高效液相法测定抗骨增生胶囊中淫羊藿苷的含量

蒋华科 陈纯 陈仲新

抗骨增生胶囊是中国药典载入品种［1］，由熟地黄、鸡血藤、肉苁蓉、莱菔子、狗脊、骨碎补、女贞子、牛膝、淫羊藿复配制成。具有补腰肾，强筋骨，活血，利气，止痛的功效。临床上常用于治疗增生性脊椎炎(肥大性胸椎炎，肥大性腰椎炎)，颈椎综合征，骨刺。我们按照药典规定进行了产品试制，并建立了主要有效成分淫羊藿苷的检测方法，以控制产品质量。

1 仪器与试药

PERKIN ELMER高效液相色谱系统:Series 200 LC四元低压梯度泵;Model 785A紫外检测器;NELSON 200 Series色谱工作站;200 Series自动进样器(100 L)。淫羊藿苷对照品购自中国药品生物制品检定所，含量测定用，批号:110737-200413。抗骨增生胶囊为自制(批号:110225、110228、110311);阴性对照样品(按处方除去淫羊藿按制法工艺制成)。分析用乙腈为色谱纯，水为三重蒸馏水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:AgilentC18，5 μm，250×4.6 mm(Agilent公司产);柱温:室温;流动相:乙腈-水(30∶70);流速1.0 ml/min;检测波长:270nm，进样量20 μl。在此色谱条件下，淫羊藿苷可达到基线分离，见图1，2。理论板数按淫羊藿苷峰计算不低于1500。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液制备 精密称取干燥至恒重淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含淫羊藿苷对照品20 g的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品胶囊内容物，混匀，研细，取约1 g，精密称定，置100 ml具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率33kHz)1 h，放冷，用稀乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 线性关系的考察 精密称取淫羊藿苷对照品2.35 mg，置10 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。精密吸取此溶液1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得淫羊藿苷对照品溶液(浓度为23.5 μg/ml)。精密吸取上述对照品溶液 10、20、30、40、50 μl，分别注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品进样量X(g)为横座标、进样峰面积Y(uv.s)为纵座标，绘制标准曲线，结果表明淫羊藿苷对照品在0.235～1.175 g/ml范围内具有良好的线性关系。

2.4 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液20 μl，重复进样6次，测定，记录峰面积，求得相对标准偏差 RSD为0.69%，结果说明仪器的精密度良好。

2.5 重现性试验 称取样品6份，每份1 g，精密称定，按供试品溶液制备方法操作，依法进样测定，计算含量，求得相对标准偏差RSD为1.50%。结果表明，本法测定具有良好的重现性。

2.6 稳定性试验 精密吸取供试品溶液，在室温下，分别于配制后0、2、4、18 h进行淫羊藿苷峰面积测定，每次进样20 μl，测得供试品溶液于18 h内的峰面积平均值为731445.37，RSD为0.47%。结果表明供试品溶液在18 h内稳定。

2.7 专属性试验 精密称取缺淫羊藿的阴性对照样品，同供试品溶液制备方法制备阴性对照样品溶液，经同法高效液相色谱法进样测定，记录色谱图，结果见图3。对比图1、2、3，抗骨增生胶囊供试品在与淫羊藿苷对照品相同保留时间处有吸收峰，而阴性对照品在与淫羊藿苷对照品相同保留时间处无吸收峰，说明阴性无干扰。

2.8 回收率试验 采用加样回收法，称取已知含量的同一批抗骨增生胶囊(淫羊藿苷含量为0.853 mg/粒，含量折算为2.437 mg/g)0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入对照品溶液1 ml(淫羊藿苷对照品浓度为1.006 mg/ml)，照供试品溶液制备方法制备。按正文方法，进样，测定，计算，求得淫羊藿苷平均回收率为99.46%，RSD=1.74%，结果见表1。结果表明，本法回收率较好，方法可行。

表1 淫羊藿苷回收率试验

表2 样品含量测定(n=3)

2.9 样品测定 精密称取抗骨增生胶囊(批号:110225、110228、110311)，照供试品溶液制备方法制备，分别精密吸取供试品溶液20 μl，按上述色谱条件测定，计算样品中淫羊藿苷的含量。结果见表2。

图1 淫羊藿苷对照品的HPLC图谱

图2 抗骨增生胶囊样品的HPLC图谱

图3 抗骨增生胶囊阴性对照样品的HPLC图谱

3 讨论

淫羊藿苷能增加心脑血管血流量、促进造血功能、免疫功能及骨代谢，具有补肾壮阳、抗衰老、抗肿瘤等功效［2］，是抗骨增生胶囊配方中最重要的功效成分。通过高效液相色谱法建立淫羊藿苷的含量测定方法，可对产品质量有较客观的判断。通过上述实验结果，我们认为该方法简便，准确，可有效的控制抗骨增生胶囊产品质量。

［1］中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典(一部).中国医药科技出版社，2010.

［2］郑虎占，董泽宏，佘靖.中药现代研究与应用(第五卷).学苑出版社，1998.