高效液相色谱法测定溃平宁颗粒中延胡索乙素含量

王建东，谢浙裕，柴军

(浙江省绍兴市食品药品检验所，312071)

溃平宁颗粒是由大黄浸膏、白芨和延胡索粗碱组成的复方制剂，具有抑制胃酸分泌、降低胃蛋白酶活性、减弱胃酸酸度，从而有效地抑制黏膜损害因子的作用;可隔离胃及十二指肠内消化液与黏膜溃疡面的接触，促进溃疡面的愈合，抑制幽门螺杆菌生长。用于胃溃疡、急慢性胃炎、十二指肠溃疡及合并上消化道出血等症。原制剂质量标准[1]只有化学鉴别，为更好地控制该药的质量，笔者选择方中延胡索粗碱的有效成分延胡索乙素为含量测定对象，采用高效液相色谱法对延胡索乙素的含量进行控制。中药复方制剂中延胡索乙素的含量测定方法已有报道[2-5]，但笔者尚未见到对该药中延胡索乙素进行含量测定的报道。笔者在本实验中所建立的方法回收率高，分离度好，方法简便，适于该药的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器Agilent1100高效液相色谱仪，VWD紫外检测器;Chemstation色谱工作站。

1.2 试药延胡索乙素对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110726-200208)，溃平宁颗粒(吉林省长源药业有限公司，批号:20070501，20080307，20080405)，甲醇为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件Agilent Zorbax XDB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相:乙腈-1%冰醋酸(三乙胺调pH=5.0)(23∶77)，流速:1.0 mL·min-1，柱温:30℃;检测波长:280 nm。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取延胡索乙素对照品10.72 mg，置于100 mL量瓶，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液;精密吸取5.0 mL置25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得0.021 44 mg·mL-1的延胡索乙素对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备取5袋溃平宁颗粒内容物，研细，取约0.4 g，精密称量，置于具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇25 mL，超声处理60 min，放冷，再称定质量，用60%乙醇补足减失的质量，摇匀，高速离心，取上清液，即得。

2.2.3 阴性供试品溶液的制备根据溃平宁颗粒处方，取不含延胡索粗碱的处方量药材，按制备工艺制备缺延胡索乙素的阴性样品，按“2.2.2”项方法制成缺延胡索乙素的阴性供试品溶液。

2.3 系统适应性实验分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。理论板数以延胡索乙素计＞6 000;供试品色谱中延胡索乙素与相邻峰为基线分离;阴性供试品溶液色谱图中在延胡索乙素保留时间处无吸收峰，说明无干扰(图1)。

图1 3种溶液的高效液相色谱图

2.4 线性关系考察分别精密吸取对照品储备溶液1，2，5，10，15，20 μL，按“2.1”项色谱条件，进样，测定延胡索乙素峰面积。以进样量(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程:Y=913.4X－3.6(r=0.999 9)。结果表明，延胡索乙素在进样量为0.107 2～2.144 μg范围内呈良好的线性关系。

2.5 稳定性实验精密吸取对照品溶液10 μL，按“2.1”项色谱条件，分别于0，1，2，4，6，8 h各进样测定1次，结果延胡索乙素峰面积的RSD为0.8%(n=6)。表明该溶液在8 h内稳定。

2.6 精密度实验精密吸取对照品溶液10 μL，按上述色谱条件，连续进样6次，其峰面积的RSD为0.6%，说明该方法精密度良好。

2.7 重复性实验取同一批号样品(批号:20070501)6份，平行处理，处理方法同“2.2.2”项，测定并计算含量。结果6份含量的RSD为1.0%。

2.8 加样回收率实验取批号为20070501的样品(延胡索乙素含量为1.693 6 mg·g-1)，研细，精密称取9份，分别加入0.8，1.0，1.2 mL延胡索乙素对照品溶液(浓度为0.321 6 mg·mL-1)，挥去溶剂，精密加入60%乙醇25 mL，按“2.2.2”项制备方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液10 μL，按“2.1”项色谱条件测定，计算回收率，结果见表1。平均回收率101.1%，RSD=1.2%。表明本方法回收率好，方法可行。

2.9 样品的含量测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，按上述色谱条件进行测定，按外标法以峰面积计算含量。结果批号为20070501，20080307，20080405的样品，延胡索乙素含量分别为1.69，1.70，1.68 mg·g-1。

表1 溃平宁颗粒中延胡索乙素回收率实验结果

3 讨论

选择供试品溶液制备方法时，笔者查阅相关文献，有报道采用60%乙醇提取、氨-乙醇(1∶25)、氨-甲醇(1∶25)提取。经过实验，发现60%乙醇和氨-甲醇(1∶25)提取较完全，且基本一致，因考虑到甲醇毒性较乙醇大，因此采用60%乙醇作为提取溶剂。在选择提取方法时，《中华人民共和国药典》2010年版及相关文献采用超声或回流方式，笔者对这两种方法进行比较，两种方法测得的结果基本一致，同时对提取时间进行考察，分别对30，60，90 min提取的样品进行含量测定，结果超声或者回流60 min提取已经较完全，因此提取方法采用60%乙醇，超声60 min。而2010年版《中华人民共和国药典》元胡止痛片采用甲醇提取，中性氧化铝柱纯化的方法比较复杂，并未采用。选择测定波长时，结合文献资料，确定测定波长为280 nm。流动相选择，笔者对文献应用的流动相进行比较:①甲醇-0.02%磷酸(40∶60)，对照品峰形良好，而样品峰形差、理论板数低且分离度差;②甲醇-0.04%磷酸(三乙胺调pH=3.5)，对照品峰形差，理论塔板数低，而且pH越大峰形越差;③乙腈-0.01%磷酸(三乙胺调pH=5.0)，峰形差，样品分离度低;④乙腈-0.8%冰醋酸(三乙胺调pH=5)，峰形良好，周围无杂质峰干扰，且理论板数＞10 000。因此采用乙腈-1%冰醋酸(三乙胺调pH=5.0)作为流动相。笔者也考察过甲醇-水、乙腈-水系统，不调pH，发现峰形都不对称，前拖尾很严重。

[1]卫生部药品标准中药成方制剂第三册[S].179.

[2]汪玲，程贝，罗兰，等.元胡止痛分散片中延胡索乙素的含量测定[J].医药导报，2009，28(1):114－115.

[3]范成杰，徐增香.HPLC测定安胃片中的延胡索乙素的含量[J].中国医疗前沿，2008，3(14):96－97.

[4]李健，杨涛，宋毅，等.HPLC测定气滞胃痛颗粒中的延胡索乙素[J].华西药学杂志，2008，23(3):375.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:525－527.