强度两者计分相加，0～2分为阴性 (－)，≥3分为阳性 (+)。

1.5 统计学方法 使用χ2检验计算器V 1.61软件分析数据，结果均采用χ2检验。P＜0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 贲门癌组织及癌旁组织中E－cad、CD44V6、MMP－2的表达 E－cad在癌旁组织中阳性表达率为85.7%，而CD44V6、MMP－2在癌旁组织中基本不表达，三者在贲门癌组织中的阳性表达率分别为20.6%、60.9%和64.1%，E－cad表达明显低于癌旁组织，而CD44V6、MMP－2表达明显高于癌旁组织，两组间差异有统计学意义 (P＜0.05，见表1)。

2.2 贲门癌组织中E－cad、CD44V6、MMP－2的表达与患者临床病理特征的关系 贲门癌分化程度不同，癌组织中E－cad、CD44V6、MMP－2阳性表达率间差异有统计学意义 (P均＜0.05);随着分化程度的降低，E－cad阳性表达率降低，而CD44V6、MMP－2阳性表达率升高。

淋巴结转移的贲门癌组织中E－cad的阳性表达率显著低于无淋巴结转移者，而CD44V6、MMP－2的阳性表达率则显著高于无淋巴结转移者，差异均有统计学意义 (P＜0.05，见表2)。

表1 贲门癌组织及癌旁组织中E－cad、CD44V6、MMP－2的表达比较 (例)Table1 Expression of E－cad，CD44V6，and MMP－2 in gastric cardia cancer and adjacent tissues

表2 贲门癌组织中E－cad、CD44V6、MMP－2的表达与患者临床病理特征的关系［n(%)］Table2 Relationship between E－cad，CD44V6，MMP－2 expression in cardiac tissues and the clinicopathological features of gastric cardia carcinoma

3 讨论

E－cad主要介导同种细胞间的黏附反应，同时又能通过细胞骨架相互传递信息，其结构与功能变化直接影响肿瘤细胞脱离原发灶而发生转移，它的变化与上皮恶性肿瘤的分化程度、侵袭、转移等生物学行为存在着密切联系［2］。目前，多以E－cad表达的降低或消失来判断肿瘤细胞上皮间质转化和肿瘤细胞转移［3］，国内外有关研究表明E－cad在乳腺、肝、胃、肠、膀胱、前列腺及卵巢等恶性肿瘤中有不同程度的表达减弱或缺失。本研究结果显示，E－cad在贲门癌中表达明显低于癌旁组织，在高分化、中分化、低分化贲门癌组织中的阳性表达率分别为44.4%(4/9)、8.3%(2/24)和3.2%(1/31)，这说明E－cad在贲门癌中的表达与肿瘤分化程度密切相关，肿瘤病理分化程度越低，其阳性表达率越低、表达强度越弱;此外，E－cad的表达还与肿瘤淋巴结转移密切相关，本研究发现淋巴结未转移者与淋巴结转移者E－cad阳性表达率分别为20.7%和2.9%，说明E－cad表达的越低，肿瘤区域淋巴结转移的可能性越高，所以E－cad表达的检测与贲门癌细胞分化程度、病理分级及局部淋巴结侵袭和转移密切相关，它将可能成为判断预后较有价值的客观指标之一。

CD44指白细胞分化抗原分化簇第44号，是一个典型的单拷贝基因多种表型的细胞表面跨膜蛋白多糖分子，位于人类CD44基因的11号染色体短臂上 (11p13)，分为两种:标准型CD44(CD44s)和变异型CD44(CD44V)，后者主要包括CD44V3、CD44V5、CD44V6、CD44V9等。CD44具有重要的生物学功能，如局部透明质酸的清除、淋巴细胞归巢、T细胞激活、肿瘤形成和转移等，CD44V6是第一个被发现与肿瘤转移有关的CD44黏附分子，在多种肿瘤中表达能显著增强肿瘤细胞的侵袭转移能力［4］。本组患者CD44V6在高分化、中分化、低分化组织中的阳性表达率分别为2/9、37.5%和90.3%，淋巴结未转移组37.9%，淋巴结转移组80.0%，表明CD44V6与贲门癌的细胞分化程度及淋巴结转移有密切关系，今后有可能把它作为判断预后的指标之一。

基质金属蛋白酶 (MMPs)是降解基质最重要的酶类，与肿瘤的侵袭、转移有密切的联系。MMP－2是MMPs家族中重要成员，不仅能降解细胞间基质，还能降解基质胶原，有利于细胞迁移，是肿瘤浸润转移的生化基础［5］。本研究发现MMP－2在癌旁组织中基本不表达，在贲门癌组织中的阳性表达率为64.1%，并且MMP－2在高分化、中分化、低分化癌组织中的阳性表达率分别为3/9、41.7%和90.3%，淋巴结未转移组和淋巴结转移组MMP－2阳性表达率分别为48.3%和77.1%，提示MMP－2在降解细胞外基质及基底膜的同时促进了肿瘤细胞沿着缺失的基底膜向周围组织浸润，进而增强了肿瘤血管生成作用，最终导致肿瘤侵袭转移，这说明MMP－2与贲门癌的基质浸润及淋巴结转移密切相关。

综上所述，E－cad、CD44V6、MMP－2可能成为贲门癌临床诊断、判断预后及疗效的敏感指标，并可能用于临床基因治疗，联合检测对判断治疗疗效有重要意义，但还需要进一步大量病例分析总结。

1 李泽坚.实用临床胸外科学［J］.北京:科学技术文献出版社，2007:424－425.

2 李小俊，马秀英.黏附分子与肿瘤侵袭和转移研究进展［J］.现代肿瘤医学杂志，2011，19(3):615－616.

3 王永兴，姜永光.上皮间质转化在前列腺癌中的研究进展［J］.临床泌尿外科杂志，2011，2(4):306－307.

4 周荣平.黏附分子CD44的表达与大肠癌生物学特性间的关系［J］.现代肿瘤医学杂志，2011，19(3):492－493.

5 王秀清，刘惠民，赵琰龙，等.乳腺癌组织中CD44V6和MMP－2的表达及其与淋巴结转移关系［J］.现代肿瘤医学杂志，2011，19(2):272－273.