“CK-MB”测定的干扰现象及实验对策

彭 兰,张 娥,万 芳,邹志宝

(兴山县人民医院,湖北 兴山 443711）

用免疫抑制法检测血清CK-MB活性,观察其活力单位及与CK的比值关系作为诊断急性心肌梗死的相对特异性指标、预测冠状动脉再通的治疗效果和观察病情变化等,已被临床广泛应用。一般情况下正常人CK-MB主要存在于人体心肌细胞内,血清中CK的存在形式主要是CK-MM,只有少量CK-MB,不超过总活性的5%,心肌梗死发生时最高值也不超过38%。但在日常检测工作中经常发现临床血清标本中CK-MB检测值与理论值不符合,最多见的就是CK-MB检测值大于总CK检测值的现象。现就肌酸激酶及其同工酶的组成、临床意义和检测的方法学等方面简要分析其原因并就解决方法提出建议。

CK-MB存在于心肌细胞胞浆中,CK-MB作为诊断急性心肌梗塞或心肌坏死的特异时指标,在心肌坏死症状发作4-5 h达正常上限,12-24 h达高峰,72 h逐步恢复。基层实验室多采用免疫抑制法测定CK-MB,对不同病程的心肌病提供较特异诊断,本室通过3组不同人群的CK-MB测验结果发现,采用免疫抑制法测定CK-MB指标有假性增高现象,与临床体征明显不符,现先从实验原理探讨;免疫抑制法测定CK-MB是用抗体将M亚基抑制,测定

B亚基,结果乘以2即为CK-MB活性,当血清中出现文献报道中的巨CK或CK-BB及其它成份时,由于它们不受抗M亚基抗体抑制,其活性已完全测出,再乘以系数2,就可能出现CK-MB升高或高于总CK的现象,造成CK-MB结果失真,本室从1999.9-2000.5共收集71份血清测定CK-MB及总CK活性,现将实验中出现的异常结果提出探讨。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本来源 收集10份本院血库健康献血员血清,收集56份本院心内科病员血清,收集15份本院恶性肿瘤病员血清。

1.1.2 试剂及仪器 上海长征公司提供的冻干粉剂,CB-171半自动化分析仪。

1.2 方法

1.2.1 正确收集血清标本,防止溶血,从血清采集到测定完毕在30 min以内。

1.2.2 采用免疫抑制法测CK-MB及酶偶联速率测总CK。

2 结果与讨论

2.1 3组人群血清中CK-MB,总CK的测定结果见表1。

表1 3组人群血清CK-MB、总CK测定结果

2.2 本室对10名献血员进行CK-MB检测,发现一例CK-MB值异常升高,达总CK活性的61%,经体检证实为健康人员,在56名心内乎病员血清中,有16例CK-MB结果升高,基中有两份大于总CK活性,数值为 264U/L,272 U/L;其余平均值达总CK35%。经临床追踪调查,实验诊断与临床体征明显不符,实验结果存在干扰成份;在15名恶性肿瘤血清中有7份血清CK-MB结果升高,其中一份大于总CK,数值为269 U/L。其平均值达总CK活性的22.3%,临床诊断排除心肌病,确定为乳腺癌2例,卵巢癌1例,肺癌2例,胃癌 1例,肝癌1例。在56名心内科病员血清中有28份标本CK-MB和总CK结果同时升高,经临床证实,均系心肌病患者,具相应的临床体征,在15份恶性肿瘤病员的血清中有一例CK-MB及总CK结果同时升高,临床诊断为肺癌合并心肌病,本室测定的总CK单项活性增高数值范围介于242-305 U/L,本文未做分析。

2.3 通过表1数据表明,采用免疫抑制法测定CKMB实验中存在干扰成分,基于基层实验条件有限,具体干扰成分的确认实验无法进行,现将部分文献资料提示的干扰产生分析原因如下,以共商榷:

