MITF 、S-100 蛋白 、HMB45 在黑素瘤以及色素痣中的表达及意义

尹占东,夏建新,王延龙,王劲风,牟 妍,梅向林,倪劲松

(1.吉林大学第二医院皮肤科,吉林长春 130041;2.吉林大学基础医学院病理生物学重点实验室,吉林长春 130021;3.松原占东皮肤科诊所,吉林松原 138000）

黑素瘤的病理表现千变万化,免疫染色尤为重要。到目前为止,我们常用的黑素细胞的标记物有S-100蛋白和HMB45,S-100蛋白敏感性高,但缺乏特异性,除了黑素细胞以外,雪旺细胞、肌上皮细胞、脂肪细胞、软骨细胞、组织细胞以及郎格罕细胞均阳性。而HMB45特异性较强,但敏感性较低,尤其对梭形细胞黑素瘤、促纤维生成性黑素瘤不表达。MITF(Microphthalmia Transcription Factor）是一微小转录因子,国外多数学者认为MITF是一敏感性和特异性均较强的诊断黑素瘤和色素痣的免疫标记物。为了探讨MITF、S100蛋白以及HMB45在黑素瘤、色素痣中的表达情况,做了以下实验。

1 材料和方法

1.1 实验材料鼠抗人S-100蛋白单克隆抗体、鼠抗人HMB45单克隆抗体、PV9000以及 DAB、AEC显色试剂盒均购于北京中杉金桥生物技术有限公司,NCL-MITF鼠多克隆抗体购于Novocastra Laboratories公司。石蜡包埋组织标本来源于日本九州大学皮肤科以及吉林大学第二医院皮肤科,共收集黑素瘤标本32例,色素痣4例,蓝痣2例及Spitz痣2例。

1.2 实验方法

1.2.1 载玻片及标本处理 将载玻片行硫酸浸泡、自来水冲洗、乙醇浸泡、烤箱烤干后用多聚赖氨酸包被、备用。将石蜡包埋组织标本进行薄切3.5 μ m,置于事先处理好的载玻片上,37℃过夜烤干。将标本常规脱蜡、脱水。做HMB45免疫染色时,将标本用微波加热进行抗原修复,做MITF免疫染色时,将标本进行高压处理,进行抗原修复,S100蛋白免疫染色无需抗原修复。

1.2.2 免疫染色 具体步骤按操作说明书进行,AEC显色剂显色,显微镜下观察。

MITF抗体的免疫染色缓冲液为TBS,而S-100蛋白及HMB45抗体的免疫染色缓冲液为PBS。

1.2.3 结果判断 S-100蛋白和HMB45阳性部位为细胞质见棕褐色颗粒,阳性细胞＞75%为(+++）,＞50%为(++）,＞25%为(+）,＜25%为(-）;MITF为细胞核着色,＞10%即判为(+）。

2 结果

2.1 黑素瘤的组织病理分型32例黑素瘤标本中,表浅扩散型(SSM）6例,结节型(NM）5例,恶性雀斑样痣型(L MM）6例,末端雀斑样痣型黑素瘤(ALM）9例,转移至皮肤的黑素瘤3例,淋巴结转移标本3例。细胞学分类中多数为上皮样细胞型,其中梭型细胞黑素瘤2例。

2.2 S-100蛋白、HMB45、MITF在黑素瘤以及色素痣中的表达见表 1及图 1、2、3。

表1 S-100蛋白、HMB45、MITF在黑素瘤、色素痣中的表达

从S-100蛋白免疫染色结果中看到:黑素瘤的阳性率为96.8%(图1）,色素痣的阳性率为100%。正常人表皮黑素细胞、肌上皮细胞,部分纤维细胞均阳性,4例色素痣、2例蓝痣以及2例Spitz痣均阳性。在HMB45免疫染色中看到:黑素瘤的阳性率为81.2%(图2）。其阳性仅出现于黑素瘤、活跃的色素痣和Spitz痣(图3）,正常表皮黑素细胞不表达。从MITF的免疫染色结果可以看到:黑素瘤的阳性率为96.8%,色素痣的阳性率为100%。除黑素细胞、痣细胞以及黑素瘤细胞阳性外,其余皮肤组织未见阳性反应。

图1 MM S100蛋白(+++,SP法×200）

图2 MM HMB45(SP×400）

图3 Spitz痣HMB45(+++）(sp×200）

3 讨论

恶性黑色素瘤(Malignant Melanoma,MM）是一种高度恶性的肿瘤,其诊断除临床、组织病理外,免疫染色尤为重要。本研究通过免疫染色的方法观察了32例黑素瘤、4例色素痣、2例蓝痣以及2例Spitz痣中MITF、S-100蛋白以及HMB45的表达情况,结果显示:S100蛋白在诊断黑素瘤以及色素痣中具有较高的敏感性,其阳性率分别为96.8%和100%,此结果与国内外的一些文献报道相一致[1],但由于S100蛋白除黑素细胞,黑素瘤细胞外,在神经胶质细胞以及来源的肿瘤、雪旺细胞以及来源的肿瘤、正常横纹肌、心肌、脂肪细胞、成纤维细胞等均有表达,因而一些与上述相关的肿瘤也均表达S100蛋白[2,3],在本实验中也观察到毛囊肌上皮细胞和部分纤维细胞也表达S100蛋白,因而,S100蛋白在诊断黑素瘤以及色素性皮肤病中具有敏感性高而特异性低的特点,临床应用受到一定限制。在HMB45染色中观察到,其阳性仅出现于黑素瘤和增生活跃的黑素细胞,如交界痣细胞、Spitz痣中真表皮交界处的细胞,皮肤组织中的其他成分也未见阳性反应,提示HMB45对黑素瘤的诊断具有较高的特异性[4]。MITF是黑素细胞的核蛋白,对黑素细胞的生成和活性起着关键性作用,调节包括黑素细胞起源的细胞如黑素母细胞、黑素细胞以及黑素瘤细胞的形态、分化和生存[5]。但对于MITF在色素性疾病以及黑素瘤中的表达情况国外文献报道并不一致[6,7,8],国内尚未见到相关文献报道。在观察Ncl-MITF的染色中发现,Ncl-MITF在皮肤组织中几乎出现在所有黑素瘤细胞、色素痣细胞、以及正常黑素细胞中,在黑素瘤中的阳性率为96.8%。在色素痣、蓝痣以及Spitz痣中均表达,此表达阳性率与S100蛋白在黑素瘤以及色素痣中的表达相同,同时,Ncl-MITF对于皮肤组织的其他成分均无反应,此点又与HMB45的表达情况相似,因此,Ncl-MITF是一种对于黑素瘤的诊断敏感性和特异性均较强的免疫标记物[6]。MITF阴性出现在1例患者,此标本S-100蛋白及HMB45均阳性,从中可以看出,对于MM的诊断要结合临床、组织病理以及多项免疫组化指标进行综合分析判断,最终得出正确的结论。

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