血清中存在的巨CK1,巨CK1是一种CK同工酶抗原与自身抗体的复合物,最多的CK-BB与IgG或IgA的复合物,也有少数CK-MM与IgG或IgA的复合物,巨CK1可至CK-MB假性增高,对有心肌缺血的患者,易引起错误的判断,故在对临床解释结果应高度注意。

巨CK2是一种低聚的线粒体CK,又称CKMt,存在细胞线粒体膜上,当线粒体崩解时,线粒体膜的小碎片进入血液,故ckmt呈低聚状态,CK-Mt的抗原性与CKM和CKB不同,故抗M抗体不能抑制CK-Mt,形成CK-MB的假阳性。较多文献认为,巨CK2与恶性肿瘤密切相关,根据本室15例恶性肿瘤病员血清检测CK-MB有7例结果升高的情况,进一步证实,在恶性肿瘤中血清存在特殊干扰成份,可致CK-MB假性升高。用免疫抑制法测定CK-MB时,如出现CK-MB高于总CK的现象时,就要怀疑有巨CK的存在。多见于一些自身免疫病患者血清。进一步进行鉴定方法有:

①琼脂糖凝胶电泳分析。可疑血清进行琼脂糖凝胶电泳结合荧光染色扫描分析,发现巨CK1位于CK-MM与CK-MB之间,巨CK2位于CK-MM的阴极侧。

②热失活法。将可疑血清置45℃20 min测定CK活性,发现CK-BB和CK-MB几乎完全失活,而CK不受影响。

③免疫学结合电泳法。将可疑血清先与抗人IgG或IgA的抗血清进行混合,置4℃过夜,离心取上清液进行CK同工酶电泳。观察与Ig反应前后电泳区带的变化。巨CK2无任何变化,但巨CK1则不同。只要与相应的抗IgG或IgA抗血清发生反应后,原有的异常带减弱或消失,则提示巨CK1的存在,其形成与该免疫球蛋白有关。

④免疫学测定。用FEIA或CLIA等技术直接测定CK-MB质量,观察有无非CK-MB存在。目前建议在急性心肌梗死的诊断中建议用肌钙蛋白如cTnI/cTnT,如用CK-MB则建议测定CK-MB质量(CK-MBmass）,不要用免疫抑制法进行测定。

CK-BB,正常血清中CK-BB极少,免疫抑制测定CK-MB方法设计的前提是将CK-BB忽略不计,但当血清CK-BB增高,而用免疫抑制法测定CK-MB时,由于BB不受限制,其活性100%测出,且还乘上系数2,导致成倍的扩大误差,出现CK-MB等于或高于总CK活性的反常现象。

腺苷酸激酶(AK）,AK在红细胞和血小板中大量存在,当样本溶血或血小板未能去除的情况,AK或CK参与NADP转化成NADPH,造成假阳性。

在临床实验中,因免疫抑制法快捷,价格适中,较适宜广大基层医疗实验应用,又因是广泛应用中出现众多的“干扰”现象,使CK-MB结果部分失真,针对这种情况,本室认为,当CK-MB/总CK超过30%或50%以上,应考虑血清中有无巨CK或CK-BB存在,通常出现巨CK者往往是年龄较大的患者,女性较多,心血管疾病,恶性肿瘤,风湿病,对此合理准确地解释CK-MB实验指标及采用实验特异性更高的检测项目,在临床心肌梗死的诊断至关重要。

[1]王明雁,许绍辉.血清CK-MB琼脂糖电泳最适条件选择[J].上海医学检验杂志,1991,6(4）:269.

[2]张海晨,宋云霄,钟 琦,等.血清CK-MB活力假性增高8例分析[J].诊断学理论与实践,2005,3:236.

[3]陆奎英.免疫抑制法检测血清肌酸激酶同工酶活性高于总肌酸激酶活性的原因探讨[J].国际检验医学杂志,2006,8:748.